Identification of tumor-associated antigens in human thyroid papillar carcinoma

In this study two cDNA expressing libraries generated from thyroid papillar carcinomas were screened using SEREX approach. Thirty positive cDNA clones representing seventeen different genes were identified from both libraries. It is important to note, that three of them were isolated previously by other laboratories in SEREX screens of various types of human cancer. These include transcription factor NZF, a-catenin and BAG RP11 — a protein with unknown function. Moreover, we identified a whole panel of novel potential tumor-associated antigens, which would be further investigated. We are particularly interested in more detailed analysis of cathepsin H and transducer of ErbB2 (TOB2), which are differentially expressed in various types of human cancer. We will analyse the frequency of autoantibodies against identified antigens in sera of patients with various malignancies and healthy donors by heterologous screening. It is expected that among the clones isolated in this study, there might be novel cancer-associated markers.З двох зразків тканини папіломи щитовидної залози людини отримано дві кДНК експресуючі бібліотеки. Імуноскринуванням бібліотек методом SEREX ідентифіковано 30 пози­тивних клонів, які відповідали 17 різним генам. Потрібно відмітити, що три гени – транскрипційний фактор NZF, α-катенін і білок ВАС RP11 з поки невідомою функцією – раніше виявлено в інших лабораторіях методом SEREX, де скрикували бібліотеки з різних типів пухлин людини. Серед решти ідентифікованих генів найцікавішими є катепсин Н (cathepsin Н) и ТОВ2 (transducer of ErbB2), підвищену екс­пресію яких було знайдено в багатьох злоякісних пухлинах людини. Подальші дослідження буде направлено на виявлення частоти зустрічальності антитіл проти даних антигенів у сироватках крові хворих на рак різної етіології та здорових донорів. Серед визначених у нашій лабораторії нових SEREX позитивних клонів є потенційні маркери злоякісних новоутво­рень щитовидної залози людини.кДНК экспрессирующие библиотеки получены из двух образцов ткани злокачественной папилломы щитовидной железы человека. Иммуноскрининг библиотек методом SEREX дал воз­можность идентифицировать 30 положительных клонов, представляющих собой продукты 17 различных генов. Следует отметить, что три гена — транскрипционный фактор NZF, а-катенин и белок с неизвестной функцией ВАС RP11 – выявлены ранее в других лабораториях SEREX скринингом библиотек из различных типов опухолей человека. Среди ос­тальных идентифицированных генов наибольший интерес представляют катепсин Н (cathepsin Н) и ТОВ2 (transducer of ErbB2), повышенная экспресия которых выявлена во многих злокачественных опухолях человека. Дальнейшие исследования будут направлены на установление частоты встречаемости антител против данных антигенов в сыворотках крови боль­ных раком различной этиологии и здоровых доноров. Среди выявленных нами новых SEREX положительных клонов могут быть потенциальные маркеры злокачественных новообразова­ний щитовидной железы человека

Investigation of autoantibodies directed against tissue-specific myocardial antigens in dilated cardiomyopathy

The autoantibodies directed against actin and tnyosine have been detected in the blood sera of patients with dilated cardiomyopathy (DCMP) at the level that was sufficiently higher than in healthy donors. While comparing of the immunogeneicity of these proteins we have stated that myosine from affected by DCMP myocardium have been more immunogenic then from normal one. In the case of actin the immunogeneicity have been higher for the protein from normal myocard. The investigations of actin by limited proteolysis may suggest that the differencies in immune properties are not connected with primary structure but with structures of higher levels.У роботі досліджено аутоантитіла проти тканиноспецифічних антигенів міокарда лю­дини – актина і міозина. Методом твердофазного імуноферментного аналізу (ELISA) показано, що імунореактивність сироваток крові пацієнтів з дилятаційною кардіоміопатією (ДКМП) проти досліджених антигенів суттєво вища, ніж у здорових донорів. При порівнянні імунореактивності однакових сироваток проти антигенів, виділених із нормального і ураженого ДКМП міокарда, виявлено наступну закономірність: імунна відповідь на міозин із нормального міокарда була слабшою, ніж на той же білок із міокарда, ураженого ДКМП. Для актина спостерігалася зворотна залежність. Аналіз актина із нормального і ураженого ДКМП міокарда за допомогою методу обмеженого протеолізу дозволяє вважати, що з розвитком ДКМП цей білок підда­ ється субмолекулярним (скоріш за все, конформаційним) модифікаціям, які призводять до змін його імунореактивності. Отримані результати обговорюються з позиції функціонування скорочувального апарату кардіоміоцитів.В работе исследованы аутоантитела против тканеспецифических антигенов миокарда человека – актина и миозина. Методом твердофазного иммунофермеитиого анализа (ELISA) показано, что иммунореактивность сывороток крови пациентов с дилятационной кардиомиопатней (ДКМП) против исследованных антигенов существенно выше, чем у здоровых доноров. При сравнении иммунореактивности одних и тех же сывороток против антигенов, выделенных из нормального и пораженного ДКМП миокарда, обнаружена следующая закономерность: иммунный ответ на миозин из нормального миокарда был слабее, чем на тот же белок из миокарда, пораженного ДКМП. Для актина наблюдалась обратная зависимость. Анализ актина из нормального и пораженного ДКМП миокарда с помощью метода ограниченного протеолиза дает основание полагать, что при развитии ДКМП данный белок претерпевает субмолскулярные (вероятнее всего, конформационные) модификации, ведущие к изменениям его иммунореактивности. Полученные результаты обсуждаются с позиции функционирования сократительного аппарата кардиомиоцитов

The immunochemical cross-reactivity between cytoplasmic and mitochondrial mammalian lysyl-tRNA synthetases

Animal and fungal cells (in contrast to prokaryotes) contain two distinct sets of related aminoacyl-tRNA synthetases (aaRSs) encoded by nuclear genes and functioning in cytosol and mitochondria. The structural differences between mitochondrial and cytoplasmic enzymes may reflect the functional adaptation to fulfil mitochondrial processes in addition to protein synthesis. Mitochondrial import of nuclearencoded tRNAs has been described in yeast, plants and protozoans but it has not been observed in mammalian cells. Ifs established that mitochondrial lysyl-tRNA synthetase (MSK) plays a prominent role in the transport of tRNA into yeast mitochondria for complementation o f mitochondrial tRNAs genes mutations. We tried to identify MSK homologues in mammalian cells with the help of monospecific antibodies against pre-MSK by ELISA and Western-blot analysis. We have identified cross-reactive proteins in mitochondrial and cytoplasmic fractions of mammalian cell lysates. These data, together with the results of cross-aminoacylation on mitochondrial and cytoplasmic tRNAs, suggest the presence of common antigenic determinants in the mitochondrial and cytoplasmic lysyl-tRNA synthetases from higher animals.Клітини еукаріот на відміну від прокаріот містять дві різні групи аміноацил-тРНК синтетаз, які кодуються ядерним геномом та функціонують в цитозолі і мітохондріях. Струк­турні відмінності між ферментами мітохондрій і цитоплаз­ми можуть бути відображенням функціональної адаптації до процесів, які відбуваються в мітохондріях, крім участі в біосинтезі білка. Імпорт цитозольних тРНК у мітохондрії описано для дріжджів, рослин і найпростіиіих, однак він не спостерігався в клітинах ссавців. Виявлено, що мітохондріальна лізил-тРНК синтетаза (MSK) відіграє провідну роль у транспорті тРНК у мітохондрії дріжджів для комплемен­тації мутацій мітохондріальних генів тРНК За допомогою моноспецифічних антитіл проти npe-MSK ми зробили спробу ідентифікувати гомологи MSK у клітинах ссавців методами ELISA і Вестерн-блотинга. В цитоплазматичних і міто­хондріальних фракціях лізатів клітин ссавців нам вдалося виявити білки, які мають імунологічний перехрест з MSK Разом з результатами перехресного аміноацилювання ці дані дають підставу для припущення щодо наявності спільних антигенних детермінант у мітохондріальних і цитоплазма­тичних лізил-тРНК синтетаз ссавців.Клетки эукариот (в отличие от клеток прокариот) содержат две различные группы аминоацил-тРНК синтетаз, кодируе­мых ядерным геномом и функционирующих в ц и то золе и митохондриях. Структурные отличия между ферментами митохондрий и цитоплазмы могут быть отражением функци­ональной адаптации к процессам, происходящим в митохонд­риях помимо участия в биосинтезе белка Импорт цитозольных тРНК в митохондрии описан у дрожжей, растений и простейших, однако не наблюдался в клетках млекопитаю­щих. Установлено, что митохондриальная лизил-тРНК син­тетаза (MSK) играет ведущую роль в транспорте тРНК в митохондрии дрожжей для комплементации мутаций митохондриальных генов тРНК. С помощью моноспецифических антител против npe-MSK мы попытались идентифицировать гомологи MSK в клетках млекопитающих методами ELISA и Вестерн-блотинга. В цитоплазматических и митохондриальных фракциях лизатов клеток млекопитающих нам удалось обнаружить белки, имеющие иммунологический перекрест с MSK В совокупности с результатами перекрестного аминоацилирования эти данные дают основание предположить нали­чие общих антигенных детерминант у митохондриальных и цитоплазматических лизил-тРНК синтетаз высших живо­тных

Identification of tumor-associated antigens in human thyroid papillar carcinoma

In this study two cDNA expressing libraries generated from thyroid papillar carcinomas were screened using SEREX approach. Thirty positive cDNA clones representing seventeen different genes were identified from both libraries. It is important to note, that three of them were isolated previously by other laboratories in SEREX screens of various types of human cancer. These include transcription factor NZF, a-catenin and BAG RP11 — a protein with unknown function. Moreover, we identified a whole panel of novel potential tumor-associated antigens, which would be further investigated. We are particularly interested in more detailed analysis of cathepsin H and transducer of ErbB2 (TOB2), which are differentially expressed in various types of human cancer. We will analyse the frequency of autoantibodies against identified antigens in sera of patients with various malignancies and healthy donors by heterologous screening. It is expected that among the clones isolated in this study, there might be novel cancer-associated markers.З двох зразків тканини папіломи щитовидної залози людини отримано дві кДНК експресуючі бібліотеки. Імуноскринуванням бібліотек методом SEREX ідентифіковано 30 пози­тивних клонів, які відповідали 17 різним генам. Потрібно відмітити, що три гени – транскрипційний фактор NZF, α-катенін і білок ВАС RP11 з поки невідомою функцією – раніше виявлено в інших лабораторіях методом SEREX, де скрикували бібліотеки з різних типів пухлин людини. Серед решти ідентифікованих генів найцікавішими є катепсин Н (cathepsin Н) и ТОВ2 (transducer of ErbB2), підвищену екс­пресію яких було знайдено в багатьох злоякісних пухлинах людини. Подальші дослідження буде направлено на виявлення частоти зустрічальності антитіл проти даних антигенів у сироватках крові хворих на рак різної етіології та здорових донорів. Серед визначених у нашій лабораторії нових SEREX позитивних клонів є потенційні маркери злоякісних новоутво­рень щитовидної залози людини.кДНК экспрессирующие библиотеки получены из двух образцов ткани злокачественной папилломы щитовидной железы человека. Иммуноскрининг библиотек методом SEREX дал воз­можность идентифицировать 30 положительных клонов, представляющих собой продукты 17 различных генов. Следует отметить, что три гена — транскрипционный фактор NZF, а-катенин и белок с неизвестной функцией ВАС RP11 – выявлены ранее в других лабораториях SEREX скринингом библиотек из различных типов опухолей человека. Среди ос­тальных идентифицированных генов наибольший интерес представляют катепсин Н (cathepsin Н) и ТОВ2 (transducer of ErbB2), повышенная экспресия которых выявлена во многих злокачественных опухолях человека. Дальнейшие исследования будут направлены на установление частоты встречаемости антител против данных антигенов в сыворотках крови боль­ных раком различной этиологии и здоровых доноров. Среди выявленных нами новых SEREX положительных клонов могут быть потенциальные маркеры злокачественных новообразова­ний щитовидной железы человека

Investigation of autoantibodies directed against tissue-specific myocardial antigens in dilated cardiomyopathy

The autoantibodies directed against actin and tnyosine have been detected in the blood sera of patients with dilated cardiomyopathy (DCMP) at the level that was sufficiently higher than in healthy donors. While comparing of the immunogeneicity of these proteins we have stated that myosine from affected by DCMP myocardium have been more immunogenic then from normal one. In the case of actin the immunogeneicity have been higher for the protein from normal myocard. The investigations of actin by limited proteolysis may suggest that the differencies in immune properties are not connected with primary structure but with structures of higher levels.У роботі досліджено аутоантитіла проти тканиноспецифічних антигенів міокарда лю­дини – актина і міозина. Методом твердофазного імуноферментного аналізу (ELISA) показано, що імунореактивність сироваток крові пацієнтів з дилятаційною кардіоміопатією (ДКМП) проти досліджених антигенів суттєво вища, ніж у здорових донорів. При порівнянні імунореактивності однакових сироваток проти антигенів, виділених із нормального і ураженого ДКМП міокарда, виявлено наступну закономірність: імунна відповідь на міозин із нормального міокарда була слабшою, ніж на той же білок із міокарда, ураженого ДКМП. Для актина спостерігалася зворотна залежність. Аналіз актина із нормального і ураженого ДКМП міокарда за допомогою методу обмеженого протеолізу дозволяє вважати, що з розвитком ДКМП цей білок підда­ ється субмолекулярним (скоріш за все, конформаційним) модифікаціям, які призводять до змін його імунореактивності. Отримані результати обговорюються з позиції функціонування скорочувального апарату кардіоміоцитів.В работе исследованы аутоантитела против тканеспецифических антигенов миокарда человека – актина и миозина. Методом твердофазного иммунофермеитиого анализа (ELISA) показано, что иммунореактивность сывороток крови пациентов с дилятационной кардиомиопатней (ДКМП) против исследованных антигенов существенно выше, чем у здоровых доноров. При сравнении иммунореактивности одних и тех же сывороток против антигенов, выделенных из нормального и пораженного ДКМП миокарда, обнаружена следующая закономерность: иммунный ответ на миозин из нормального миокарда был слабее, чем на тот же белок из миокарда, пораженного ДКМП. Для актина наблюдалась обратная зависимость. Анализ актина из нормального и пораженного ДКМП миокарда с помощью метода ограниченного протеолиза дает основание полагать, что при развитии ДКМП данный белок претерпевает субмолскулярные (вероятнее всего, конформационные) модификации, ведущие к изменениям его иммунореактивности. Полученные результаты обсуждаются с позиции функционирования сократительного аппарата кардиомиоцитов