Coleta de folhas do cafeeiro e extração de DNA genômico de alta qualidade.

Para a amplificação do DNA in vitro, é necessário que o DNA genômico seja de boa qualidade. É comum que seja realizada a coleta do tecido vegetal em local distante de onde será feita a extração e análises do DNA e muitas vezes, o armazenamento inadequado das amostras favorece as reações de oxidação, resultando na redução da qualidade deste. Realizou-se este trabalho com o objetivo de estabelecer um método simples e eficiente para coleta e armazenamento de folhas de Coffea arabica visando a obtenção de DNA de boa qualidade. O trabalho foi realizado no Laboratório de Análise de Sementes da Universidade Federal de Lavras, envolvendo doze tratamentos e duas testemunhas. Foram combinados os fatores umidade da folha (seca ou úmida) x tempo de armazenamento (24h e 48h) x condição do ambiente (TºC ambiente ou 4ºC) x utilização de sílica no recipiente de armazenamento da folha (com ou sem sílica). Foram utilizados dois controles, onde as folhas coletadas foram armazenadas no campo em gelo ou em N2 líquido e submetidas à extração do DNA logo após a sua coleta. A avaliação da qualidade do DNA foi feita pela eletroforese do DNA genômico em gel de agarose 0,7% e pela amplificação de fragmentos de DNA utilizando-se um par de primer microssatélite. Os resultados indicaram que a utilização da sílica quando as folhas estavam secas e o armazenamento das folhas a 4ºC por 24h ou 48 h são favoráveis à oxidação das amostras, resultando em um DNA de má qualidade. A extração do DNA de alta qualidade passível de ser utilizado em PCR é viável quando folhas secas ou úmidas são coletadas e armazenadas em sacos plásticos por até 48 horas antes do início do procedimento da extração

Genetic purity certificate in seeds of hybrid maize using molecular markers.

Um dos principais atributos que conferem à semente uma alta qualidade é sua pureza genética, sendo a principal causa de contaminação em sementes de milho híbrido, a ocorrência de autofecundação do parental feminino. No entanto, ainda não existem metodologias seguras e rápidas para detectar tais contaminações. Desta forma, o presente trabalho foi desenvolvido objetivando certificar a pureza genética em sementes de milho híbrido por meio de diferentes técnicas de marcadores bioquímicos e de DNA. Sementes de dois híbridos e de suas respectivas linhagens, provenientes do programa de melhoramento da Universidade Federal de Lavras foram avaliadas por padrões eletroforéticos das isoenzimas álcool desidrogenase (ADH), esterase (EST), fosfatase ácida (ACP), glutamato-oxalacetato transaminase (GOT), malato desidrogenase (MDH), isocitrato desidrogenase (IDH), 6-fosfoglucamato desidrogenase (PGDH), fosfoglucomutase (PGM), catalase (CAT) e ß-glucosidade (ßGLU) e por marcadores microssatélites. Os sistemas enzimáticos que permitiram separar os híbridos de seus respectivos progenitores foram a catalase, a isocitrato desidrogenase e a esterase, sendo que para a esterase foi observada segregação mendeliana para o híbrido UFLA 8/3, o que torna a certificação da pureza genética mais segura. Os microssatélites além de terem sido eficientes na diferenciação dos híbridos e das linhagens parentais, apresentaram-se como uma técnica de análise rápida, precisa e independente do ambiente. Como o padrão de amplificação dos microssatélites não foi influenciado quando se utilizou o DNA extraído de sementes inteiras ou de folhas, torna-se possível a utilização de sementes como fonte de DNA, o que acelera e facilita a execução das análises de pureza genética. One of the main features that confer high quality to the seed is its genetic purity, in which one of the major causes of contamination is the self-pollination of the female parent. Up to date, there is no accurate and fast methods for detecting such contamination. Thus, this work was carried out to certify the genetic purity in seeds of hybrid maize using different biochemical and DNA-based markers. Two single-cross hybrids and their parental lines derived from the maize breeding program at UFLA were evaluated by isoenzymatic pattern of alcohol dehydrogenase (ADH), esterase (EST), acid phosphatase (ACP), glutamate-oxaloacetate transaminase (GOT), malate dehydrogenase (MDH), isocitrate dehydrogenase (IDH), phosphoglucomutase (PGM), 6-phosphoglucomate dehydrogenase (PGDH), catalase (CAT) and ß-glucosidade (ßGLU) and by microsatellites markers. The enzymatic systems that were able to distinguish the hybrids from their parental line were the catalase, the isocitrate dehydrogenase and the esterase. The esterase showed a Mendelian segregation pattern for UFLA 8/3 hybrid, that enables a safer genetic purity certificate. Microsatellites were able to differentiate the hybrid lines and the respective parental lines. Moreover, this technique was fast, precise and without environment effects. For microsatellites, the amplification pattern was identical when young leaves or seeds were used as DNA source. The possibility of using seeds as DNA source would accelerate and facilitate the role process of the genetic purity analysis

Capacidade de armazenamento de sementes de Coffea arabica L. em diferentes estádios de maturação e submetidas à diferentes métodos de secagem.

O momento da colheita e os métodos de secagem podem influenciar a qualidade de sementes de cafeeiro durante o armazenamento. Este trabalho foi realizado com o objetivo de estabelecer os efeitos do estádio de desenvolvimento e do método de secagem sobre a qualidade fisiológica e a capacidade de armazenamento de sementes de cafeeiro. Os ensaios foram realizados nos Laboratórios de Análise de Sementes e Eletroforese do Departamento de Agricultura da UFLA. Os frutos do cultivar Rubi foram colhidos, despolpados, desmucilados por fermentação à 30ºC por 24 horas e as sementes lavadas e deixadas sobre papel para retirada da água superficial, antes de serem submetidas à secagem convencional (à sombra) e secagem em secador estacionário à temperatura de 35ºC. Como testemunha foram analisadas sementes sem secagem. As avaliações foram feitas imediatamente após os tratamentos de secagem e após quatro e oito meses de armazenamento. As sementes foram armazenadas a 10ºC em embalagens plásticas e herméticas. Foram realizados os testes de germinação, de protrusão radicular, de matéria seca de plântulas, de índice de velocidade de emergência, de condutividade elétrica, além de análises eletroforéticas da enzima endobmananase e de proteínas resistentes ao calor. O delineamento foi inteiramente ao acaso em esquema fatorial 2 (estádios de desenvolvimento) x 3 (secagens) x 3 (tempo de armazenamento), com 4 repetições. As sementes submetidas à secagem perderam vigor e viabilidade, principalmente quando colhidas no estádio verdecana, sendo que a secagem a 35ºC se mostrou mais prejudicial à qualidade fisiológica das sementes. A presença ou intensidade de bandas de proteínas resistentes ao calor estão associadas à secagem das sementes. Há maior atividade da enzima endoßmananase em sementes colhidas no estádio cereja que em sementes do estádio verdecana. Há um aumento da atividade da enzima na medida em que se aumenta o período de armazenamento

Perfil isoenzimático em sementes de café produzidas sob manejo orgânico.

A produção orgânica visa à busca do equilíbrio de sistemas agropecuários com a natureza, não utilizando agrotóxicos, os quais desequilibram o ecosistema e eliminam os inimigos naturais. Assim no manejo orgânico são utilizadas diferentes fontes de matéria orgânica que resultam em efeitos de nutrição variados e por conseqüência podem afetar a qualidade de sementes, a qual, dentre vários fatores, está também relacionada à existência de enzimas do sistema oxidativo. Objetivou-se neste trabalho avaliar alterações no perfil de expressão de sistemas isoenzimáticos em sementes de café produzidas em lavouras conduzidas sob manejo orgânico. O delineamento experimental foi látice balanceado 4x4 com cinco repetições, em esquema fatorial 3x2x2, mais quatro tratamentos adicionais, além da testemunha produzida com adubação convencional. O fatorial corresponde a três fontes de matéria orgânica (esterco bovino, cama de aviário e farelo de mamona), com e sem resíduo vegetal (casca de café), com e sem adubação verde, com feijão guandu (Cajanus cajan L). A qualidade das sementes foi avaliada por meio de testes fisiológicos e também por eletroforese dos sistemas enzimáticos álcool desidrogenase, sorbitol desidrogenase, peroxidase, catalase, esterase, superóxido dismutase, glutamato desidrogenase. Pelos resultados obtidos não foram observadas diferenças na qualidade fisiológica das sementes de café ou nos padrões isoenzimáticos, devidas aos tratamentos de manejo orgânico e convencional de adubação

Amostragem sequencial e marcadores de microssatélites na avaliação da qualidade genética em lotes de sementes de milho.

Edição dos Resumos do XIII Congresso Brasileiro de Sementes, Gramado, RS, set. 2003