Apoptose induzida por diferentes tipos de virus influenza

Tese de doutoramento, Farmácia (Biologia Celular e Molecular), Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2018A gripe é uma doença provocada pelo vírus influenza, anualmente responsável por provocar epidemias sazonais com elevadas taxas de morbilidade e mortalidade. O vírus influenza tem a capacidade de interagir com mecanismos celulares do hospedeiro de modo a tornar mais eficiente o seu ciclo replicativo. Um dos mecanismos estudados, nos vírus influenza do tipo A, nos últimos anos, é a morte celular por apoptose. No entanto, os vírus influenza do tipo B não foram incluídos na maioria destes estudos, deixando uma lacuna no conhecimento nesta temática. Neste estudo, foram seleccionadas, por caracterização genética, duas estirpes representativas de vírus influenza do tipo A e do tipo B, depois utilizadas na infecção de células MDCK-SIAT1 no estudo da apoptose, através de ensaios de libertação da enzima lactato desidrogenase, coloração de Hoechst, actividade das caspases, análise de expressão de proteínas e transfecção de genes virais. Os resultados obtidos apontam para uma diferença nos perfis de indução da apoptose entre a infecção com vírus influenza do tipo A e do tipo B. Enquanto os vírus influenza do tipo A induzem a apoptose numa fase tardia da infecção, maioritariamente pela via intrínseca, os vírus influenza do tipo B induzem a apoptose numa fase inicial da infecção, recrutando as vias intrínseca e extrínseca. Os resultados revelaram, a nível celular, a via do IκB/NF-κB, e a nível viral, os genes M e NS na inibição da apoptose nos vírus influenza do tipo A bem como os genes PB2, PB1 e PA na indução da apoptose nos vírus influenza do tipo B, como possíveis responsáveis das diferenças observadas no perfil de apoptose. A compreensão das interacções vírus-hospedeiro é essencial, nos vírus influenza do tipo A e nos do tipo B, pois permite a identificação de componentes virais e/ou celulares que afectam a replicação viral e podem ser utilizados no estudo de novos alvos terapêuticos.Annual influenza epidemics are associated with high morbility and mortality rates. For successful replication, influenza viruses have evolved as to counteract and/or take a part on host defense mechanisms. Manipulation of apoptosis is one of such mechanisms that have been subject of attention, particularly in relation to influenza type A viruses over the past years. However, this knowledge has not been extended to include influenza type B viruses. In this study, were selected, by genetic characterization, two representative strains of influenza type A and type B virus that were used to infect MDCK-SIAT1 cells and study the apoptosis, through lactate dehydrogenase measurements, Hoechst dye staining, caspase activity assays, protein expression analysis and viral gene transfection. The resulting data point to a difference in induction of apoptosis profiles between influenza type A and type B viruses. While influenza type A virus induced apoptosis later in the course of infection and mainly by the intrinsic pathway, influenza type B virus induced apoptosis early in infection by both intrinsic and extrinsic pathways. Also, data revealed, in the cell, the IκB/NF-κB pathway, and, in the virus, the genes M and NS (influenza type A virus apoptosis inhibition), and the gene PB2, PB1 and PA (influenza type B virus apoptosis induction), as the major contributors for the observed differences. The study of the virus-host interactions, particularly those that could have an impact on viral replication, are essential in both influenza type A and type B viruses, as they will allow the identification of viral and/or host targets common to both influenza types, which could affect viral replication. This information may prove useful for vaccine and antiviral research