Role of the cellular environment on the progression of renal cancer

Entre el tejido epitelial y el estroma fibroblástico/adiposo se establece un intercambio de información esencial para la morfogénesis y funcionalidad normales, como así también para el desarrollo del cáncer. Nosotros estudiamos el cáncer de riñón por tratarse del quinto tipo de cáncer más frecuente a nivel mundial. Además se relaciona con una elevada mortalidad y su incidencia ha aumentado significativamente en los últimos años. Recientemente demostramos que el tejido adiposo renal humano, cercano a un tumor renal, regula el comportamiento de células epiteliales renales humanas tumorales y no tumorales de manera diferente al tejido adiposo lejano al tumor (Campo-Verde-Arbocco et al., 2017). Estos resultados nos llevaron a querer ahondar sobre el diálogo entre el tejido adiposo y el riñón, específicamente a continuar profundizando sobre la importancia que este diálogo tiene durante el desarrollo del cáncer de riñón. Así, comenzamos a trabajar con fragmentos de tejido adiposo renal humano proveniente de pacientes con tumores renales (ARTh), y tejido adiposo renal normal, provenientes de donantes vivos de riñón (ARNh). Observamos que ARTh expresa cantidades significativamente mayores de leptina, ObR y versican, así como cantidades significativamente menores de perilipina, adiponectina y AdipoR1, respecto a ARNh. Además, los medios condicionados (MCs) de ARTh aumentaron la capacidad metastásica de células epiteliales renales humanas tumorales y no tumorales. En este proyecto nos proponemos continuar con el estudio de los fragmentos ARNh y ARTh; así como los efectos de ambos tipos de tejido sobre el desarrollo del tumor renal. Específicamente, estudiaremos la capacidad de los diferentes MCs de estimular el proceso de angiogénesis y evaluaremos la presencia de exosomas en los diferentes MCs. Ademas, estudiaremos la expresión de diferentes marcadores de pardización en ARTh y ARNh. Por otra parte, evaluaremos cambios de la expresión de diferentes marcadores celulares de la transición epitelio-mesenquimal (EMT) de células epiteliales al ser incubadas con MCs-ARTh y ?ARNh; y cambios en la morfogénesis y alteraciones en la migración/invasión de las células epiteliales renales co-cultivadas con fragmentos de los diferentes tejidos adiposos. Por último, pondremos a punto la obtención de cultivos primarios de células epiteliales renales tumorales humanas, a partir de fragmentos de tumores renales obtenidos por intervención quirúrgica.Between the epithelial tissue and the fibroblastic / adipose stroma an essential exchange of information is established for normal morphogenesis and functionality, as well as for the development of cancer. We study kidney cancer because it is the fifth most common type of cancer worldwide. It is also associated with high mortality and its incidence has increased significantly in recent years. We recently demonstrated that human adipose tissue from renal cell carcinoma near the tumor, regulates the behavior of tumor and non-tumor human renal epithelial cells differently than adipose tissue farther away from the tumor (Campo-Verde-Arbocco et al., 2017). Then, we started to work with fragments of human renal adipose tissue from patients with renal tumors (ARTh), and normal renal adipose tissue, from living donors of the kidney (ARNh). We found that ARTh expresses significantly higher amounts of leptin, ObR and versican, as well as significantly lower amounts of perilipin, adiponectin and AdipoR1, relative to ARNh. In addition, conditioned media (MCs) of ARTh increased the metastatic capacity of tumor and non-tumor renal human epithelial cells. In this project we intend to continue with the study of the ARNh and ARTh fragments; as well as the effects of both types of tissue on the development of the renal tumor. Specifically, we will study the ability of different MCs to stimulate the angiogenesis process and evaluate the presence of exosomes in the different MCs. In addition, we will study the expression of different browning markers in ARTh and ARNh. On the other hand, we will evaluate changes in the expression of different cellular markers of epithelial-mesenchymal transition of epithelial cells when incubated with MCs-ARTh and -ARNh; and changes in morphogenesis and alterations in the migration / invasion of the renal epithelial cells co-cultured with fragments of the different adipose tissues. Finally, we will obtain the production of primary cultures of human tumor renal epithelial cells, from fragments of renal tumors obtained by surgical intervention

A novel and alternative in vitro method using microwave to study the epithelial-stromal interactions

The goal of the present work was to obtain a simple and reproducible experimental model that would maintain the characteristics of the extracellular physiological environment of breast epithelial cells, both in factors as well as stromal structure, on which we could grow and evaluate changes of normal and tumor breast cells. 3T3-L1 pre-adipocytes (breast stromal cell model) were cultured and irradiated in a microwave oven at different times and potencies. In order to lose their proliferation ability, cells had to be irradiated twice at 650 Watts with a two-minute pulse each. The characteristics of the treated stromal support were analyzed for cell morphology, presence of DNA and proteins. We then evaluated on this support the effect on proliferation and migration of both normal and tumor - murine and human - breast epithelial cells. Both cell types increased their proliferation, while only tumor cells increased migration, thus improving their metastatic capacity. We believe this is a new and simple experimental method of studying epithelial-stromal cell interaction.Fil: Sacca, Paula Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pistone Creydt, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Tesone, Amelia Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Calvo, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentin

Adipocyte differentiation influences the proliferation and migration of normal and tumoral breast epithelial cells

Stromal tissue regulates the development and differentiation of breast epithelial cells, with adipocytes being the main stromal cell type. The aim of the present study was to evaluate the effect of adipocyte differentiation on proliferation and migration, as well as to assess the activity of heparanase and metalloproteinase-9 (MMP-9), in normal (NMuMG) and tumoral (LM3) murine breast epithelial cells. NMuMG and LM3 cells were grown on irradiated 3T3-L1 cells (stromal support, SS) at various degrees of differentiation [preadipocytes (preA), poorly differentiated adipocytes (pDA) and mature adipocytes (MA)] and/or were incubated in the presence of conditioned medium (CM) derived from each of these three types of differentiated cells. Cells grown on a plastic support or in fresh medium served as the controls. Cell proliferation was measured with a commercial colorimetric kit, and the motility of the epithelial cells was evaluated by means of a wound-healing assay. Heparanase activity was assessed by quantifying heparin degradation, and the expression of MMP-9 was determined using Western blotting. The results indicate that cell proliferation was increased after 24 and 48 h in the NMuMG and LM3 cells grown on preA, pDA and MA SS. In the NMuMG cells cultured on SS in the presence of all three types of CM, proliferation was enhanced. LM3 cell migration was increased in the presence of all three types of CM and in cells grown on preA SS. Heparanase activity was increased in the NMuMG cells incubated with all three types of CM, and in the LM3 cells incubated with the CM from pDA and MA. Both the NMuMG and LM3 cell lines presented basal expression of MMP-9; however, a significant increase in MMP-9 expression was observed in the LM3 cells incubated with each of the three types of CM. In conclusion, adipocyte differentiation influences normal and tumoral breast epithelial cell proliferation and migration. Heparanase and MMP-9 appear to be involved in this regulation. The experimental model presented in this study is in keeping with the characteristics of the physiological environment of breast epithelial cells, in terms of both the soluble and insoluble factors present and the stromal structure per se.Fil: Pistone Creydt, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina; ArgentinaFil: Sacca, Paula Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina; ArgentinaFil: Tesone, Amelia Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina; ArgentinaFil: Vidal, Luciano. Stem Center; EspañaFil: Calvo, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentin

Role of the Shiga toxin in the Hemolytic Uremic Syndrome

En los últimos años, las infecciones por Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) y el desarrollo del Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) han cobrado tal relevancia desde el punto de vista clínico y como problema de salud pública, que se considera uno de los patógenos emergentes más importantes de infecciones transmitidas por alimentos. Las infecciones por STEC pueden manifestarse dentro de un amplio espectro clínico, tales como infecciones asintomáticas intestinales, diarrea acuosa, diarrea sanguinolenta (colitis hemorrágica) y complicaciones sistémicas conocidas con el nombre de SUH. En Argentina, el SUH es la principal causa pediátrica de insuficiencia renal aguda y la segunda de insuficiencia renal crónica. Hasta el presente no existe un tratamiento específico para tratar las infecciones por STEC y disminuir la progresión del SUH. Los mecanismos por los cuales la toxina Shiga (Stx) induce SUH pueden ayudar a encontrar nuevas estrategias para impedir o mejorar el pronóstico del SUH. En este artículo se describen recientes progresos que contribuyen a entender el papel de Stx en la patogénesis del SUH y nuevas estrategias usadas para prevenir el pasaje de la toxina a la circulación sistémica durante la fase diarreica o luego del establecimiento del SUH.In the last years, infection associated with Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) and subsequent Hemolitic-Uremic Syndrome (HUS) became relevant as a public health since it was considered as one of the most important emergent patogen present in the food contaminated by cattle feces. STEC infection may be asymptomatic or begins with a watery diarrhea that may or may not progress to bloody diarrhea (hemorrhagic colitis) and HUS. In Argentina, HUS is the most common pediatric cause of acute renal insufficiency and the second cause of chronic renal failure. Up to now, STEC infection lacks of known effective treatment strategies that diminish risk of progression to HUS. The mechanisms by which Shiga toxin (Stx) induce HUS may help to find strategies to prevent or ameliorate HUS. In this article, recent progress that has contributed to understanding the disease pathogenesis of STEC is reviewed. New strategies to prevent further uptake of Shiga from the gut, either during the diarrheal phase or once HUS has developed are discussed.Fil: Pistone Creydt, Virginia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Nuñez, Pablo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; ArgentinaFil: Boccoli, Javier. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; ArgentinaFil: Silberstein, Claudia Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; ArgentinaFil: Zotta, Elsa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; ArgentinaFil: Goldstein, Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; ArgentinaFil: Ibarra, Cristina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; Argentin

High Intake of Maternal Milk Prevents the Development of Mammary Cancer in Pups Maintaining Elevated Ingestion of Saturated Fat

Environmental factors in early life have a strong implication on the development of diseases in adult life. Nutritional changes during perinatal life can modify the susceptibility to develop breast carcinoma. In this report, we studied the influence of a diet high in saturated fat in the development of breast cancer, in rats that maintained a differential milk intake during their lactation period. We also analysed the possible mechanisms involved in tumor development. We compared mammary carcinogenesis in Sprague-Dawley adult rats, grown-up in litters of 3 (L3) or 8 (L8) pups per mother during lactation to induce a differential consumption of maternal milk. After weaning all pups were fed with a diet high in saturated fat “HF” (40% of energy from lipids) until adulthood. At 55 days of age, the animals were treated with a single dose of dimethylbenzanthracene to study tumor latency, incidence and progression. Histological and immunohistochemical studies were performed. We observed that animals that maintained high milk intake (L3) had lower mammary cancer incidence than animals that maintained lower milk consumption (L8; P <0.05) when exposed to a HF diet. Tumor latency and rate of tumor growth did not show variations between the groups. However, the mitotic index (P< 0.05) and the expression of CD1 were significantly lower, in tumors of L3 respect to L8 (P <0.01). Animals with greater consumption of breast milk develop tumors that proliferate less and tend to have a more pronounced apoptotic process, although when maintaining a high consumption of saturated fat. These results may explain, in part, the lower incidence observed in this group of animals. Our work reflects the importance of lactation during postnatal life in the prevention of breast cancer, despite other nutritional factors that may act as promoters of tumor development throughout life, such as the consumption of saturated fat.Fil: Santiano, Flavia Eliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Sasso, Corina Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Zyla, Leila Ester. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Bruna, Flavia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Campo Verde Arbocco, Fiorella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Pistone Creydt, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: López Fontana, Constanza Matilde. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Caron, Ruben Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentin

Effects of thyroxine on apoptosis and proliferation of mammary tumors

Hypothyroidism is a protective factor against breast cancer but long-term exposure or overdoses of thyroid replacement therapy with thyroxine (T4) may increase breast cancer risk. Objective: to study, in vivo and in vitro, the effects of T4 on the proliferation and apoptosis of mammary tumors of hypo- and euthyroid rats, and the possible mechanisms involved in these effects. Material and Methods: Female Sprague-Dawley rats were treated with a single dose of dimethylbenzathracene (15 mg/rat) at 55 days of age and were divided into three groups: hypothyroidism (HypoT; 0.01% 6-N-propyl-2-thiouracil -PTU- in drinking water, n = 20), hypothyroidism treated with T4 (HypoT + T4; 0.01% PTU in drinking water and 0.25 mg/kg/day T4 via sc; n = 20) and EUT (untreated control, n = 20). At sacrifice, tumor explants from HypoT and EUT rats were obtained and treated either with 10−10 M T4 in DMEM/F12 without phenol red with 1% Charcoalized Fetal Bovine Serum or DMEM/F12 only for 15 min to evaluate intracellular signaling pathways associated with T4, and 24 h to evaluate changes in the expression of hormone receptors and proteins related to apoptosis and proliferation by immunohistochemistry and Western Blot. Results: In vivo, hypothyroidism retards mammary carcinogenesis but its treatment with T4 reverted the protective effects. In vitro, the proliferative and anti-apoptosis mechanisms of T4 were different regarding the thyroid status. In EUT tumors, the main signaling pathway involved was the cross-talk with other receptors, such as ERα, PgR, and HER2. In HypoT tumors, the non-genomic signaling pathway of T4 was the chief mechanism involved since αvβ3 integrin, HER2, β-catenin and, downstream, PI3K/AKT and ERK signaling pathways were activated. Conclusion: T4 can regulate mammary carcinogenesis by mainly activating its non-genomic signaling pathway and by interacting with other hormone or growth factor pathways endorsing that overdoses of thyroid replacement therapy with T4 can increase the risk of breast cancer.Fil: Zyla, Leila Ester. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Cano, Rocio Yasmin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Gomez, Silvina Esther. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Escudero, Alexa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Rey Echalecu, Lara Sofía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Santiano, Flavia Eliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Bruna, Flavia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Pistone Creydt, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Caron, Ruben Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: López Fontana, Constanza Matilde. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentin

Estradiol and progesterone regulate proliferation and apoptosis in colon cancer

Epidemiological studies describe estrogens as protectors in the development of colon cancer in postmenopausal women treated with hormone replacement therapy. However, the role of progesterone in colon cancer has been minimally studied and the results are controversial. For the above, the objective of this work was to determine the hormonal regulation exerted by natural ovarian steroids on proliferation and apoptosis in an experimental model of colon cancer in ovariectomized rats treated with 17-beta estradiol and progesterone. Sprague–Dawley rats were exposed to the carcinogen 1,2-dimethylhydrazine to induce colon tumors. Thirty days later, the rats were ovariectomized and treated with estradiol (60 μg/kg), progesterone (10 mg/kg), estradiol plus progesterone (60 μg/kg and 10 mg/kg) or vehicle. We observed no significant differences in colon cancer incidence and tumor multiplicity between the groups. Nevertheless, we observed a decrease in PCNA expression and a greater number of apoptotic index, higher expression of caspase 3, cleaved PARP and cleaved caspase 8 in tumors, confirming the activation of the extrinsic pathway of apoptosis by the combined treatment. In addition, we observed a higher expression of estrogen receptor beta in these tumors. We conclude that the action of both hormones, estradiol and progesterone, is necessary to reduce proliferation and increase apoptosis in colon tumors, probably through estrogen receptor beta activation.Fil: Sasso, Corina Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Santiano, Flavia Eliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Campo Verde Arbocco, Fiorella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Zyla, Leila Ester. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Semino, Silvana Noemí. Universidad Nacional de Cuyo. Hospital Universitario; ArgentinaFil: Guerrero Gimenez, Martin Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Pistone Creydt, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: López Fontana, Constanza Matilde. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Caron, Ruben Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentin

Human renal adipose tissue from normal and tumor kidney: ITS influence on renal cell carcinoma

Tumor cells can interact with neighboring adipose tissue. We evaluated components present in human adipose explants from normal (hRAN) and kidney cancer (hRAT) tissue, and we evaluated the effects of conditioned media (CMs) from hRAN and hRAT on proliferation, adhesion and migration of tumor and non- tumor human renal epithelial cell lines. In addition, we evaluated the expression of AdipoR1, ObR, CD44, vimentin, pERK and pPI3K on cell lines incubated with CMs. hRAN were obtained from healthy operated donors, and hRAT from patients who underwent a nephrectomy. hRAT showed increased levels of versican, leptin and ObR; and decreased levels of perilipin, adiponectin and AdipoR1, compared to hRAN. Cell lines showed a significant decrease in cell adhesion and increase in cell migration after incubation with hRAT-CMs vs. hRAN- or control-CMs. Surprisingly, HK-2, 786- O and ACHN cells showed a significant decrease in cell migration after incubation with hRAN-CMs vs. control-CMs. No difference in proliferation of cell lines was found after 24 or 48 h of treatment with CMs. AdipoR1 in ACHN and Caki-1 cells decreased significantly after incubation with hRAT-CMs vs. hRAN-CMs and control-CMs. ObR and CD44 increased in tumor line cells, and vimentin increased in non-tumor cells, after incubation with hRAT-CMs vs. hRAN-CMs and control-CMs. We observed an increase in the expression of pERK and pPI3K in HK-2, 786-O and ACHN, incubated with hRAT- CMs. In conclusion, results showed that adipose microenvironment can regulate thebehavior of tumor and non tumor human renal epithelial cells.Fil: Bruna, Flavia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina. Universidad del Desarrollo; Chile. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Odontologia; ArgentinaFil: Romeo, Leonardo Rafael. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina. Hospital Español de Mendoza; ArgentinaFil: Campo Verde Arbocco, Fiorella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Contador, David. Universidad del Desarrollo; ChileFil: Gomez, Silvina Esther. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Santiano, Flavia Eliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Sasso, Corina Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Zyla, Leila Ester. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: López Fontana, Constanza Matilde. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Calvo, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Caron, Ruben Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Pistone Creydt, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Comparative proteomics of soluble factors secreted by human breast adipose tissue from tumor and normal breast

Tumor progression depends on the tumor-stroma interaction. In the breast, adipose tissue is the predominant stromal type. We have previously demonstrated that conditioned media (CMs) from explants of human adipose tissue of tumor breasts (hATT) increase proliferation and migration of breast cancer epithelial cells when compared to human adipose tissue from normal breasts (hATN). In this work, we aim to identify specific proteins and molecular/biological pathways associated with the secretion profile of hATT and hATN explants. hATT-CMs and hATN-CMs were separated by SDS-PAGE and analyzed by means of two-dimensional nano-liquid chromatography-mass spectrometry. The data was analyzed using ProteoIQ and FunRich software. In addition, 42 cytokines from hATTCMs and hATN-CMs were assayed by a protein antibody assay. Compared to hATNCMs, hATT-CMs showed greater protein diversity. We found that hATT-CMs presented a greater amount of proteins related to complement system activity, metabolism and immune system, as well as proteins involved in a variety of biological processes such as signal transduction and cell communication. Specifically, apolipoprotein AI and AII, complement component 3, and vimentin and desmin were significantly increased in hATT-CMs versus hATN-CMs. Moreover, a multivariate discriminant analysis of the cytokines detected by the array showed that IL-6, MCP-2 and GRO cytokines were sufficient and necessary to differentiate hATT-CMs from hATN-CMs. This analysis also showed that the levels of these three cytokines, taken together, correlated with stage and histological grade of the tumor in the hATT-CMs group, and with body mass index in the hATN-CMs group.Fil: Fletcher, Sabrina Johanna. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Hapon, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Callegari, E.. University Of South Dakota; Estados UnidosFil: Crosbie, M. L.. Complejo Médico Policial "Churruca Visca"; ArgentinaFil: Santiso, N.. Complejo Médico Policial "Churruca Visca"; ArgentinaFil: Ursino, A.. Complejo Médico Policial "Churruca Visca"; ArgentinaFil: Amato, A. R.. Complejo Médico Policial "Churruca Visca"; ArgentinaFil: Gutiérrez, A.. Complejo Médico Policial "Churruca Visca"; ArgentinaFil: Sacca, Paula Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Dreszman, R.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pérez, A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Matemática; ArgentinaFil: Caron, Ruben Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Calvo, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pistone Creydt, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentin

El tejido adiposo humano que rodea al tumor renal regula la transición epitelio mesenquimal de células epiteliales renales tumorales y no tumorale

En el desarrollo y el mantenimiento de unfenotipo canceroso, es necesaria la comunicación bidireccional entre lascélulas epiteliales y el estroma circundante. Recientemente demostramos que eltejido adiposo humano perirrenal tumoral (hRAT), presenta un perfil deexpresión de proteínas diferente al del tejido adiposo humano de un riñónnormal (hRAN). En el presente trabajo evaluamos: 1) tamaño de los adipocitoshRAT vs. hRAN utilizando el programa Image J. Ademas, en las líneas celularesepiteliales renales humanas tumorales (786-O, ACHN y Caki-1) y no tumorales(HK-2) incubadas durante 2 o 24 hs con hRAT, hRAN o control-MCs, evaluamos: 2)marcadores de la Transición Epitelio Mesenquimal (EMT): vimentina, desmina,N-cadherina y 3) proteínas reguladoras del ciclo celular: pRB/RB y ciclina D1.Los explantos de tejidos fueron obtenidos de pacientes con tumores renales(hRAT=14) y de donantes vivos de riñón (hRAN=13). Los MCs de hRAT y hRAN fueroncolectados luego de 24 hs de incubación y con ellos se trataron las células. Laexpresión de vimentina, desmina, N-cadherina, pRB/RB y ciclina D1 se cuantificómediante western blot. Las diferencias estadísticas entre los grupos fueronevaluadas por medio de ANOVA de una vía con test de Tukey post hoc. Los adipocitos hRAT mostraron un tamañosignificativamente menor en comparación con los adipocitos hRAN (p<0.001).Luego de la incubación con los hRAT-MCs la expresión de vimentina, desmina yN-cadherina incrementó significativamente en las células HK-2 y 786-O vs. hRAN o control-MCs (p<0.05).Mientras tanto, en 786-O y ACHN incubadas durante 2 hs con hRAT-MCs vs. hRAN- o control-MCs, pRB/RBdisminuyó (p<0.05) y la expresión de ciclina D1 aumentó (p<0.05). Enconclusión, la diferencia observada en el tamaño de los adipocitosperitumorales y no tumorales sugiere que el tumor ejerce un efecto lipolíticosobre el tejido adiposo estromal. Si bien la expresión de ciclina D1 incrementópor efecto del hRAT-MCs, el tejido adiposo peritumoral no estimula latransición G1/S en células epiteliales renales. El tejido adiposo peritumoralregula la transición epitelio-mesenquimal en células epiteliales renales,promoviendo así su capacidad migratoria.Fil: Ferrando, Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina. Hospital Español de Mendoza (hem) ; Gobierno de la Provincia de Mendoza;Fil: Romeo, Leonardo Rafael. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Gomez, Silvina Esther. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Orelagio, A.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Moya Morales, Daiana Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Zyla, Leila Ester. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: López Fontana, Constanza Matilde. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Caron, Ruben Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Bruna, Flavia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina. Universidad del Desarrollo; Chile. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Odontologia; ArgentinaFil: Pistone Creydt, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; Argentina. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas; ArgentinaIV Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina: nuevas evidencias y cambios de paradigmas en Ciencias BiológicasMendozaArgentinaSociedad de Biología de CuyoSociedad Argentina de BiologíaSociedad de Biología de CórdobaAsociación de Biología de TucumánSociedad Chilena de Reproducción y DesarrolloSociedad de Biología de Rosari