DNA profiling, telomere analysis and antioxidant properties as tools for monitoring ex situ seed longevity

Background and Aims The germination test currently represents the most used method to assess seed viability in germplasm banks, despite the difficulties caused by the occurrence of seed dormancy. Furthermore, seed longevity can vary considerably across species and populations from different environments and studies related to the eco-physiological processes underlying such variations are still limited in their depth. The aim of the present work was the identification of reliable molecular markers that might help monitoring seed deterioration. Methods Dry seeds were subjected to artificial aging and collected at different time points for molecular/biochemical analyses. DNA damage was measured using the RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) approach while the seed antioxidant profile was obtained using both the DPPH (1,1-diphenyl, 2-picrylhydrazyl) assay and the Folin Ciocalteu reagent method. Electron Paramagnetic Resonance (EPR) provided profiles of free radicals. Quantitative RealTime-Polymerase Chain Reaction (QRT-PCR) was used to assess the expression profiles of the antioxidant genes MT2 (Type 2 Metallothionein) and SOD (Superoxide Dismutase). A modified QRT-PCR protocol was used to determine telomere length. Key Results The RAPD profiles highlighted different capacities of the two Silene species to overcome DNA damage induced by artificial aging. The antioxidant profiles of dry and rehydrated seeds revealed that the high-altitude taxon Silene acaulis was characterised by a lower antioxidant specific activity. Significant up-regulation of the MT2 and SOD genes was observed only in the rehydrated seeds of the low-altitude species. Rehydration resulted in telomere lengthening in both Silene species. Conclusions Different seed viability markers have been selected for plant species showing inherent variation of seed longevity. RAPD analysis, quantification of redox activity of non enzymatic antioxidant compounds and gene expression profiling provide deeper insights to study seed viability during storage. Telomere lengthening is a promising tool to discriminate between short- and long-lived species

Nutritional intake influences zinc levels in preterm newborns: an observational study

(1) Background: Zinc is a key element for protein synthesis in preterm newborns. Early aggressive nutrition, promoting protein synthesis, may increase zinc consumption; (2) Methods: We performed a prospective observational study, to assess the relationship between early macronutrients intake and serum zinc levels, in preterm newborns with Gestational Age (GA) of 24-35 weeks, consecutively observed in Neonatal Intensive Care Unit (NICU). (3) Results: We enrolled 130 newborns (GA 31.5 ± 2.8). A significant negative correlation between serum zinc level at 28 days of life and energy (r -0.587, p < 0.001) and protein intake (r -0.556, p < 0.001) in the first week of life was observed. Linear regression analysis showed that zinc levels depended on energy (β -0.650; p < 0.001) and protein (β -0.669; p < 0.001) intake given through parenteral nutrition (PN) in the first week of life; (4) Conclusions: zinc status of preterm neonates was influenced by early protein and energy intake. An additional zinc supplementation should be considered when high protein and energy intake are received by preterm newborns in the first week of life

Fístula Retovestibular com ânus pérvio: relato de caso/ Rectovestibular fistula with patent anus: a case report

INTRODUÇÃO: Anomalias anorretais (AAR) afetam o ânus e o reto, bem como os tratos urinário e genital. Os defeitos variam desde os mais simples, facilmente corrigíveis e com prognóstico funcional excelente, até aqueles muito complexos, de difícil manejo, geralmente com outras malformações associadas e prognóstico funcional ruim. A incidência é de 1:5000 nascidos vivos e leve predomínio no sexo masculino. Cerca de 25 a 50% dos pacientes apresentam outras malformações associadas: urinárias, anomalias cardiovasculares, atrésia de esôfago, atresia duodenal, anomalias vertebrais/sacrais, medula presa. A classificação das anomalias anorretais varia de acordo com o sexo, sendo importante para a definição terapêutica e prognóstica. O diagnóstico precoce, bem como decisões terapêuticas adequadas, são cruciais para evitar consequências sérias e sequelas. O diagnóstico pode ser realizado durante o exame físico e exames complementares podem ser utilizados para a avaliação de outras mal- formações associadas. Uma vez diagnosticada a anomalia anorretal, o tratamento cirúrgico deve ser programado de acordo com o tipo e condição clínica do paciente. A metodologia utilizada neste trabalho constou de análise de prontuário e referências científicas levantadas nas bases de dados Scielo e Pubmed. RELATO DE CASO: A.P.C., sexo feminino, procurou atendimento da especialidade devido a hipótese diagnóstica de fístula retovaginal pós natal. A primeira consulta da cirurgia pediátrica foi realizada aos 3 dias de vida, sendo evidenciada:  genitália feminina, ânus anteriorizado com membrana perineal e saída de fezes pelo intróito vaginal. Como investigação complementar, foram solicitados: ecocardiograma, ultrassonografia transfontanela, de rins e vias urinárias e de quadril (devido a posição pélvica durante a gravidez), raio X de coluna lombossacra, urina I, urocultura, uretrocistografia miccional e enema opaco; introduzida antibioticoprofilaxia.No retorno, aos 44 dias de vida, foi identificada uma CIA (0,25cm), sem repercussões ao ecocardiograma e dilatação de alças de sigmóide e cólon descendente. Foi indicada exploração cirúrgica com pesquisa de fístula no intraoperatório. Realizada eletroestimulação no para identificação do complexo muscular e passada sonda uretral no orifício fistuloso dentro do intróito vaginal, notando-se comunicação com ânus. Optou-se pela confecção de colostomia em duas bocas, no colon descendente. À laparotomia, identificado divertículo de Meckel e realizada diverticulectomia. A criança evoluiu bem, recebendo alta hospitalar no 3º dia de pós-operatório. DISCUSSÃO: A classificação da anomalia é fundamental para o tratamento que será proposto bem como para a avaliação do prognóstico. O diagnóstico clínico é feito com um exame físico adequado, o mais completo possível, com avaliação: perineal/anal, musculatura local, região sacral. Exames complementares buscando malformações cardíacas, vertebrais, deformidades de membros e coluna lombossacra devem ser utilizados. As fístulas perineais e vestibulares são corrigidas no período neonatal sem colostomia, desde que o bebê não tenha se alimentado. Anomalias anorretais sem fístula com coto retal próximo à impressão anal visto na radiografia, também podem ser corrigidas primariamente no período neonatal. Nos demais casos, deve ser realizada primeiramente uma colostomia no cólon descendente, em dupla boca. Em meninas com cloaca, se houver hidrocolpos, o mesmo deve ser drenado na ocasião da confecção da colostomia. Em 3 a 6 meses, após realizar um colostograma para definir a anatomia, procede-se à anorretoplastia sagital posterior com ou sem abordagem abdominal associada, a depender do tipo do defeito. Duas semanas após a anorretoplastia sagital posterior, os pacientes seguem um programa de dilatações retais com velas de Hegar, aumentando progressivamente o calibre da vela até chegar ao número adequado à idade da criança. Alcançado o calibre adequado para a idade, a reconstrução do trânsito intestinal pode ser realizada. As complicações pós operatórias incluem as sequelas funcionais: constipação intestinal, o tratamento com laxantes deve ser precoce e contínuo; incontinência fecal, devendo ser feita lavagem diária do cólon e incontinência urinária, sendo necessário cateterismo vesical intermitente ou drogas anticolinérgicas