Determination of Apixaban Levels in Human Plasma by a High-Throughput Liquid Chromatographic Tandem Mass Spectrometry Assay / Determinarea rapidă a apixabanului în plasma umană prin cromatografie de lichide de înaltă performanță cuplată cu spectrometrie de masă în tandem

S-a elaborat și s-a validat o metodă de cromatografie de lichide de înaltă performanță cuplată cu spectrometrie de masă în tandem (LC-MS/MS) pentru cuantificarea apixabanului în plasma umană. Separarea s-a realizat pe o coloană Gemini-NX în condiții izocratice folosind un amestec de acetonitril și formiat de amoniu 1 mM în apă (33:67, v/v) la 40 ºC, cu un debit de 0,5 mL/min. Detecția apixabanului s-a realizat prin monitorizarea reacțiilor multiple (m/z 417,2 din m/z 460,2) cu ionizare pozitivă prin electrospray. Pentru pregătirea probelor de plasmă s-a folosit o singură etapă de precipitare a proteinelor cu metanol. Metoda s-a validat cu respectarea selectivității, linearității (r > 0,994), preciziei intrazilnice și interzilnice (CV < 14,4 %) și a acurateței (bias < 9.5 %) pe domeniul de concentrații 9,70 - 970,00 ng/mL plasmă. Cea mai mică limită de cuantificare (LLOQ) a fost de 9,70 ng/mL, iar randamentul de recuparare din plasmă a avut valori cuprinse între 97,4 - 104,5 %. Metoda este rapidă, eficientă, necesită prelucrarea unui volum mic de plasmă (50 μL), un timp de lucru scurt (1 min) pentru analiza cromatografică și o pregătire simplă și rapidă a probelor. Se pretează foarte bine pentru monitorizarea concentrațiilor apixabanului în timpul tratamentului clinic și pentru studii de farmacocinetică