Generación de una Línea Transgénica de Pez Cebra para Estudiar la Remodelación de Uniones Adherentes

El remodelado dinámico de los contactos adhesivos intercelulares o uniones adherentes (UAs) mediado por la proteína cadherina epitelial E (cadh-E) es clave para coordinar los movimientos migratorios celulares durante la embriogénesis animal. Debido a la simplicidad estructural y a la accesibilidad experimental, el embrión de pez cebra (Danio rerio) se ha establecido como un modelo para estudiar migración celular y para entender la dinámica del tráfico vesicular y distribución de cadh-E en UAs. En el presente proyecto se propuso generar una línea transgénica estable de pez cebra (cadh-E-KikGR) para la expresión de cadh-E fusionada a la proteína fotoconvertible KikGR para visualizar in vivo la remodelación de UAs. En una primera etapa se analizó la expresión endógena nativa de cadh-E y se comparó con la expresión transgénica de cadh-E fusionada a la proteína reportera fluorescente GFP (Green Fluorescent Protein) como una primera estrategia de monitoreo. Se observó que cadh-E no se localiza en membranas como la cadh-E endógena por lo que la fusión no sería funcional una vez expresada en el embrión. El clonado de KikGR, de menor tamaño, en reemplazo de GFP en el vector final de expresión permitirá la obtención del embrión transgénico de interés

DNA damage, alterations in the expression of antioxidant enzyme genes and in the histoarchitecture of gill cells of zebrafish exposed to 17-a-ethinylestradiol

Endocrine disruptors, such as estrogen, are chemical substances with the potential to alter the hormonal balance of organisms. Their origin can be natural or artificial, and they can act at very low doses. The estrogen 17α-ethinylestradiol (EE2) is used worldwide as an oral contraceptive and is a potential contaminant in aquatic ecosystems. It is well documented that these environmental pollutants can act directly or indirectly on the reproductive system, impairing development and fertility. However, little is known about the alteration of the cell oxidative status induced by EE2. The main objective of this study was to evaluate the effect on the gill cells of adult zebrafish exposed in vivo to EE2, analyzing cell histology, DNA damage and the expression levels of genes encoding the main enzymes involved in oxidative stress pathways. The histological study showed that EE2 produces moderate to high damage to the gill tissue, an increase in gill cell DNA damage and the mRNA levels of the genes corresponding to the manganese superoxide dismutase (Mn-sod) and catalase (cat) after exposure to 5 ng/L EE2. The results indicate that EE2 causes tissue alterations, DNA damage and oxidative stress. EE2 produced important alterations in the gills, a fundamental organ for the survival of fish. There is a clear need for further research on the ecological consequences of EDCs on non-target organisms.Fil: Paravani, E. V.. Universidad Nacional de Entre Ríos. Facultad de Ingeniería; ArgentinaFil: Bianchi, M.. Universidad Nacional de Entre Ríos. Facultad de Ingeniería; ArgentinaFil: Querubín Pereyra, P. L.. Universidad Nacional de Entre Ríos. Facultad de Ingeniería; ArgentinaFil: Acosta, M. G.. Universidad Nacional de Entre Ríos. Facultad de Ingeniería; ArgentinaFil: Odetti, Lucia Magdalena. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Cátedra de Toxicología y Bioquímica Legal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; ArgentinaFil: Simoniello, M. F.. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Cátedra de Toxicología y Bioquímica Legal; ArgentinaFil: Poletta, Gisela Laura. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Cátedra de Toxicología y Bioquímica Legal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentin