Genetic Separation of FK506 Susceptibility and Drug Transport in the Yeast Pdr5 ATP-binding Cassette Multidrug Resistance Transporter

Overexpression of the yeast Pdr5 ATP-binding cassette transporter leads to pleiotropic drug resistance to a variety of structurally unrelated cytotoxic compounds. To identify Pdr5 residues involved in substrate recognition and/or drug transport, we used a combination of random in vitro mutagenesis and phenotypic screening to isolate novel mutant Pdr5 transporters with altered substrate specificity. A plasmid library containing randomly mutagenized PDR5 genes was transformed into appropriate drug-sensitive yeast cells followed by phenotypic selection of Pdr5 mutants. Selected mutant Pdr5 transporters were analyzed with respect to their expression levels, subcellular localization, drug resistance profiles to cycloheximide, rhodamines, antifungal azoles, steroids, and sensitivity to the inhibitor FK506. DNA sequencing of six PDR5 mutant genes identified amino acids important for substrate recognition, drug transport, and specific inhibition of the Pdr5 transporter. Mutations were found in each nucleotide-binding domain, the transmembrane domain 10, and, most surprisingly, even in predicted extracellular hydrophilic loops. At least some point mutations identified appear to influence folding of Pdr5, suggesting that the folded structure is a major substrate specificity determinant. Surprisingly, a S1360F exchange in transmembrane domain 10 not only caused limited substrate specificity, but also abolished Pdr5 susceptibility to inhibition by the immunosuppressant FK506. This is the first report of a mutation in a yeast ATP-binding cassette transporter that allows for the functional separation of substrate transport and inhibitor susceptibility

Langzeitstrahlenschäden an Haut und Auge nach kombinierter ß- und γ-Strahlenexposition während des Reaktorunfalls in Tschernobyl

Zusammenfassung HINTERGRUND Im April f 986 wurden beim Reaktorunfall in Tschernobyl zahlreiche Arbeiter und Feuerwehrleute mit hohen Dosen ionisierender Strahlung belastet. Neben der Exposition mit γ-Strahlen wurden sie in unmittelbarer Umgebung des Unfallorts auch einer inhomogenen β-Strahlung aus freigesetzten Spaltprodukten ausgesetzt, die zu schwerwiegenden Verbrennungen der Haut führte. PATIENTEN und Methoden Aus dieser Gruppe der sogenannten Liquidatoren stellten sich 16 Männer zwischen 1991 und 1996 wiederholt vor. Ihre Strahlenbelastung hatte zwischen 0,35 und 9 Gy gelegen. Diese Dosen wurden zum Teil retrospektiv aus Chromosomenanalysen erschlossen. Die ophthalmologische Untersuchung wurde durch eine quantitative Erfassung von Linsentrübungen mit einem elektronischen Scheimpflug-System ergänzt. Die digitale Auswertung der Aufnahmen in Form von Trübungseinheiten erlaubt einen Vergleich zu Normal- und Vorbefunden. ERGEBNISSE Bei 4 Liquidatoren wurden hintere subkap-suläre Linsentrübungen unterschiedlicher Ausprägung dokumentiert, ein Arbeiter wurde erstmals nach Kataraktextraktion vorgestellt. Ein Patient besaß dichte kortikonukleäre Linsentrübungen mit pseudoexfoliations-ähnlichen Veränderungen, 3 litten an trockenen Augen. Acht der Männer zeigten keine okulären Strahlenschäden, retinale Strahlenschäden waren nicht nachweisbar. 15 Liquidatoren litten an schweren Formen des chronischen Stadiums eines kutanen Strahlensyndroms, deren Komplikationen bei 3 Männern zu Amputationen führten. SCHLUßFOLGERUNG Eine Relation zwischen ophthalmologischen und dermatologischen Befunden konnte weder erwartet noch festgestellt werden. Die Gegenüberstellung hinterer subkapsulärer Trübungseinheiten mit den Ganzkörperäquivalentdosen deutet eine Korrelation an, die jedoch hier nicht näher quantifiziert wird. Bei den Dosen handelt es sich um Organdosen des Knochenmarks, welches vorwiegend durch tiefer eindringende γ-Strahlung belastet wird. Sie können daher nur unsicher mit einer kombinierten β- und -γ-Dosis in Organen wie Haut und Auge korreliert werden, da die oberflächennah schädigende β-Strahlung nicht ausreichend berücksichtigt wird

The MCAO wavefront sensing system of LINC-NIRVANA: status report

LINC-NIRVANA is an infrared camera that will work in Fizeau interferometric way at the Large Binocular Telescope (LBT). The two beams that will be combined in the camera are corrected by an MCAO system, aiming to cancel the turbulence in a scientific field of view of 2 arcminutes. The MCAO wavefront sensors will be two for each arm, with the task to sense the atmosphere at two different altitudes (the ground one and a second height variable between a few kilometers and a maximum of 15 kilometers). The first wavefront sensor, namely the Ground layer Wavefront sensor (GWS), will drive the secondary adaptive mirror of LBT, while the second wavefront sensor, namely the Mid High layer Wavefront Sensor (MHWS) will drive a commercial deformable mirror which will also have the possibility to be conjugated to the same altitude of the correspondent wavefront sensor. The entire system is of course duplicated for the two telescopes, and is based on the Multiple Field of View (MFoV) Layer Oriented (LO) technique, having thus different FoV to select the suitable references for the two wavefront sensor: the GWS will use the light of an annular field of view from 2 to 6 arcminutes, while the MHWS will use the central 2 arcminutes part of the FoV. After LINC-NIRVANA has accomplished the final design review, we describe the MFoV wavefront sensing system together with its current status

Einflussfaktoren betrieblichen Weiterbildungshandelns im internationalen Vergleich

Betriebliche Weiterbildung, Europäische Weiterbildungserhebung, Institutionen, Heckman-Selektionsmodell , Continuing vocational training, CVTS 2, Institutions, Heckman selection model ,