Caracterización de los receptores de kainato en un oligoendocitoma humano

Tesis doctoral de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular IV, y del Instituto de Neurobiología "Santiago Ramón y Cajal" del Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC).-- Fecha de lectura: 1998.La línea R 110 fue obtenida a partir de un tumor celular de corteza cerebral humana. Su origen oligodendrocítico ha sido demostrado por su inmunopositividad a proteína básica de mielina (MBP) y vimentina (Matute y cols, 1992). Tal origen está de acuerdo con la presencia de corrientes de potasio del tipo de rectificador de entrada (I_KIR) y de rectificador retardado (I_K), y no expresar corrientes de sodio dependientes de voltaje (I_Na).Mediante técnicas electrofisiológicas se demostró la expresión de receptores funcionales de Glutámico del tipo kainato. Dada la variabilidad en la amplitud de las respuestas registradas y la heterogeneidad poblacional se realizó un subclonaje por dilución infinita con el fin de seleccionar aquellas células que expresaban este tipo de receptores.Estas células presentaron respuestas rápidamente desensibilizantes ante la aplicación de glutamato, kainato y quiscualato y parcialmente desensibilizantes ante domoato. No se observaron respuestas a otros agonistas glutamatérgicos (AMPA y NMDA), ni a otros agentes neurotransmisores (Gly, GABA y Ach).El receptor de glutámico expresado por la línea celular R 110 fué activado por glutamato y kainato de forma dosis dependiente con EC50 de 335 mum y 15 mum, respectivamente. En presencia de agonista, el receptor sufrió una rápida y completa desensibilización siguiendo un curso temporal monoexponencial (τd = 20ms). La recuperación desde el estado desensibilizado de la respuesta de este receptor siguió igualmente un curso monoexponencial cuya velocidad varió según el agonista utilizado (τ_rec=3.6 s y τ_rec=13.7 s para glutamato y kainato, respectivamente).Las respuestas a kainato presentaron una relación corriente-voltaje (I/V) con una marcada rectificación de entrada. En algunos casos se observó una curva I/V con doble rectificación.Peer reviewe

Caracterización de los receptores de kainato en un oligoendocitoma humano

Tesis doctoral de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular IV, y del Instituto de Neurobiología "Santiago Ramón y Cajal" del Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC).-- Fecha de lectura: 1998.La línea R 110 fue obtenida a partir de un tumor celular de corteza cerebral humana. Su origen oligodendrocítico ha sido demostrado por su inmunopositividad a proteína básica de mielina (MBP) y vimentina (Matute y cols, 1992). Tal origen está de acuerdo con la presencia de corrientes de potasio del tipo de rectificador de entrada (I_KIR) y de rectificador retardado (I_K), y no expresar corrientes de sodio dependientes de voltaje (I_Na).Mediante técnicas electrofisiológicas se demostró la expresión de receptores funcionales de Glutámico del tipo kainato. Dada la variabilidad en la amplitud de las respuestas registradas y la heterogeneidad poblacional se realizó un subclonaje por dilución infinita con el fin de seleccionar aquellas células que expresaban este tipo de receptores.Estas células presentaron respuestas rápidamente desensibilizantes ante la aplicación de glutamato, kainato y quiscualato y parcialmente desensibilizantes ante domoato. No se observaron respuestas a otros agonistas glutamatérgicos (AMPA y NMDA), ni a otros agentes neurotransmisores (Gly, GABA y Ach).El receptor de glutámico expresado por la línea celular R 110 fué activado por glutamato y kainato de forma dosis dependiente con EC50 de 335 mum y 15 mum, respectivamente. En presencia de agonista, el receptor sufrió una rápida y completa desensibilización siguiendo un curso temporal monoexponencial (τd = 20ms). La recuperación desde el estado desensibilizado de la respuesta de este receptor siguió igualmente un curso monoexponencial cuya velocidad varió según el agonista utilizado (τ_rec=3.6 s y τ_rec=13.7 s para glutamato y kainato, respectivamente).Las respuestas a kainato presentaron una relación corriente-voltaje (I/V) con una marcada rectificación de entrada. En algunos casos se observó una curva I/V con doble rectificación.Peer reviewe

Caracterización de los receptores de kainato en un oligoendocitoma humano

La línea R 110 fue obtenida a partir de un tumor celular de corteza cerebral humana. Su origen Oligodendrocítico ha sido demostrado por su inmunopositividad a proteína básica de mielina (MBP) Y vimentina (Matute y cols, 1992). Mediante técnicas electrofisiológicas se demostró la expresión de receptores funcionales de Glutámico del tipo kainato. Estas células presentaron respuestas rápidamente desensibilizantes ante la aplicación de glutamato, kainato y quiscualato y parcialmente desensibilizantes ante Domoato. No se observaron respuestas a otros agonistas glutamatérgicos (AMPA y NMDA), ni a Otros agentes neurotransmisores (Gly, GABA y Ach). El receptor de glutámico expresado por la línea celular R 110 fué activado por glutamato y kainato de forma dosis dependiente con EC50 de 335 mum y 15 mum, respectivamente. En presencia de Agonista, el receptor sufrió una rápida y completa desensibilización siguiendo un curso temporal Monoexponencial (taud = 20ms). La recuperación desde el estado desensibilizado de la respuesta De este receptor siguió igualmente un curso monoexponencial cuya velocidad varió según el agonista utilizado (taurec=3.6 s y taurec=13.7 s para glutamato y kainato, respectivamente). Las respuestas a kainato presentaron una relación corriente-voltaje (I/V) con una marcada Rectificación de entrada. En algunos casos se observó una curva I/V con doble rectificación. Los Estudios de permeabilidad a calcio indicaron escasa pero nula permeabilidad de los receptores de Kainato expresados en esta línea celular a este ión. AMPA actuó como un antagonista poco potente al coaplicarlo con kainato. Los antagonistas de receptor de AMPA, CNQX y GYKI 52466 inhibieron las respuestas de kainato aunque con poca Potencia (IC sub50 de 38.5 mum y 281 mum para CNQX y GYKI 52466, respectivamente). de glutámico. Ciclotiazida (CTZ), un modulador alostérico de los receptores de AMPA, no modificó las respuestas a kainato. Por el contrario, Concanavalina A (cona) redujo la desensibilización del receptor potenciando la Respuesta al pico aproximadamente un 70%. El colorante azul de Evans (EB) presentó un efecto diferente según se perfundieran altas o bajas concentraciones de kainato. En presencia de Concentraciones saturantes de kainato, este colorante siempre bloqueó las respuestas. Sin embargo, concentraciones menores de kainato causaron potenciación o inhibición de la respuesta según la concentración de EB perfundida. Independientemente del efecto causado en la célula. Este compuesto siempre disminuyó el grado de desensibilización del receptor de kainato. En muestras de la línea R 110 y mediante la técnica de RT-PCR, únicamente se pudo amplificar la Subunidad glur6. El estudio molecular indicó que el grado de edición del RNA de la subunidad glur6 fué múltiple, Observándose que el dominio M2 únicamente existe en su forma no editada (Q), mientras que ambas posibilidades (formas editadas y no editadas) son posibles en el dominio M1. Aunque el papel de estos receptores es oscuro, en la línea R 110 se observó mortalidad celular tiempo dependiente asociada a la exposición al agonista. El aumento del tiempo de exposición al Agonista produjo un incremento del porcentaje de mortalidad celular. Estos resultados implicarían al receptor de kainato en fenómenos excitotóxicos, anteriormente ligados exclusivamente a la Activación de otros receptores ionotrópico

Canales activados por glutamato

10 páginas, 3 figuras.Estos trabajos han sido financiados por la Dirección General de Investigación Científica y Técnica (PB89-0061) y el Fondo de Investigaciones Sanitarias de la Seguridad Social (92/0266). F. Somohano disfrutó de una beca posdoctoral de la CEE y A.V. Paternain disfruta de una beca Glaxo-CSIC.Peer reviewe

Progenitor potential and cell progeny of NG2-glia

GLIA 67:E125¿E766 (2019) : T02-048BNG2-cells are the most enigmatic neural population, homogenously distributed in a grid-like manner in both gray and white matter regions of the adult brain. In the CNS, a fraction of NG2 cells (OPCs) is responsible for the generation of mature oligodendrocytes, but most of them do not differentiate, representing the most proliferative cells out of the adult neurogenic niches. Fate-mapping analysis in different transgenic mice lines revealed different degrees of differentiation and maturation properties of NG2 cells depending on brain areas. Such diversity suggests that NG2-cells conforms a heterogeneous population composed by different subpopulations devoted to distinct functions. Our hypothesis is that those differences emerge during development as occurs with other glial cell subtypes that are generated from specific progenitors (García-Marques and Lopez-Mascaraque, 2013; 2017). Using a multi-color genetic lineage tracing system, StarTrack, we specifically targeted pallial progenitors, to analyze the type and location of adult labelled cells related to their origin and embryonic stage. Star Track labelled cells exhibited different neural phenotypes and located at different regions that were classified in relation to the targeted embryonic area. Moreover, we also designed different StarTrack strategies to permanently label the individual progenitor cells and their progeny. The plasmids are injected in the lateral ventricles and electroporared in vivo using in utero (IUE) or postnatal electroporation at different stages (E12-P1). First, NG2-EGFP-StarTrack was used to specifically label their cell progeny. Preliminary data showed that labeled cells are located in the gray and white matter, and those cells represent different neural types. Secondly, to specific target the NG2-progenitors we performed the same experiment using Ubc-StarTrack along with an embodying NG2 promoter into the transposase. Preliminary results showed that those progenitors cells labeled with UbC-EGFP-StarTrack constructs are committed to give rise to astrocytes, NG2 cells and even neurons at P90. We expect that our findings will provide fundamental aspects of the lineage potential, cell fate determination and functionality of NG2 cells.Supported by research Grant BFU2016-75207-R from MINEC

Excitatory aminoacid-activated channels

4 páginas.-- Edited by Bernat Soria and Valentín Ceña.Peer reviewe

A novel KCNQ4 pore-region mutation (p.G296S) causes deafness by impairing cell-surface channel expression

Mutations in the potassium channel gene KCNQ4 underlie DFNA2, a subtype of autosomal dominant progressive, high-frequency hearing loss. Based on a phenotype-guided mutational screening we have identified a novel mutation c.886G>A, leading to the p.G296S substitution in the pore region of KCNQ4 channel. The possible impact of this mutation on total KCNQ4 protein expression, relative surface expression and channel function was investigated. When the G296S mutant was expressed in Xenopus oocytes, electrophysiological recordings did not show voltage-activated K+ currents. The p.G296S mutation impaired KCNQ4 channel activity in two manners. It greatly reduced surface expression and, secondarily, abolished channel function. The deficient expression at the cell surface membrane was further confirmed in non-permeabilized NIH-3T3 cells transfected with the mutant KCNQ4 tagged with the hemagglutinin epitope in the extracellular S1-S2 linker. Co-expression of mutant and wild type KCNQ4 in oocytes was performed to mimic the heterozygous condition of the p.G296S mutation in the patients. The results showed that the G296S mutant exerts a strong dominant-negative effect on potassium currents by reducing the wild type KCNQ4 channel expression at the cell surface. This is the first study to identify a trafficking-dependent dominant mechanism for the loss of KCNQ4 channel function in DFNA2. © Springer-Verlag 2007.Peer Reviewe