Avaliação de métodos para obtenção de proteínas recombinantes.

A utilização de Pichia pastoris para a produção de proteínas recombinantes apresenta inúmeras vantagens que esse sistema agrega, destacando-se a exportação das moléculas para o meio extracelular. Isto permite que a obtenção das proteínas possa ser realizada por métodos de precipitação, com uso de sais neutros ou solventes orgânicos, sem trazer prejuízos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização de sulfato de amônio, acetona e metanol para obtenção da proteína recombinante Bm86 do carrapato Rhipicephalus microplus expressa por P. pastoris. A ação provocada pelos solventes orgânicos ocasionou uma solubilidade parcial das proteínas. Na quantificação por densitometria da proteína rBm86-CG, verificou-se que utilizando acetona (1:2) foi obtido 30,3 mg/L, metanol (1:2) 60,5 mg/L e com sulfato de amônio a 70% (83,5 mg/L). A manutenção das características antigênicas após a precipitação foi verificada pela técnica de Western Blot, sendo que a proteína rBm86-CG obtida pelos três métodos foi reconhecida por anticorpos específicos. Os resultados sugerem que a precipitação com sais neutros e solventes orgânicos pode ser utilizada para obtenção de proteínas recombinantes como a rBm86-CG, sem trazer prejuízos a sua antigenicidade

Composição do meio de cultura afeta produção de proteína recombinante de carrapato rhipicephalus microplus expressa em escherichia coli / composition of the medium culture affects recombinant protein production of the rhipicephalus microplus expressed in escherichia coli.

Introdução: Bactérias tais como Escherichia coli são frequentemente cultivadas a alta densidade para a produção de biomoléculas para estudo em laboratório. Para conseguir isso, as células podem ser incubadas em meios extremamente ricos que aumentam o rendimento total da célula. Nestes meios de cultura, as bactérias podem ter distintos perfis metabólicos. Objetivo: Analisarrendimento de cepas de E. coli incubadas em meio de cultura Luria- Bertani (LB), 2X Extrato de Levedura-Triptona (YT) e TerrificBroth(TB). Metodologia: As culturas de Cepas de Escherichia coli BL21(DE3), C41(DE3) e C43(DE3), foram iniciadas pela transferência de cepas diretamente do lote congelado em glicerol a 20% em meio de LB, 2X YT e TB utilizandopré-inóculo de 3mL, adicionado ampicilina 100?g/mL, a 37ºC por 16h e com agitação de 200rpm

Avaliação de métodos para obtenção de proteínas recombinantes.

A utilização de Pichia pastoris para a produção de proteínas recombinantes apresenta inúmeras vantagens que esse sistema agrega, destacando-se a exportação das moléculas para o meio extracelular. Isto permite que a obtenção das proteínas possa ser realizada por métodos de precipitação, com uso de sais neutros ou solventes orgânicos, sem trazer prejuízos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização de sulfato de amônio, acetona e metanol para obtenção da proteína recombinante Bm86 do carrapato Rhipicephalus microplus expressa por P. pastoris. A ação provocada pelos solventes orgânicos ocasionou uma solubilidade parcial das proteínas. Na quantificação por densitometria da proteína rBm86-CG, verificou-se que utilizando acetona (1:2) foi obtido 30,3 mg/L, metanol (1:2) 60,5 mg/L e com sulfato de amônio a 70% (83,5 mg/L). A manutenção das características antigênicas após a precipitação foi verificada pela técnica de Western Blot, sendo que a proteína rBm86-CG obtida pelos três métodos foi reconhecida por anticorpos específicos. Os resultados sugerem que a precipitação com sais neutros e solventes orgânicos pode ser utilizada para obtenção de proteínas recombinantes como a rBm86-CG, sem trazer prejuízos a sua antigenicidade.Made available in DSpace on 2017-12-13T23:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Avaliacaodemetodosparaobtencaodeproteinas.pdf: 535407 bytes, checksum: 19f99790f7ffead2b67a7881de248366 (MD5) Previous issue date: 2017-12-13bitstream/item/168971/1/Avaliacao-de-metodos-para-obtencao-de-proteinas.pd

Situação atual das estratégias para desenvolvimento de antígenos para o controle da neosporose em bovinos.

Neospora caninum, parasito causador da neosporose, é conhecido mundialmente como um dos principais responsáveis por abortos em rebanhos bovinos, causando prejuízos econômicos à pecuária. As infecções e transmissões do parasito entre os animais são de difícil combate, assim, métodos de diagnóstico e controle devem ser aplicados para reduzir a disseminação do patógeno nas propriedades. A vacinação de rebanhos seria uma alternativa para o controle, contudo, a falta de uma vacina segura e eficaz impede a aplicação deste método de controle. O parasito possui importantes proteínas estruturais que auxiliam no processo de infecção como proteínas de superfície, proteínas dos micronemas, antígenos dos grânulos densos e proteínas das róptrias. Antígenos dessas organelas e da superfície do parasito estão sendo atualmente estudados como imunógenos, aplicados isolados ou em associações, com o objetivo de avaliar a resposta imunológica induzida em modelos animais. No estudo de vacinas experimentais, diferentes abordagens são utilizadas nas formulações, como vacinas vivas, vacinas de DNA, vacinas utilizando vetores biológicos e vacinas de subunidades recombinantes, geralmente desenvolvidas com o auxílio da vacinologia reversa. O contraste observado nos níveis de citocinas e taxas de proteção da transmissão vertical em animais de laboratório vacinados e, posteriormente, desafiados com N. caninum, revela a complexidade em torno de seus mecanismos de invasão e que muito mais deve ser estudado na busca de uma vacina eficaz com capacidade de proteger a bovinocultura. Dessa forma, o objetivo desta revisão é abordar os alvos vacinais e estratégias experimentais empregadas atualmente no controle da infecção por N. caninum.bitstream/item/165046/1/Situacao-atual-das-estrategias-desenvolvimento-de-antigenos.pdfNa publicação o nove do autor Renato Andreotti e Silva está como Renato Andreott

A critical appraisal of current knowledge and future directions of ergophthalmology : consensus document of the ICOH committee on 'Work and Vision'

In the past, occupational health gave scant attention to the visual apparatus. Studies on issues relating to 'work and vision' have predominantly addressed industrial accidents and the toxic effects of exposure to chemical and physical agents, with secondary prevention being more common than primary prevention. In recent years, the huge transformations implemented in workplaces, mainly due to computer-based technologies, demand a progressively higher efficiency of the eye and the related nervous system components that co-ordinate eye movements and accommodation. At the moment these aspects are managed by medical, psychosocial and a variety of technical disciplines, without any shared criteria, terminology and method. Objectives of the Committee are: to investigate holistically the many possible hazards associated to the occupational visual performance; to come to a consensus on terminology, risk assessment and health surveillance procedures. The present status of research and practice in ergophthalmology does not allow for clear-cut decisions about health risk and nor is there a clear direction on the prevention of work-related ocular and visual disturbances and disorders. Specifically, at least three determinants must be objectively considered, namely: (a) visual effort; (b) environmental agents; (c) individual characteristics. Although criteria exist for the evaluation of some of these determinants, a greater refinement is necessary 'for a good working life' of the visual apparatus. The ICOH Scientific Committee on 'Work and Vision' is seeking to systematically develop this matter, yielding a more rational and complete approach to the relationship between work and vision