Diverse expression of N-acetylglucosaminyltransferase V and complex-type \beta1,6-1,6-branched N-glycans in uveal and cutaneous melanoma cells

Although both uveal (UM) and cutaneous (CM) melanoma cells derive from the transformed melanocytes, their biology varies significantly in several aspects. Malignant transformation is frequently associated with alternations in cell glycosylation, in particular those concerning branched complex-type N-glycans. These changes occur principally in β1,4-N-acetylglucosaminyltransferase III (GnT-III) that catalyzes the synthesis of glycans with bisected N-acetylglucosamine (GlcNAc) and β1,6-N-acetylglucosaminyltransferase V (GnT-V) that is involved in forming β1,6-branched antenna in complex-type glycans. We searched for the reasons of a different behavior of CM and UM cells in the expression of GnT-III and GnT-V and their oligosaccharide products. Our study showed that UM cells have more β1,6-branched glycans than CM cells, what results from a higher expression of MGAT5 gene encoding GnT-V. The higher β1,6-branching of glycans in UM may contribute to their higher potential to migrate on fibronectin and weaker binding to main extracellular matrix proteins, observed in our previous studies

Wpływ korzystania z telefonu komórkowego na zapis EKG rejestrowany metodą Holtera

Telefon komórkowy a 24-godzinne EKG Wstęp: Telefony komórkowe są coraz powszechniej używane w życiu codziennym. Ich wpływ na niektóre urządzenia może być niekorzystny. Dotychczas nie oceniano wpływu korzystania z telefonu komórkowego na jakość rejestracji 24-godzinnego EKG. Cel pracy: Ocena wpływu korzystania z telefonu komórkowego na jakość zapisu 24-godzinnego EKG i propozycja zaleceń dotyczących używania telefonu w trakcie rejestracji EKG metodą Holtera. Materiał i metody: Badaniami objęto 42 pacjentów, u których wykonano rutynowe zapisy 24-godzinnego EKG. Na początku rejestracji oceniano jakość zapisu przed rozmową i podczas prowadzenia rozmowy przez telefon komórkowy (wyjściowo umieszczony < 10 cm od rejestratora). U części pacjentów oceniano występowanie zakłóceń w okresie całej rejestracji (telefon umieszczony wyjściowo w miejscu dowolnym). Analizowano zapisy wykonane za pomocą rejestratorów cyfrowych (n = 15) i analogowych (n = 27). Wyniki: W 11/15 zapisów cyfrowych i 13/27 analogowych rejestrowano krótkotrwałe (10&#8211;60 s) zakłócenia utrudniające analizę zapisu. Szczególne utrudnienia oceny zapisu dotyczyły rejestracji 24-godzinnego EKG u pacjentów z rozrusznikiem. W wypadku rejestratorów cyfrowych artefakty były widoczne również, gdy telefon był umieszczony > 10 cm od rejestratora. Wnioski: Korzystanie z telefonu komórkowego może powodować krótkotrwałe zakłócenia zapisu 24-godzinnego EKG. Zakłócenia występują częściej przy zastosowaniu rejestratorów cyfrowych. Proponujemy, aby zalecać pacjentom umieszczanie telefonów komórkowych możliwie jak najdalej od rejestratora 24-godzinnego EKG, a w przypadku rejestratorów cyfrowych zalecać również ograniczanie liczby rozmów

Wpływ korzystania z telefonu komórkowego na zapis EKG rejestrowany metodą Holtera

Telefon komórkowy a 24-godzinne EKG Wstęp: Telefony komórkowe są coraz powszechniej używane w życiu codziennym. Ich wpływ na niektóre urządzenia może być niekorzystny. Dotychczas nie oceniano wpływu korzystania z telefonu komórkowego na jakość rejestracji 24-godzinnego EKG. Cel pracy: Ocena wpływu korzystania z telefonu komórkowego na jakość zapisu 24-godzinnego EKG i propozycja zaleceń dotyczących używania telefonu w trakcie rejestracji EKG metodą Holtera. Materiał i metody: Badaniami objęto 42 pacjentów, u których wykonano rutynowe zapisy 24-godzinnego EKG. Na początku rejestracji oceniano jakość zapisu przed rozmową i podczas prowadzenia rozmowy przez telefon komórkowy (wyjściowo umieszczony < 10 cm od rejestratora). U części pacjentów oceniano występowanie zakłóceń w okresie całej rejestracji (telefon umieszczony wyjściowo w miejscu dowolnym). Analizowano zapisy wykonane za pomocą rejestratorów cyfrowych (n = 15) i analogowych (n = 27). Wyniki: W 11/15 zapisów cyfrowych i 13/27 analogowych rejestrowano krótkotrwałe (10&#8211;60 s) zakłócenia utrudniające analizę zapisu. Szczególne utrudnienia oceny zapisu dotyczyły rejestracji 24-godzinnego EKG u pacjentów z rozrusznikiem. W wypadku rejestratorów cyfrowych artefakty były widoczne również, gdy telefon był umieszczony > 10 cm od rejestratora. Wnioski: Korzystanie z telefonu komórkowego może powodować krótkotrwałe zakłócenia zapisu 24-godzinnego EKG. Zakłócenia występują częściej przy zastosowaniu rejestratorów cyfrowych. Proponujemy, aby zalecać pacjentom umieszczanie telefonów komórkowych możliwie jak najdalej od rejestratora 24-godzinnego EKG, a w przypadku rejestratorów cyfrowych zalecać również ograniczanie liczby rozmów

Ocena powtarzalności wyników analizy zmienności rytmu w dwóch kolejnych dobach rejestracji EKG metodą Holtera

Cel pracy: Ocena powtarzalności parametrów analizy czasowej i częstotliwościowej zmienności rytmu zatokowego w dwóch kolejnych dobach rejestracji EKG. Materiał i metody: Analizą objęto 48-godzinne EKG, które wykonano u 32 pacjentów (19 z kardiomiopatią przerostową, 3 z chorobą wieńcową, 10 z zaburzeniami rytmu lub utratami przytomności). Stosowano rejestratory cyfrowe Digicorder &#8212; Del-Mar Medical (częstość próbkowania 256 Hz). Oceniano średnią częstotliwość serca (HR, heart rate) oraz standardowe parametry analizy czasowej: SDNN, rMSSD, indeks trójkątny (TI, triangular index). Analizę częstotliwościową wykonano w godzinach nocnych między 4.00 a 5.00 rano, oceniając widmo niskich LF (low frequency) i wysokich HF (high frequency) częstotliwości. Porównano wyniki w I i II dobie rejestracji. Powtarzalność oceniono metodą Blanda i Altmana. Wyniki: Korelacja wyników analizy czasowej i częstotliwościowej w I i II dobie była wysoka &#8212; r > 0,7. Współczynniki wariancji poszczególnych parametrów wynosiły odpowiednio dla: średniej HR &#8212; 5%, SDNN &#8212; 11,8%, rMSSD &#8212; 18,2%, IT &#8212; 16,1%, LF &#8212; 13%, HF &#8212; 12,7%. Tylko wyniki 1&#8211;2 badanych nie mieściły się w zakresie określanym przez współczynnik powtarzalności, co było częściowo związane z gorszą powtarzalnością średniej częstości rytmu. Wnioski: Krótkoterminowa powtarzalność wyników analizy zmienności rytmu jest zadowalająca. Przy stosowaniu analizy zmienności rytmu minimalna liczebność badanej grupy powinna wynosić około 40 osób, a oczekiwany ewentualny zakres zmian wartości wyników pod wpływem różnych czynników powinien przekraczać, w zależności od parametru, 12&#8211;18%. Przy ocenie powtarzalności wyników zmienności rytmu należy zwracać uwagę na powtarzalność częstości rytmu serca. (Folia Cardiol. 2001; 8: 119&#8211;127

Ocena powtarzalności wyników analizy zmienności rytmu w dwóch kolejnych dobach rejestracji EKG metodą Holtera

Cel pracy: Ocena powtarzalności parametrów analizy czasowej i częstotliwościowej zmienności rytmu zatokowego w dwóch kolejnych dobach rejestracji EKG. Materiał i metody: Analizą objęto 48-godzinne EKG, które wykonano u 32 pacjentów (19 z kardiomiopatią przerostową, 3 z chorobą wieńcową, 10 z zaburzeniami rytmu lub utratami przytomności). Stosowano rejestratory cyfrowe Digicorder &#8212; Del-Mar Medical (częstość próbkowania 256 Hz). Oceniano średnią częstotliwość serca (HR, heart rate) oraz standardowe parametry analizy czasowej: SDNN, rMSSD, indeks trójkątny (TI, triangular index). Analizę częstotliwościową wykonano w godzinach nocnych między 4.00 a 5.00 rano, oceniając widmo niskich LF (low frequency) i wysokich HF (high frequency) częstotliwości. Porównano wyniki w I i II dobie rejestracji. Powtarzalność oceniono metodą Blanda i Altmana. Wyniki: Korelacja wyników analizy czasowej i częstotliwościowej w I i II dobie była wysoka &#8212; r > 0,7. Współczynniki wariancji poszczególnych parametrów wynosiły odpowiednio dla: średniej HR &#8212; 5%, SDNN &#8212; 11,8%, rMSSD &#8212; 18,2%, IT &#8212; 16,1%, LF &#8212; 13%, HF &#8212; 12,7%. Tylko wyniki 1&#8211;2 badanych nie mieściły się w zakresie określanym przez współczynnik powtarzalności, co było częściowo związane z gorszą powtarzalnością średniej częstości rytmu. Wnioski: Krótkoterminowa powtarzalność wyników analizy zmienności rytmu jest zadowalająca. Przy stosowaniu analizy zmienności rytmu minimalna liczebność badanej grupy powinna wynosić około 40 osób, a oczekiwany ewentualny zakres zmian wartości wyników pod wpływem różnych czynników powinien przekraczać, w zależności od parametru, 12&#8211;18%. Przy ocenie powtarzalności wyników zmienności rytmu należy zwracać uwagę na powtarzalność częstości rytmu serca. (Folia Cardiol. 2001; 8: 119&#8211;127

The attempt to N-acetylglucosaminyltransferase V silencing in human melanoma cells

N-acetyloglukozaminylotransferazaV (GnT-V) jest enzymem odpowiedzialnymza powstawanie rozgałęzień GlcNAc-β1,6 w N-glikanach białek błonowych. Badania wykazały, że nadekspresja struktur kompleksowych GlcNAc-β1,6 rozgałęzionych, obserwowana w komórkach nowotworowych, koreluje z nabyciem przez nie fenotypu metastatycznego. Badanie funkcji tego genu może więc pomóc w poszukiwaniu metod leczenia nowotworów. Przykładem niezwykle trudnego do wyleczenia nowotworu jest czerniak. O ile na etapie guza pierwotnego leczenie operacyjne daje dobre efekty, o tyle nabycie przez komórki czerniaka zdolności przerzutowania czyni go nieuleczalnym. Dlatego znalezienie skutecznej metody powstrzymania migracji i inwazji komórek nowotworowych jest najważniejszym celem w walce z chorobą.Celem niniejszej pracy była optymalizacja warunków wyciszania GnT-V w trzech metastatycznych liniach czerniaka A375, WM266-4 i WM1205Lu. Wyciszenie genu jest jednym ze sposobów na określenie roli genu i jego produktu. W tym celu wykorzystuje się zjawisko interferencji RNA wprowadzając do komórki krótkie intereferujące cząsteczki RNA (siRNA), które mają za zadanie zablokować transkrypcję wybranego genulub zniszczyć znajdujący się w cytoplazmie transkrypt.Optymalizacja warunków wyciszania dla każdej z linii polegała na doborze najbardziej specyficznej sekwencji siRNA oraz określenie najlepszego stężenia siRNA. Testowano również trzy różne odczynniki do transfekcji: INTERFERin (Polyplus), siPORT NeoFX i siPORT Amine (Ambion). Dobrano też czas transfekcji. Weryfikację efektu wyciszenia prowadzono na poziomie enzymu poprzez immunodetekcję orazna poziomie oligosacharydowego produktu jego działania – struktur kompleksowych GlcNAc-β1,6 rozgałęzionych w reakcji z lektyną PHA-L, która specyficznie rozpoznaje tego typu struktury. Otrzymane wyniki pozwoliły na określenie najbardziej optymalnych warunków transfekcji dla każdej z badanych linii komórkowych. W efekcie uzyskano użyteczny model badawczy do wykorzystania w badaniach podstawowych nad biologią tego nowotworu. Dalsze eksperymenty mogą przybliżyć wyjaśnienie mechanizmów tworzenia przerzutów i pomóc w projektowaniu skutecznych leków.N-acetylglucosaminyltransferaseV (GnT-V) is an enzyme that catalyzes additionof GlcNAc-β1,6 branching on N-glicans of membrane proteins. The research has shown that an overexpression of GnT-V and its products GlcNAc-β1,6 branched structures, which is observed in tumor cells, is correlated with the metastatic potential of these cells.The investigation of this gene role may therefore help in the research for cancer treatments. Melanoma is an example of tumor that is difficult to treat. While at the stage of primary tumor surgical treatment gives good results, else the acquisition of the metastatic potential of melanoma cells makes it an incurable. Therefore, finding effective methods to stopthe migration and invasion of cancer cells is a key objective in the fight against disease.The aim of this study is to optimize GnT-V silencing conditions in three metastatic melanoma lines: A375, WM266-4 i WM1205Lu. Gene suppression is one of the methods to determine the role of the gene and of his product. For this purpose, a RNA interference phenomenon has been used by introduction small-interfering RNA (siRNA) to the cell. They are designed to block the transcription of a selected gene or to destroy a transcript located in cytoplasm.Optimization of conditions for the silencing of each line consisted of selecting the most specific siRNA sequence and determining the best siRNA concentration. There have been tested three different transfection reagents: INTERFERin (Polyplus), siPORT NeoFX i siPORT Amine (Ambion). The proper transfection time has been selected.The verification of the effect of silencing has been performed at the level of the enzymeby immunodetection and at the level of the oligosaccharides that was detected by PHA-L lectin. The results obtained allowed to determine the most optimal transfection conditions for each of the tested cell lines. The result is a useful research model for use in basic research on the biology of this tumor. Further experiments will hasten explainingthe mechanisms of metastasis formation and help in designing effective drugs

The Effect of Enzyme Activity on Carbon Sequestration and the Cycle of Available Macro- (P, K, Mg) and Microelements (Zn, Cu) in Phaeozems

The study objective was to determine the relationship of selected enzyme activities with carbon sequestration and N, P, K, Mg, Zn and Cu contents in Phaeozem soils. Soil samples were taken from a 10 ha area. A selection of their physical and chemical properties and the contents of the available forms of selected macro- and microelements were determined. The activities of dehydrogenases (DEH), catalase (CAT), peroxidases (PER), alkaline (AlP) and acid (AcP) phosphatase, β-glucosidase (BG) and proteases (PR) were also determined. The relationship between enzymatic soil fertility indices (AlP/AcP, BIF, GMea, TEI, BA12 and BA13) and selected soil parameters was also determined. The research used principal component analysis (PCA) to distinguish significantly correlated parameters of a Phaeozem used for agricultural purposes. The study area showed low TOC and K contents and average P and Mg contents. Significant positive correlations were found between the TOC content and activity of the tested enzymes, evidencing that soil enzymes are an important parameter in carbon sequestration and soil nutrient dynamics

Enzymatic Activity of Soil after Applications Distillery Stillage

This study aimed to evaluate the fertilizing value of rye stillage used in the cultivation of winter triticale cv. ‘Grenado’. The research was performed in 2018 (autumn, before the application of the stillage), 2019, and 2020 (spring and autumn after stillage application) on Luvisoil at the depth levels of 0–20 and 20–40 cm. Each year, the basic soil parameters were analyzed, i.e., pH in 1M KCl, organic carbon (Corg), available phosphorus (P), potassium (K), magnesium (Mg), zinc (Zn), and copper (Cu). Enzymes were also accounted: alkaline phosphatase (AlP), acid phosphatase (AcP), and dehydrogenases (DEH). The use of stillage resulted in a significant increase in the content of P, K, and Mg and the activity of AlP, AcP, and DEH in the soil. It significantly increased the Corg content and did not have a significant effect on pH. The obtained results indicate that the response of the enzymatic activity to the distillery stillage depended on both the sampling season soil and the depth. However, it is necessary to systematically monitor the pH of the soil and at the same time to rationally apply mineral fertilization