Alterações morfofisiológicas envolvidos na adaptação de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii à anfotericina B

The Cryptococcus genus is composed of capsulated yeasts capable of infecting a variety of hosts, such as mammals. In this genus, they stand out as the etiological agents of human cryptococcosis Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. Amphotericin B (AmB) and azoles are the drugs of choice in drug therapy. This pharmacological treatment usually lasts for more than six months, with recurrence being frequent even after antifungal therapy. There is a gap in the literature on how cryptococcal cells respond to continuous exposure to AmB and what strategies Cryptococcus use to adapt to this stress. Thus, the aim of this study was to evaluate the morphophysiological changes involved in the adaptation of C. neoformans and C. gattii to AmB. Tests were carried out to: evaluate the susceptibility of C. neoformans and C. gattii strains to AmB; expose strains to increasing concentrations of AmB and obtain exposed/adapted clones; evaluate death curve; check the growth profile; to analyze whether adaptation to AmB changes morphometry, the production of reactive species (ERs), intracellular survival to macrophages, the interaction between peroxynitrite scavenger and superoxide dismutase inhibitor, lipid peroxidation and zeta potential. Thus, it was observed that two strains of C. neoformans and five of C. gattii managed to grow in concentrations above the initial minimum inhibitory concentration (MIC), which were classified as adapted. The clones resulting from the adaptive evolution process did not change in AmB susceptibility in the broth microdilution test, except for the C. neoformans ATCC WM148 strain, and in agar after passing without the drug. In the death curve and the growth curve, no pattern was observed between the strains. The adapted clones showed a reduction in the capsule thickness and a reduction in cell diameter, except for the C. neoformans ATCC WM626 strain, as well as producing a lower amount of ERs in the presence of AmB. It showed an increase in the phagocytic index after 24 h of phagocytosis, a reduction in intracellular proliferation for C. neoformans ATCC WM148, an increase in cell proliferation for C. gattii strains and an increase in oxidative stress, except for C. neoformans ATCC WM626. In the interaction with peroxynitrite sequestered and SOD inhibitor, the interaction was indifferent between them. The C. neoformans ATCC WM626 strain showed an increase in lipid peroxidation when treated with H2O2 MIC. In general, the strains showed a reduction in the negative electrical magnitude after adaptation to AmB. These results will provide subsidies to fill in gaps on the understanding of the exposure/adaptation of C. neoformans and C. gattii to AmB, as well as the phenotypic changes that occurred in the cells that contributed to this phenomenon.O gênero Cryptococcus é composto por leveduras capsuladas com capacidade de infectar uma variedade de hospedeiros, como os mamíferos. Neste gênero, destacam-se como agentes etiológicos da criptococose humana Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. A anfotericina B (AmB) e os azólicos são os fármacos de primeira escolha na terapia medicamentosa. Este tratamento farmacológico normalmente se prolonga por mais de seis meses, sendo frequente a recorrência mesmo após terapia antifúngica. Há uma lacuna na literatura de como as células criptococócicas respondem a exposição contínua à AmB e quais estratégias Cryptococcus utilizam para se adaptarem frente a este estresse. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar as alterações morfofisiológicas envolvidas na adaptação de C. neoformans e C. gattii à AmB. Foram realizados ensaios para: avaliar a suscetibilidade de linhagens de C. neoformans e C. gattii à AmB; expor as linhagens a concentrações crescentes de AmB e obter clones expostos/adaptados; avaliar curva de morte; verificar o perfil de crescimento; analisar se a adaptação à AmB altera a morfometria, a produção de espécies reativas (ERs), a sobrevivência intracelular a macrófagos, a interação entre o sequestrador de peroxinitrito e inibidor de superóxido dismutase, a peroxidação lipídica e o potencial zeta. Assim, foi observado que duas linhagens de C. neoformans e cinco de C. gattii conseguiram crescer em concentrações superiores a concentração inibitória mínima (CIM) inicial, sendo estas classificadas como adaptadas. Os clones resultantes do processo de evolução adaptativa não apresentaram alteração na susceptilidade à AmB no teste de microdiluição em caldo, exceto a linhagem de C. neoformans ATCC WM148, e em ágar após passagens sem a presença da droga. Na curva de morte e na curva de crescimento não foi observado padrão entre as linhagens. Os clones adaptados apresentaram redução da espessura da cápsula e redução do diâmetro celular, exceto a linhagem C. neoformans ATCC WM626, bem como produziram menor quantidade de ERs na presença da AmB. Apresentou aumento do índice fagocítico após 24 h de fagocitose, redução da proliferação intracelular para C. neoformans ATCC WM148, aumento da proliferação celular para as linhagens de C. gattii e aumento do estresse oxidativo, exceto para C. neoformans ATCC WM626. Na interação com sequestrado de peroxinitrito e inibidor de SOD a interação foi indiferente entre eles. A linhagem de C. neoformans ATCC WM626 apresentou aumento da peroxidação lipídica quando tratada com CIM de H2O2. De maneira geral, as linhagens apresentaram redução da magnitude elétrica negativa após adaptação à AmB. Estes resultados fornecerão subsídios para o preenchimento de lacunas sobre o entendimento da exposição/adaptação de C. neoformans e C. gattii à AmB, assim como as alterações fenotípicas ocorridas nas células que contribuíram para este fenômeno

Composição centesimal, bioativos e capacidade antioxidante de Butia capitata

Introduction: Butia capitata is a palm tree native from the Brazilian Cerrado, whose fruit is consumed raw. The objective was to determine the physical characteristics of the fruit, centesimal composition, bioactive and antioxidant activity. Materials and methods: Fruits obtained in Cerrado, Montes Claros, Minas Gerais, Brazil. Diameter, height and weight were evaluated. The analyzes were carried out on pulp and almond. The moisture was analyzed by gravimetry after oven drying, ashes by calcining in a muffle furnace, proteins by the Kjeldahl method, gravimetric lipids after extraction in ethyl ether, carbohydrates by difference and total energy value by conversion factors. Vitamin C, E and carotenoids were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC), minerals by inductively coupled plasma atomic absorption spectrometry, Folin Ciocalteu solution phenolic compounds, anthocyanins by spectrophotometry and antioxidant capacity by the Radical DPPH. Results and discussion: The fruits presented good pulp yield (68.59%), which has a high lipid content (3.42 g.100g -1 ) and total energy (83.34 kcal.100g - 1 ). The pulp contains β-carotene (8.56 mg.100g -1 ), vitamin E (121.07 mcg.100g - 1 ) and high concentrations of vitamin C (53.57 mg.100g -1 ), total phenolics (493, 6 mg.100g -1 ) and copper (1.80 mg.100g -1 ). Almond has a high value of total energy (457.72 kcal.100g -1 ), vitamin E (1594.39 mcg.100g -1 ) and minerals Cu (2.40 mg.100g -1 ) and Mo (0.9.100g -1 ). Conclusion: The fruits presented good pulp yield and high energy values. The pulp is a source of carotenoids, vitamin C, copper and total phenolics, both natural antioxidants.Introdução: Butia capitata é uma palmeira nativa do Cerrado brasileiro, cujo fruto é consumido in natura. Objetivou-se determinar as características físicas do fruto, composição centesimal, bioativos e atividade antioxidante. Materiais e métodos: Frutos obtidos no Cerrado, Montes Claros, Minas Gerais, Brasil. Avaliados quanto: diâmetro, altura e peso. As análises foram realizadas na polpa e amêndoa. A umidade foi analisada por gravimetria após secagem em estufa, cinzas por calcinação em forno mufla, proteínas pelo método Kjeldahl, lipídios por gravimetria após extração em éter etílico, carboidratos por diferença e valor energético total pelos fatores de conversão. A vitamina C, E e carotenoides foram analisados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), os minerais por espectrometria de absorção atômica em plasma acoplado indutivamente, os compostos fenólicos em solução de Folin Ciocalteu, antocianinas por espectrofotometria e a capacidade antioxidante pelo método do radical DPPH. Resultados e discussão: Os frutos apresentaram bom rendimento de polpa (68,59%), a qual possui elevado teor de lipídios (3,42 g.100g -1 ) e de energia total (83,34 kcal.100g -1 ). A polpa contém β-caroteno (8,56 mg.100g -1 ), vitamina E (121,07 mcg.100g -1 ) e altas concentrações de vitamina C (53,57 mg.100g -1 ), fenólicos totais (493,6 mg.100g -1 ) e cobre (1,80 mg.100g -1 ). A amêndoa possui alto valor de energia total (457.72 kcal.100g -1 ), vitamina E (1594.39 mcg.100g -1 ) e minerais Cu (2,40 mg.100g -1 ) e Mo (0,9.100g -1 ). Conclusão: Os frutos apresentam bom rendimento da polpa e elevados valores de energia. A polpa é fonte de carotenoides, vitamina C, cobre e fenólicos totais, ambos antioxidantes naturais

Hydroalcoholic Leaf Extract of <i>Punica granatum</i>, alone and in Combination with Calcium Hydroxide, Is Effective against Mono- and Polymicrobial Biofilms of <i>Enterococcus faecalis</i> and <i>Candida albicans</i>

Failures in endodontic treatments are mostly associated with the difficulty in eradicating microbes of the root canal system, highlighting the need to develop novel effective antimicrobials. Punica granatum (pomegranate) leaf hydroalcoholic extract may be a potential alternative in canal dressing, owing to its antimicrobial properties. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity of hydroalcoholic leaf extract of Punica granatum (HEPg) alone or in combination with calcium hydroxide (Ca(OH)2) against Enterococcus faecalis and Candida albicans in isolation and in mono- and polymicrobial biofilms. Microdilution tests in broth and assays for inhibition of biofilm formation were carried out to evaluate the antimicrobial properties of HEPg and HEPg + Ca(OH)2 against Enterococcus faecalis and Candida albicans. The cytotoxicity of HEPg in HaCaT cells was evaluated by MTT assay. HEPg and HEPg + Ca(OH)2 exerted significant antimicrobial activity against planktonic cells and mono- and polymicrobial biofilms. The combination of Punica granatum extract with Ca(OH)2 appears to be a promising alternative in endodontic treatments, which could be tested in vivo to confirm the efficacy of this mixture in disinfecting root canal systems