Caracterización de las propiedades de unión in vitro de FAPG1 sobre diferentes polisacáridos de la pared celular

El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto está condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mecánica determinada por la pared celular la cual está constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduración, la acción combinada de diferentes proteínas y enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la pared celular provoca una disminución del contenido, solubilización y depolimerización de los distintos componentes. La disminución y relajación de esta barrera mecánica no sólo disminuye la firmeza del fruto sino que también facilita el ataque microorganismos patógenos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto. En los últimos años se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla está estrechamente ligado a la degradación de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate. La mayoría de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catalítico, un módulo de unión a carbohidrato y un péptido señal que las dirige a pared celular. Aún no se han caracterizado las propiedades de unión de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un módulo de unión a carbohidratos o región de unión a pectinas para ninguna poligacturonasa. En este trabajo clonamos la proteína FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (región que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresión en Escherichia coli para obtener las proteínas recombinantes correspondientes. Las tres proteínas recombinantes solubles en buffer con agente caotrópico (Sarkosyl), utilizado en la purificación, precipitaron cuando se intentó remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza iónica. Únicamente logramos estabilizar dichas proteínas en presencia de su sustrato Ácido poligalacturónico (PGA) y de esta forma logramos ensayar la capacidad de unión de cada una de ellas a dicho polímero. Hasta el momento hemos podido concluir: La proteína completa permaneció estable aún a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catalítico perdió abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA. El fragmento no catalítico permaneció estable a concentraciones aún más bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacción de la región no catalítica con el sustrato (PGA).Universidad Nacional de La Plat

Caracterización de las propiedades de unión in vitro de FAPG1 sobre diferentes polisacáridos de la pared celular

El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto está condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mecánica determinada por la pared celular la cual está constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduración, la acción combinada de diferentes proteínas y enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la pared celular provoca una disminución del contenido, solubilización y depolimerización de los distintos componentes. La disminución y relajación de esta barrera mecánica no sólo disminuye la firmeza del fruto sino que también facilita el ataque microorganismos patógenos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto. En los últimos años se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla está estrechamente ligado a la degradación de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate. La mayoría de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catalítico, un módulo de unión a carbohidrato y un péptido señal que las dirige a pared celular. Aún no se han caracterizado las propiedades de unión de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un módulo de unión a carbohidratos o región de unión a pectinas para ninguna poligacturonasa. En este trabajo clonamos la proteína FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (región que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresión en Escherichia coli para obtener las proteínas recombinantes correspondientes. Las tres proteínas recombinantes solubles en buffer con agente caotrópico (Sarkosyl), utilizado en la purificación, precipitaron cuando se intentó remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza iónica. Únicamente logramos estabilizar dichas proteínas en presencia de su sustrato Ácido poligalacturónico (PGA) y de esta forma logramos ensayar la capacidad de unión de cada una de ellas a dicho polímero. Hasta el momento hemos podido concluir: La proteína completa permaneció estable aún a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catalítico perdió abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA. El fragmento no catalítico permaneció estable a concentraciones aún más bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacción de la región no catalítica con el sustrato (PGA).Universidad Nacional de La Plat

Caracterización de las propiedades de unión in vitro de FAPG1 sobre diferentes polisacáridos de la pared celular

El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto está condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mecánica determinada por la pared celular la cual está constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduración, la acción combinada de diferentes proteínas y enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la pared celular provoca una disminución del contenido, solubilización y depolimerización de los distintos componentes. La disminución y relajación de esta barrera mecánica no sólo disminuye la firmeza del fruto sino que también facilita el ataque microorganismos patógenos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto. En los últimos años se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla está estrechamente ligado a la degradación de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate. La mayoría de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catalítico, un módulo de unión a carbohidrato y un péptido señal que las dirige a pared celular. Aún no se han caracterizado las propiedades de unión de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un módulo de unión a carbohidratos o región de unión a pectinas para ninguna poligacturonasa. En este trabajo clonamos la proteína FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (región que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresión en Escherichia coli para obtener las proteínas recombinantes correspondientes. Las tres proteínas recombinantes solubles en buffer con agente caotrópico (Sarkosyl), utilizado en la purificación, precipitaron cuando se intentó remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza iónica. Únicamente logramos estabilizar dichas proteínas en presencia de su sustrato Ácido poligalacturónico (PGA) y de esta forma logramos ensayar la capacidad de unión de cada una de ellas a dicho polímero. Hasta el momento hemos podido concluir: La proteína completa permaneció estable aún a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catalítico perdió abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA. El fragmento no catalítico permaneció estable a concentraciones aún más bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacción de la región no catalítica con el sustrato (PGA).Universidad Nacional de La Plat

CARACTERIZACIÓN DE LAS PROPIEDADES DE UNIÓN IN VITRO DE FaPG1 SOBRE DIFERENTES POLISACÁRIDOS DE LA PARED CELULAR

El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto está condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mecánica determinada por la pared celular la cual está constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduración, la acción combinada de diferentes proteínas y enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la pared celular provoca una disminución del contenido, solubilización y depolimerización de los distintos componentes. La disminución y relajación de esta barrera mecánica no sólo disminuye la firmeza del fruto sino que también facilita el ataque microorganismos patógenos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto. En los últimos años se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla está estrechamente ligado a la degradación de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate.  La mayoría de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catalítico, un módulo de unión a carbohidrato y un péptido señal que las dirige a pared celular. Aún no se han caracterizado las propiedades de unión de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un módulo de unión a carbohidratos o región de unión a pectinas para ninguna poligacturonasa. En este trabajo clonamos la proteína FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (región que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresión en Escherichia coli para obtener las proteínas recombinantes correspondientes. Las tres proteínas recombinantes solubles en buffer con agente caotrópico (Sarkosyl), utilizado en la purificación, precipitaron cuando se intentó remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza iónica. Únicamente logramos estabilizar dichas proteínas en presencia de su sustrato Ácido poligalacturónico (PGA)  y  de esta forma logramos ensayar la capacidad de unión de cada una de ellas a dicho polímero. Hasta el momento hemos podido concluir: La proteína completa permaneció estable aún a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catalítico perdió abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA.  El fragmento no catalítico permaneció estable a concentraciones aún más bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacción de la región no catalítica con el sustrato (PGA)

Harvesting at the end of the day extends postharvest life of kale (Brassica oleracea var. sabellica)

The contribution of Brassica vegetables to health improvement is related to their antioxidant capacity. Kale, as a member of Brassicaceae family, has high concentrations of antioxidants and glucosinolates. The main problem of harvested kale leaves is their accelerated senescence that leads to yellowing and a decline in nutritional quality. Previous reports indicate that daytime cycle strongly influenced different metabolic and physiological processes of plants, so the aim of this research was to determine if postharvest shelf life was influenced by the time of day in which kale leaves were harvested. In this study, we harvested kale leaves at 8:00, 13:00 and 18:00 h (in spring crop) and analysed their postharvest behaviour during storage for 9 days at 20 °C in darkness. We measured the yellowing and senescence metabolism during postharvest storage. Results show that leaves harvested at 8:00 h present earlier symptoms of yellowing, higher chlorophyll degradation and lower sugar content. On the other hand, the samples obtained at 18:00 h barely showed senescence symptoms with a delay in yellowing. Additionally, leaves harvested at 18:00 h present higher protein and sugar content giving evidence of the fact that harvest at 18:00 h contributes to delay kale leaves yellowing and senescence metabolism during storage.Fil: Casajús, Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas; ArgentinaFil: Perini, Mauro Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas; ArgentinaFil: Ramos, Romina Nahir. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; ArgentinaFil: Barriga Lourenco, Antonella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; ArgentinaFil: Salinas, Corel Ainara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; ArgentinaFil: Sánchez, Emiliana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía; ArgentinaFil: Fanello, Diego Darío. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; ArgentinaFil: Civello, Pedro Marcos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas; ArgentinaFil: Frezza, Diana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía; ArgentinaFil: Martínez, Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas; Argentin