PRODUÇÃO DE ANTÍGENO SOMÁTICO DE Haemonchus contortus ADULTOS E SEU USO EM ENSAIO IMUNOENZIMÁTICO INDIRETO PARA DETECÇÃO DE IMUNOGLOBULINA G OVINA

One of the most limiting factors to the small ruminant husbandry is gastrointesinal verminosis, especially in mild whether regions, where Haemonchus contortus is the predominant worm. To understand sheep immune response to this parasite and to identify the more responsive animals, it is necessary to adopt adequate methods that can measure the host’s immune response. This work was conducted in order to produce a somatic extract of H.contortus and to employ it in an indirect enzyme-linked Immunosorbent assay (ELISA) to detect ovine IgG. For obtaining the antigen, about 1.000 adult worms (both male and female) were washed, macerated, submitted to freezing and thawing cycles, sonicated and centrifuged. Samples from 20 ewes naturally infected were used as positive standards. Negative standards were 15 pre-colostral samples and those from two lambs kept indoors and parasite-free. It was tested several dilutions of antigen, sera and anti- antigen concentration was 5μg.mL-1 and the optimal dilutions of sera and conjugated were 1:80 and 1:1000, respectively.Um dos fatores limitantes à criação de pequenos ruminantes é a verminose gastrintestinal, sobretudo em regiões de clima ameno, onde o Haemonchus contortus é o parasita mais prevalente. Para compreender a resposta imune do ovino a este parasita e identificar os animais mais responsivos, é necessária a adoção de metodologias adequadas para mensurar a resposta imune do hospedeiro. O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de produzir um antígeno somático de H. contortus e utilizá-lo em técnicas de ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para detecção de IgG ovina. Para a obtenção do antígeno, cerca de 1000 helmintos adultos (machos e fêmeas) foram lavados, submetidos à maceração, ciclos de congelamento e descongelamento, sonicação e centrifugação. Foram utilizados como soros controle-positivo 20 amostras oriundas de ovelhas adultas submetidas à infecção natural. Como controle-negativos, foram utilizadas amostras pré-colostrais de 15 cordeiros, bem como de dois borregos mantidos livres de parasitas. Foram testadas várias diluições de antígeno, soros e um conjugado comercial anti-IgG ovina a fim de obter as concentrações ideais. A concentração ótima de antígeno foi de 5 μg.mL-1, e as diluições de soro e de conjugado que permitiram melhor discriminação entre positivos e negativos foram, respectivamente, 1:80 e 1:1000