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Estabelecimento de uma plataforma de teste de compostos em Schistosoma mansoni utilizando inibidores de fatores de modificação epigenética
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Previous issue date: 2016CNPqCAPESFAPEMIGFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.A esquistossomose é a segunda doença parasitária mais
prevalente no mundo.
Atualmente, seu tratamento depende de uma única droga
, o Praziquantel; e devido a
identificação de parasitos resistentes, o desenvolv
imento de novas drogas é
necessário. No Brasil, essa doença afeta cerca de 25
milhões de pessoas e não há
uma plataforma de teste de novas drogas estabelecida
. Com o intuito de estabelecer
uma plataforma de testes de drogas anti-
Schistosoma mansoni
, foram padronizadas
3 metodologias para triagem de drogas em esquistossômul
os, o ensaio de
fluorescência utilizando alamarBlue® , a análise quan
titativa de lactato e o ensaio
visual por coloração com iodeto de propídio. A análi
se quantitativa de lactato e o
ensaio visual por coloração com iodeto de propídio
demonstraram ser mais
sensíveis e confiáveis que o ensaio de fluorescência
com alamarBlue® e foram
escolhidos para a triagem de drogas em esquistossômulo
s. Para a triagem de
drogas em vermes adultos foi utilizado o
software
para análise de movimento
WormAssay. Compostos desenvolvidos para fatores de m
odificação epigenética por
colaboradores do consórcio AParaDDisE foram utilizado
s para a validação da
plataforma. Após a triagem de drogas em esquistossômulo
s, os compostos ativos
foram selecionados para a determinação do IC50 e ín
dice de seletividade. Nesse
trabalho um total de 252 compostos foram testados e
132 foram ativos em S.
mansoni
, desse, 72 foram ativos em esquistossômulose vermes
adultos, 50 foram
ativos somente em vermes adultos e 8 foram ativos s
omente em esquistossômulos.
Dentre os compostos ativos foi possível determinar
o índice de seletividade de 29
inibidores. Os compostos JQ1, MC3031, MC2141, MC290
8, MC3668, MC2705,
MC3073, C-646 e SPV-106 foram considerados potenciai
s drogas para o tratamento
da esquistossomose, uma vez que foram ativos nas duas
fases do parasito e
exibirem alto índice de seletividade. Esses resultad
os mostram que os fatores de
modificações epigenéticas podem apresentar important
e papel na viabilidade e
sobrevivência do
S. mansoni
, confirmando o potencial dessas enzimas como alvo
de
drogas.Schistosomiasis is the second most prevalent parasit
ic disease in the world.
Currently, the treatment of this disease rely on a
single drug, Praziquantel; and due
to the identification of resistant parasites, the d
evelopment of new drugs is urged. In
Brazil this disease affects around 25 million people
and an anti-
Schistosoma
mansoni
drug screening platform is inexistent. In order to s
olve this problem, 3
in
vitro
methodologies were standardized for schistosomula, t
he alamarBlue®
fluorescence assay,
lactate quantitative analysis and visual assay using
propidium
iodide staining. The lactate quantitative analysis an
d visual assay using propidium
iodide staining proved to be more sensitive and reli
able than the alamarBlue®
fluorescence
assay, thus were chosen for the schistosomula drug s
creening. For the
drug screening in adult worms, the movement analysis
software
WormAssay was
standardized and used. Compounds developed for epige
netic modification factors by
collaborators of A-ParaDDisE consortium were tested fo
r platform validation. After
the drug screening in schistosomula, the active compo
unds were analyzed for its
IC50 and selectivity index determination. In this wo
rk, a total of 252 compounds were
tested and
132 compounds were active in
S. mansoni
, among those, 73 were active
in schistosomula and adult worms, 50 were active in a
dult worms, only, and 8 were
active in schistosomula only. Among the active compo
unds, it was possible to
determine the selectivity index of 29 inhibitors. T
he compounds JQ1, MC3031,
MC2141, MC2908, MC3668, MC2705, MC3073, C-646 e SPV-
106 were considered
potential drugs for schistosomiasis therapy conside
ring that they were active in both
Schistosoma
stages and
exhibited a high
selectivity index and/or low IC50. The
results showed that epigenetic modifications factors
play an important role in parasite
viability and survival, confirming the potential of
these enzymes as drug targets