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Caracterizaci贸n de las propiedades de uni贸n in vitro de FAPG1 sobre diferentes polisac谩ridos de la pared celular
El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto est谩 condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mec谩nica determinada por la pared celular la cual est谩 constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduraci贸n, la acci贸n combinada de diferentes prote铆nas y enzimas hidrol铆ticas que act煤an sobre los componentes de la pared celular provoca una disminuci贸n del contenido, solubilizaci贸n y depolimerizaci贸n de los distintos componentes. La disminuci贸n y relajaci贸n de esta barrera mec谩nica no s贸lo disminuye la firmeza del fruto sino que tambi茅n facilita el ataque microorganismos pat贸genos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto.
En los 煤ltimos a帽os se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla est谩 estrechamente ligado a la degradaci贸n de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate. La mayor铆a de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catal铆tico, un m贸dulo de uni贸n a carbohidrato y un p茅ptido se帽al que las dirige a pared celular. A煤n no se han caracterizado las propiedades de uni贸n de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un m贸dulo de uni贸n a carbohidratos o regi贸n de uni贸n a pectinas para ninguna poligacturonasa.
En este trabajo clonamos la prote铆na FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (regi贸n que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresi贸n en Escherichia coli para obtener las prote铆nas recombinantes correspondientes. Las tres prote铆nas recombinantes solubles en buffer con agente caotr贸pico (Sarkosyl), utilizado en la purificaci贸n, precipitaron cuando se intent贸 remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza i贸nica. 脷nicamente logramos estabilizar dichas prote铆nas en presencia de su sustrato 脕cido poligalactur贸nico (PGA) y de esta forma logramos ensayar la capacidad de uni贸n de cada una de ellas a dicho pol铆mero. Hasta el momento hemos podido concluir:
La prote铆na completa permaneci贸 estable a煤n a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catal铆tico perdi贸 abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA.
El fragmento no catal铆tico permaneci贸 estable a concentraciones a煤n m谩s bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacci贸n de la regi贸n no catal铆tica con el sustrato (PGA).Universidad Nacional de La Plat
Caracterizaci贸n de las propiedades de uni贸n in vitro de FAPG1 sobre diferentes polisac谩ridos de la pared celular
El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto est谩 condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mec谩nica determinada por la pared celular la cual est谩 constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduraci贸n, la acci贸n combinada de diferentes prote铆nas y enzimas hidrol铆ticas que act煤an sobre los componentes de la pared celular provoca una disminuci贸n del contenido, solubilizaci贸n y depolimerizaci贸n de los distintos componentes. La disminuci贸n y relajaci贸n de esta barrera mec谩nica no s贸lo disminuye la firmeza del fruto sino que tambi茅n facilita el ataque microorganismos pat贸genos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto.
En los 煤ltimos a帽os se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla est谩 estrechamente ligado a la degradaci贸n de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate. La mayor铆a de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catal铆tico, un m贸dulo de uni贸n a carbohidrato y un p茅ptido se帽al que las dirige a pared celular. A煤n no se han caracterizado las propiedades de uni贸n de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un m贸dulo de uni贸n a carbohidratos o regi贸n de uni贸n a pectinas para ninguna poligacturonasa.
En este trabajo clonamos la prote铆na FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (regi贸n que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresi贸n en Escherichia coli para obtener las prote铆nas recombinantes correspondientes. Las tres prote铆nas recombinantes solubles en buffer con agente caotr贸pico (Sarkosyl), utilizado en la purificaci贸n, precipitaron cuando se intent贸 remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza i贸nica. 脷nicamente logramos estabilizar dichas prote铆nas en presencia de su sustrato 脕cido poligalactur贸nico (PGA) y de esta forma logramos ensayar la capacidad de uni贸n de cada una de ellas a dicho pol铆mero. Hasta el momento hemos podido concluir:
La prote铆na completa permaneci贸 estable a煤n a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catal铆tico perdi贸 abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA.
El fragmento no catal铆tico permaneci贸 estable a concentraciones a煤n m谩s bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacci贸n de la regi贸n no catal铆tica con el sustrato (PGA).Universidad Nacional de La Plat
Caracterizaci贸n de las propiedades de uni贸n in vitro de FAPG1 sobre diferentes polisac谩ridos de la pared celular
El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto est谩 condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mec谩nica determinada por la pared celular la cual est谩 constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduraci贸n, la acci贸n combinada de diferentes prote铆nas y enzimas hidrol铆ticas que act煤an sobre los componentes de la pared celular provoca una disminuci贸n del contenido, solubilizaci贸n y depolimerizaci贸n de los distintos componentes. La disminuci贸n y relajaci贸n de esta barrera mec谩nica no s贸lo disminuye la firmeza del fruto sino que tambi茅n facilita el ataque microorganismos pat贸genos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto.
En los 煤ltimos a帽os se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla est谩 estrechamente ligado a la degradaci贸n de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate. La mayor铆a de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catal铆tico, un m贸dulo de uni贸n a carbohidrato y un p茅ptido se帽al que las dirige a pared celular. A煤n no se han caracterizado las propiedades de uni贸n de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un m贸dulo de uni贸n a carbohidratos o regi贸n de uni贸n a pectinas para ninguna poligacturonasa.
En este trabajo clonamos la prote铆na FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (regi贸n que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresi贸n en Escherichia coli para obtener las prote铆nas recombinantes correspondientes. Las tres prote铆nas recombinantes solubles en buffer con agente caotr贸pico (Sarkosyl), utilizado en la purificaci贸n, precipitaron cuando se intent贸 remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza i贸nica. 脷nicamente logramos estabilizar dichas prote铆nas en presencia de su sustrato 脕cido poligalactur贸nico (PGA) y de esta forma logramos ensayar la capacidad de uni贸n de cada una de ellas a dicho pol铆mero. Hasta el momento hemos podido concluir:
La prote铆na completa permaneci贸 estable a煤n a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catal铆tico perdi贸 abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA.
El fragmento no catal铆tico permaneci贸 estable a concentraciones a煤n m谩s bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacci贸n de la regi贸n no catal铆tica con el sustrato (PGA).Universidad Nacional de La Plat
CARACTERIZACI脫N DE LAS PROPIEDADES DE UNI脫N IN VITRO DE FaPG1 SOBRE DIFERENTES POLISAC脕RIDOS DE LA PARED CELULAR
El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto est谩 condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mec谩nica determinada por la pared celular la cual est谩 constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduraci贸n, la acci贸n combinada de diferentes prote铆nas y enzimas hidrol铆ticas que act煤an sobre los componentes de la pared celular provoca una disminuci贸n del contenido, solubilizaci贸n y depolimerizaci贸n de los distintos componentes. La disminuci贸n y relajaci贸n de esta barrera mec谩nica no s贸lo disminuye la firmeza del fruto sino que tambi茅n facilita el ataque microorganismos pat贸genos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto.
En los 煤ltimos a帽os se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla est谩 estrechamente ligado a la degradaci贸n de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate. La mayor铆a de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catal铆tico, un m贸dulo de uni贸n a carbohidrato y un p茅ptido se帽al que las dirige a pared celular. A煤n no se han caracterizado las propiedades de uni贸n de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un m贸dulo de uni贸n a carbohidratos o regi贸n de uni贸n a pectinas para ninguna poligacturonasa. En este trabajo clonamos la prote铆na FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (regi贸n que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresi贸n en Escherichia coli para obtener las prote铆nas recombinantes correspondientes. Las tres prote铆nas recombinantes solubles en buffer con agente caotr贸pico (Sarkosyl), utilizado en la purificaci贸n, precipitaron cuando se intent贸 remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza i贸nica. 脷nicamente logramos estabilizar dichas prote铆nas en presencia de su sustrato 脕cido poligalactur贸nico (PGA) y de esta forma logramos ensayar la capacidad de uni贸n de cada una de ellas a dicho pol铆mero. Hasta el momento hemos podido concluir: La prote铆na completa permaneci贸 estable a煤n a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catal铆tico perdi贸 abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA. El fragmento no catal铆tico permaneci贸 estable a concentraciones a煤n m谩s bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacci贸n de la regi贸n no catal铆tica con el sustrato (PGA)
Harvesting at the end of the day extends postharvest life of kale (Brassica oleracea var. sabellica)
The contribution of Brassica vegetables to health improvement is related to their antioxidant capacity. Kale, as a member of Brassicaceae family, has high concentrations of antioxidants and glucosinolates. The main problem of harvested kale leaves is their accelerated senescence that leads to yellowing and a decline in nutritional quality. Previous reports indicate that daytime cycle strongly influenced different metabolic and physiological processes of plants, so the aim of this research was to determine if postharvest shelf life was influenced by the time of day in which kale leaves were harvested. In this study, we harvested kale leaves at 8:00, 13:00 and 18:00 h (in spring crop) and analysed their postharvest behaviour during storage for 9 days at 20 掳C in darkness. We measured the yellowing and senescence metabolism during postharvest storage. Results show that leaves harvested at 8:00 h present earlier symptoms of yellowing, higher chlorophyll degradation and lower sugar content. On the other hand, the samples obtained at 18:00 h barely showed senescence symptoms with a delay in yellowing. Additionally, leaves harvested at 18:00 h present higher protein and sugar content giving evidence of the fact that harvest at 18:00 h contributes to delay kale leaves yellowing and senescence metabolism during storage.Fil: Casaj煤s, Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro Cient铆fico Tecnol贸gico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas; ArgentinaFil: Perini, Mauro Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro Cient铆fico Tecnol贸gico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas; ArgentinaFil: Ramos, Romina Nahir. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro Cient铆fico Tecnol贸gico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal; ArgentinaFil: Barriga Lourenco, Antonella. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro Cient铆fico Tecnol贸gico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal; ArgentinaFil: Salinas, Corel Ainara. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro Cient铆fico Tecnol贸gico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal; ArgentinaFil: S谩nchez, Emiliana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronom铆a; ArgentinaFil: Fanello, Diego Dar铆o. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro Cient铆fico Tecnol贸gico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal; ArgentinaFil: Civello, Pedro Marcos. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro Cient铆fico Tecnol贸gico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas; ArgentinaFil: Frezza, Diana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronom铆a; ArgentinaFil: Mart铆nez, Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro Cient铆fico Tecnol贸gico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiolog铆a Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas; Argentin