Multiparametric Semi-quantitative Scoring System for the histological evaluation of marine fish larval and juvenile quality

Gilthead seabream (GSB - Sparus aurata) and European seabass (ESB - Dicentrarchus labrax) are two of the most farmed fish species in EU. However, production of sea bream/bass in the EU has remained stagnant for the last decade and the Mediterranean EU aquaculture faces significant sustainability challenges. In consideration of this, and as it is largely recognized that the success of marine aquaculture strictly depends on the production of good quality larvae/juveniles, in this paper the authors put forward an original standardized tool for the histological assessment of GSB and ESB larva/juveniles. This tool promptly allows to highlight problems in marine fish larval batches because of managerial practices, suggesting to fish farmers which direction take to resolve them. A Multiparametric Semi-quantitative Scoring System (scoring range 1–5) has been originally developed for larval/juvenile histological evaluation and it includes 18 descriptors related to 6 organ districts. The values of each descriptor can be summarized in two indexes: the CHI (Cumulative Histological Index), giving general information about the quality of a fish batch in that precise moment and the OCV (Organ condition value) showing the general condition of each organ and by the individual descriptors. The paper purposes are to describe the MSSS, the criteria established for the score attribution and to supply some indications for the use of the tool

STRUTTURE A CORONA (CROWN-LIKE STRUCTURES) NEL TESSUTO ADIPOSO VISCERALE DI GIOVANILI DI ORATA (SPARUS AURATA): CONSIDERAZIONI SULLA LORO RILEVANZA NEI PESCI

L'accumulo di grasso viscerale nei mammiferi è un fenomeno determinante nell'insorgenza di disturbi metabolici associati all'obesità, condizione provocata da uno squilibrio nutrizionale prolungato che induce il tessuto adiposo bianco ad accumulare trigliceridi nelle cellule adipose, causandone ipertrofia e iperplasia. Nel tessuto adiposo, con adipociti ipertrofici in degenerazione, sono presenti macrofagi che provocano un'infiammazione cronica, ampiamente considerata come fattore causale dell'insulino-resistenza e, infine, del diabete. I macrofagi che infiltrano il tessuto adiposo di mammiferi obesi sono distribuiti attorno agli adipociti morti, formando caratteristiche strutture a corona (crown-like structures-CLS). Istologicamente le CLS sono facilmente riconoscibili, ancor più quando i macrofagi sono immunomarcati con anticorpi specifici. La presenza e il numero di CLS sono considerati, quindi, indicatori di obesità sia in medicina umana sia veterinaria. Nei teleostei, sebbene le funzioni del tessuto adiposo attirino l'attenzione della ricerca, ad oggi non esistono studi sulle CLS e la loro eventuale correlazione con un eccessivo stato d’ingrassamento e conseguenti disturbi metabolici. Durante il progetto Horizon PerformFISH, 293 giovanili di orata (0,8-1,5g), provenienti da avannotterie europee, sono stati sacrificati con una dose letale di MS-222 (50-100mg/L), fissati in soluzione di Bouin e processati al fine di ottenere sezioni istologiche, in seguito colorate con ematossilina-eosina e Schmorl. La valutazione istologica ha previsto l’utilizzo di un sistema semi-quantitativo multiparametrico, punteggiando da 1 a 5 la quantità di tessuto adiposo viscerale; i soggetti sono stati poi ripartiti in base al punteggio ottenuto e conteggiati quelli che presentavano CLS. Infine, per identificare i tipi cellulari osservati nella CLS sono stati eseguiti saggi immunoistochimici con anticorpi mono o policlonali (CD68, CD83, GM-CSFR, G7 e TNFα). Istologicamente i giovanili presentavano un tessuto adiposo viscerale abbondante, a carico del quale si notavano processi infiammatori diffusi, con infiltrato cellulare misto composto principalmente da granulociti acidofili (78%) e mastociti (17%), ma anche da linfociti (9%). Nel tessuto adiposo del 41,6% dei soggetti, sono stati riscontrati adipociti morti o in degenerazione, identificabili grazie a confini cellulari indistinti, circondati da cellule arrangiate a formare una corona. Il citoplasma di tali cellule si presenta vacuolizzato o schiumoso e sono tipicamente raggruppate a formare uno strato singolo, talvolta multicellulare. Nella struttura a corona alcune di queste cellule sono positive alla colorazione di Schmorl, dimostrando la presenza di lipidi ossidati come tipicamente nei macrofagi. Sebbene nessuna immunomarcatura ha tipizzato le cellule componenti le CLS, queste lesioni del tessuto adiposo viscerale osservate nei giovanili di orata sono istomorfologicamente analoghe a quelle descritte nei mammiferi e, inoltre, la loro prevalenza è correlata all'aumentare della quantità di tessuto adiposo. Questa, a nostro avviso, è la prima descrizione in teleosteo di CLS nel tessuto adiposo viscerale, le quali potrebbero rappresentare un indicatore istologico di problemi metabolici come nei mammiferi, quindi sarebbe opportuno approfondirne il significato nei teleostei e la loro rilevanza in termini di benessere

PROPRIETA\u2019 IMMUNOSTIMOLANTI DI PROTECTM IN TROTA IRIDEA (ONCORHYNCHUS MYKISS)

L\u2019utilizzo di alimenti funzionali consente di migliorare lo stato di salute dei pesci allevati, incrementare le performance di crescita, salvaguardare la morfologia del tratto gastrointestinale e l\u2019equilibrio della microflora intestinale, aumentare la resistenza alle malattie infettive (Newaj-Fyzu & Austin, 2015). Questo studio \ue8 stato finalizzato ad indagare in vitrogli effetti immunostimolanti del prodotto commerciale ProtecTM(Skretting, Mozzecane VR) sull\u2019attivit\ue0 di \u201cburst respiratorio\u201d e sulla proliferazione dei leucociti di trota iridea (Oncorhynchus mykiss). Lo studio \ue8 preliminare ad una prova in vivoattualmente in corso finalizzata a valutare l\u2019effetto di ProtecTMsulla risposta immunitaria della trota.L\u2019attivit\ue0 di \u201cburst respiratorio\u201d dei leucociti purificati da rene anteriore di trota (60-100 g, n=6) incubati in micropiastra per 90 minuti con ProtecTM(tal quale o sonicato) LPS, zymosan (160 \u3bcg/ml) e PMA (2.5 \u3bcg/ml, controllo positivo) \ue8 stata misurata mediante chemiluminescenza con luminolo. La proliferazione dei leucociti (n=6) incubati per 72 ore con ProtecTM(tal quale o sonicato), LPS, zymosan (160 \u3bcg/ml e 20 \u3bcg/ml) e PHA (20 \u3bcg/ml, controllo positivo) \ue8 stata valutata mediante metodo colorimetrico con MTT (Bulfon et al., 2016). La prova in vivo, condotta presso una troticoltura intensiva del Friuli Venezia Giulia, contempla un gruppo di trote di controllo (peso medio iniziale 5 g) alimentato con mangime commerciale (Optiline HE, Skretting, Mozzecane VR) e un gruppo di trote alimentato per 10 settimane con ProtecTM. Il razionamento verr\ue0 adattato progressivamente alla crescita dei pesci, secondo quanto indicato dalla ditta mangimistica. Al termine del trial, le trote verranno sottoposte a prelievo di sangue e rene anteriore previa anestesia con MS222 (100 mg/l), per la valutazione dell\u2019attivit\ue0 del lisozima nel siero e dell\u2019attivit\ue0 di \u201cburst respiratorio\u201d dei leucociti (Bulfon et al., 2016).I risultati ottenuti in vitrodimostrano che ProtecTM\ue8 in grado di stimolare significativamente l\u2019attivit\ue0 di \u201cburst respiratorio\u201d e la proliferazione dei leucociti di trota iridea (P 640,05). Specificatamente, ProtecTMsonicato induce una risposta di \u201cburst respiratorio\u201d paragonabile a quella prodotta dagli stimoli LPS e zymosan, mentre ProtecTMnon trattato induce una risposta molto maggiore e paragonabile a quella determinata dalla stimolazione delle cellule con PMA usato come controllo positivo. Dall\u2019altro lato, la proliferazione dei leucociti stimolati con ProtecTMsonicato (20 \u3bcg/ml) \ue8 risultata significativamente maggiore rispetto a quella delle cellule di controllo e delle cellule stimolate con zymosan, paragonabile a quella delle cellule stimolate con PHA e LPS. Gli effetti della somministrazione di ProtecTMsulla risposta immunitaria della trota iridea verranno discussi