Molecular identification and frequency of isolated pathogens from bovine mastitis in dairy herds from Baja California Peninsula, Mexico

La mastitis bovina es una enfermedad de alto impacto económico para la industria lechera, y algunos de los agentes etiológicos que la provocan también son de interés en el ámbito de salud pública. El objetivo de este estudio fue identificar las especies bacterianas aisladas de casos de mastitis bovina, provenientes de siete establos lecheros ubicados en la Península de Baja California. Se tomaron 316 muestras de leche de igual número de cuartos, pertenecientes a 186 vacas en producción que a la prueba de California tuvieron reacción positiva. Se obtuvieron 182 aislados bacterianos de 163 cuartos pertenecientes a 106 vacas y se identificaron por PCR y secuenciación, dando un total de 20 especies diferentes. Además, se obtuvieron las frecuencias relativas, siendo los agentes causales más frecuentes: Staphylococcus aureus (58.8 %), Streptococcus agalactiae (13.2 %), Staphylococcus chromogenes (8.8 %), Escherichia coli (2.2 %) y Streptococcus uberis (2.2 %). El 6.13 % (10/163) de los cuartos con aislamiento presentaron infección mixta, siendo la combinación más frecuente S. aureus con S. agalactiae 30 % (3/10). Estos resultados indican una alta frecuencia y diversidad de patógenos de carácter contagioso y ambiental que provocan mastitis en ganado lechero en la región de estudio, siendo algunos de importancia para la salud pública. Los resultados observados, muestran que las causas de la mastitis son diversas, por lo que es indispensable mejorar las medidas de control y prevención, pero también establecer el diagnóstico de rutina para lograr controlar la mastitis.Bovine mastitis is a disease of high economic impact for the dairy industry and some of the etiological agents that cause it are also of interest in the field of public health. The purpose of study was to identify the bacterial causes of bovine mastitis from seven dairy farms located in the Baja California Peninsula. A total of 316 milk samples were collected from the same number of quarters belonging to 186 cows in production that tested positive for California Mastitis test. It was obtained 182 bacterial isolates from 163 quarters belonging to 106 cows and were identified by PCR, giving a total of 20 different species. Isolates were identified using specific oligonucleotides for the major mastitis pathogens and with universal oligonucleotides for the 16S ribosomal DNA gene with subsequent sequencing for those that did not amplify with the specific oligonucleotides and relative frequencies were obtained. The most frequent causal agents were: Staphylococcus aureus (58.8 %), Streptococcus agalactiae (13.2 %), Staphylococcus chromogenes (8.8 %), Escherichia coli (2.2 %) and Streptococcus uberis (2.2 %). A mixed infection was found in 6.13 % (10/163) of the quarters, being the most frequent combination S. aureus plus S. agalactiae 30 % (3/10). These results indicate a high frequency and diversity of contagious and environmental pathogens causing mastitis in dairy cattle in the region of study, being some of importance for public health. The results show that the causes of mastitis are diverse, so it is essential to improve control and prevention measures, but also to establish a routine diagnosis to control mastitis

Evaluación de la prueba reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a partir de muestras de leche y cultivos puros en el diagnóstico de la brucelosis bovina

Brucellosis is a zoonotic disease with a strong economic impact. It is also a serious public health issue. In Mexico, the official diagnosis is made by serology, using the card, rivanol, and complement fixation tests. Nevertheless, Brucella spp. isolation and characterization remain as the diagnostic gold standard. In this study the polymerase chain reaction (PCR) technique was compared with bacteriology and serology in the diagnosis of bovine brucellosis. A total of 51 blood/milk samples were collected from two herds with positive brucellosis history. Of these 51 samples 24 were negative to serological, bacteriological and PCR tests, 11 were positive to all tests, six were positive to both serology and PCR, one was positive to both serology and bacteriology, and 9 were positive to serology. From the 12 positive isolations, a sample was taken for PCR. Amplification was obtained in 100 % of these cultures. Results show that the proportional detection of positive animals by PCR was higher than isolation (PLa brucelosis es una enfermedad zoonótica que puede impactar fuerte en el ámbito económico, además de representar un delicado problema de salud píºblica. En México, el diagnóstico oficial se realiza por serologí­a, mediante las pruebas de tarjeta, rivanol y fijación de complemento, considerándose el aislamiento y caracterización de Brucella spp como "la prueba de oro". En este estudio se llevó a cabo la comparación de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés), con respecto a la bacteriologí­a y la serologí­a, en el diagnóstico de la brucelosis bovina. Un total de 51 muestras de sangre y leche fueron recolectadas de dos hatos con prevalencia histórica de presencia de brucelosis. De las 51 muestras analizadas, 24 resultaron negativas a las pruebas serológicas, bacteriológicas y PCR, 11 resultaron positivas a todas las pruebas, seis resultaron positivas a serologí­a y PCR, una positiva a serologí­a y bacteriologí­a y nueve positivas a serologí­a. De los 12 aislamientos positivos se tomó una muestra para realizar PCR obteniendo amplificación en el 100 % de los cultivos. Los resultados muestran que la proporción de detección de animales positivos mediante el PCR fue superior al aislamiento (