Partial purification and thermal stability of two peroxidases from Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth. Aril.

Abstract: Two peroxidase (POX) forms, named PdPI and PdPII, were partially purified from the Pithecellobium dulce aril, using ammonium sulfate precipitation and anion exchange chromatography. Zymography of the proteins obtained after precipitation in the range of 60-90% ammonium sulfate (F6090 fraction) showed two bands with peroxidase activity. In DE-52 cellulose column, the peroxidase activity was detected in unadsorbed peak (PdPI) and adsorbed peak eluted with 0.2 mol L-1 NaCl (PdPII) suggesting that PdPI (~114 KDa) and PdPII (~77 KDa) are basic and acidic proteins, respectively, being PdPI stable at 80 ºC. This is the first report of partial purification of POX from P. dulce aril, indicating that this species may be a new source of enzymes for use in biosensors and other biotechnological applications. [Purificação Parcial e Estabilidade Térmica de Duas Peroxidases Extraídas de Arilos de Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth]. Resumo: Duas formas de peroxidase (POX), denominadas PdPI e PdPII, foram parcialmente purificadas de arilos de Pithecellobium dulce, utilizando precipitação com sulfato de amônio e cromatografia de troca iônica. O zimograma das proteínas obtidas após precipitação com sulfato de amônio na faixa de 60 a 90% de saturação (fração F6090), mostrou duas bandas com atividade peroxidásica. Na coluna de celulose DE-52, a atividade peroxidásica foi detectada nos picos não adsorvido (PdPI) e adsorvido (PdPII) eluído com NaCl 0,2 mol L-1, sugerindo que a PdPI (~114 KDa) e a PdPII (~77 KDa) são proteínas básicas e ácidas, respectivamente, sendo a PdPI estável a 80 ºC. Este é o primeiro relato de purificação parcial de POX obtida de arilos de P. dulce, indicando que esta espécie pode ser uma nova fonte de enzimas para utilização em biossensores e outras aplicações biotecnológicas.[HEVILA OLIVEIRA SALLES FIGUEIREDO]

Ensaio quantitativo para determinação de saponinas.

bitstream/item/221051/1/CNPC-2020-Art-36.pd

Seleção dos animais e cuidados pré, dcurante e pós-cirúrgicos na fistulação ruminal em caprinos e ovinos.

Estudos experimentais em nutrição animal freqüentemente demandam uso de animais canulados para ter acesso ao conteúdo gastrointestinal sendo assim, são submetidos a procedimentos cirúrgicos para criação de uma fístula. Esta técnica experimental trouxe consideráveis avanços para nutrição de ruminantes, pois, foi possível, por exemplo, definir ou mensurar a fração do alimento que sofre degradação ruminal. A determinação desta fração dos alimentos é importante uma vez que atende com mais eficiência os requerimentos dos microrganismos ruminais melhorando a fermentação e conseqüentemente repercutindo positivamente no desempenho animal. O uso de animais em ensaios experimentais para gerar tais informações requer cuidados antes, durantes e após o procedimento cirúrgico e observações constantes a campo. Os resultados obtidos e a longevidade desses animais dependem de tais cuidados. Neste contexto o presente artigo aponta parâmetros adequados para seleção de animais que serão destinados a fistulação do rúmen além de cuidados pré, durante e pós-cirúrgicos.bitstream/CNPC-2010/23058/1/doc92.pd

Biodegradação do bagaço de cana-de-açúcar por microrganismos ruminais de caprinos e ovinos.

Resumo: No presente estudo objetivou-se avaliar a degradação do bagaço de cana-de-açúcar (BCA) integral (BIN) ou hidrolisado (BH) pela microbiota ruminal de caprinos e ovinos de raças naturalizadas do Nordeste brasileiro e o potencial desses animais como fontes de microrganismos e/ou enzimas celulolíticas para degradação da fibra do BCA. Para hidrólise do BCA foi utilizada uma solução de NaOH a 50%, 30% na matéria seca (MS). Foram determinadas as concentrações de MS, proteína bruta (PB), cinzas (CZ), fibra detergente neutro (FDN), fibra detergente ácido (FDA), celulose (Cel), hemicelulose (Hcel) e lignina (Lig). A degradação in situ da FDN foi determinada pela incubação ruminal em sacos de náilon do BH nos tempos: 0, 6, 24 e 96 horas. A técnica de duas etapas preconizada por Tilley e Terry foi utilizada para determinar a digestibilidade in vitro da MS (DIVMS). Foi coletado conteúdo ruminal dos animais quatro horas após a infusão de 100g de BIN via fístula ruminal para a separação de microrganismos associados às fases líquida e sólida, utilizando tampão fosfato de sódio 50 mM, pH 6,9. A fração sólida foi submetida ao cultivo in vitro com o substrato BIN, por 96 horas, para determinação da taxa de degradação da MS, FDN e atividade celulolítica. O pH foi determinado nos tempos de cultivo de 24, 48 e 96 horas. O pré-tratamento com NaOH aumentou a DIVMS (P0,05). A inclusão de NaOH aumentou a degradação in situ da FDN, apresentando os ovinos menor tempo de colonização (TC). Houve solubilização da Hcel, da Cel e da Lign no BCA pré-tratado com NaOH. A atividade celulolítica se concentrou na fração sólida independente da espécie doadora do inóculo, sendo observado crescimento microbiano no cultivo in vitro do BIN à partir dessa fração. O pH aumentou com o tempo de cultivo in vitro. Microrganismos ruminais de Caprinos e ovinos naturalizados do Nordeste brasileiro colonizaram e degradaram o BIN e BH. O NaOH pode ser utilizado no pré-tratamento alcalino do BCA. [Biodegradation of sugarcane bagasse by ruminal microorganisms from sheep and goats]. Abstract: The purpose of this study was to evaluate the biodegradation of sugar cane bagasse (SCB), whole (WB) or hydrolyzed (HB) by ruminal microorganisms from Brazilian naturalized goat and sheep breeds, and the animals? potential as a source of microorganisms and/or cellulolytic enzymes for the biodegradation of SCB fiber. SCB hydrolysis was performed using 50% sodium hydroxide solution on 30% of dry matter (DM). The concentrations of DM, crude protein (CP), ether extract (EE), ash, neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), cellulose (Cel), hemicellulose (Hcel) and lignin (Lig) were determined in the WB and HB. For the in situ biodegradation of NDF, the HB was placed in nylon bags and incubated in rumen for 0, 6, 24 and 96 hours. The two-step technique recommended by Tilley and Terry was used to determine the in vitro digestibility of DM (IVDDM). Four hours after infusion of WB (100 g) through the ruminal fistula, the rumen content was collected from the animals and the microorganisms associated with the liquid and solid phases were separated, the former by filtration and the latter by extraction with 50 mM sodium phosphate buffer, pH 6.9. The solid fraction was subjected to in vitro culture with WB substrate for 96 hours to determine the biodegradation rate of DM, NDF and cellulolytic activity. The pH was measured after culture times of 24, 48 and 96 hours. Pretreatment with NaOH increased the IVDDM (P 0.05). The addition of NaOH increased the in situ biodegradation rate of NDF, with sheep showing a lower lag time (LT). There was a solubilization of Hcel, Cel and Lig in SCB pretreated with NaOH. Cellulolytic activity was higher in the solid phase, irrespective of the inoculum source, and microbial growth was observed in in vitro cultures using microorganisms from the solid phase and WB as substrate. The pH of the in vitro culture increased over time. Ruminal microorganisms from Brazilian naturalized goat and sheep breeds successfully colonized and biodegraded both WB and HB. Sodium hydroxide proved useful as an alkaline pretreatment for SCB

Embryo transfer from seropositive goats for caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) with birth of seronegative kid.

Abstract: The aim of this study was to determine whether recipient goats would seroconvert following transfer of embryos collected from donor goats seropositive for CAEV and if kids produced would be clinically normal and seronegative for CAEV. Four does (Saanen and Alpine), seropositive for CAEV, were used as donors, receiving superovulation treatment consisting of progestagen, cloprostenol and FSH. During estrus the donors were mated with seropositive bucks. Seven days after estrus, embryo recovery was performed by surgery. The embryos were then frozen according to the protocol of the International Embryo Transfer Society (IETS). Twelve seronegative does were used as recipients and received an estrus synchronization treatment consisting of progestagen, cloprostenol and eCG. Embryo transfer was performed seven days after synchronized estrus using the semilaparoscopy technique. Pregnancy was verified in one of twelve recipients, that remained seronegative until six months after giving birth and the kid until six months of age. The preliminary success in producing CAEV negative kids and failure of seroconversion in previously seronegative recipients in this study suggests that embryo transfer technology may offer an alternative in the prevention of CAEV transmission in goat herds as well for the utilization of genetic patrimony of seropositive goats. [Transferência de embriões de cabras soropositivas para artrite-encefalite caprina a vírus (CAEV) com nascimento de cria soronegativa]. Resumo: O objetivo deste estudo foi verificar se cabras receptoras sofreriam soroconversão após a transferência de embriões colhidos de cabras soropositivas e se as crias nascidas seriam clinicamente normais e soronegativas para CAEV. Foram utilizadas quatro cabras (Saanen e Alpina), todas soropositivas para CAEV e que receberam um tratamento superovulatório que consistiu no uso de progestágeno, cloprostenol e FSH. Durante o estro, as doadoras foram cobertas por bodes soropositivos. Sete dias após o estro, a colheita de embriões foi realizada utilizando a técnica cirúrgica. Os embriões colhidos foram congelados de acordo com o protocolo da Sociedade Internacional de Transferência de Embriões (IETS). Doze cabras soronegativas foram utilizadas como receptoras e receberam um tratamento de sincronização do estro consistindo de progestágeno, cloprostenol e eCG. A transferência de embriões foi realizada sete dias após o estro sincronizado usando a técnica de semi-laparoscopia. A gestação foi confirmada em uma das doze receptoras, a qual permaneceu soronegativa até seis meses após o parto e sua cria até os seis meses de idade. O sucesso preliminar na produção de crias soronegativas para CAEV e a não soroconversão em receptoras soronegativas sugere que a tecnologia de transferência de embriões pode oferecer uma alternativa para a profilaxia da CAEV em rebanhos caprinos, bem como para o aproveitamento do patrimônio genético de animais soropositivos