Voies de signalisation du récepteur de type 2 (AT[indice inférieur 2]) de l'angiotensine II impliquées dans l'activation des MAPKs p42/p44 chez la lignée cellulaire neuronale NG108-15 rôle de la voie Rap1/B-Raf

Dans notre laboratoire, une étude antérieure a démontré qu'un traitement (de 5 à 120 min) des cellules NG108-15 avec l'angiotensine II (Ang II) amène, via l'activation du récepteur AT[indice inférieur 2], une diminution de l'activité de la petite protéine G p21[indice supérieur ras] mais une augmentation soutenue de l'activité des MAPK, p42/p44, essentielle à l'induction de l'élongation neuritique (Gendron et al., Mol Endocrinol, 1999, (13) 1615-26). Nous avons vérifié si une voie alternative d'activation des MAPK, la voie Rap1/B-Raf, pouvait être responsable de l'augmentation de phosphorylation des MAPK. Suite à une incubation des cellules avec l'Ang II, nous observons que Rap1 est activée entre 30 s et 1 min et que B-Raf est activée entre 5 et 15 min. De plus, nos résultats indiquent que l'activité de Raf-1 n'est pas affectée suite au traitement à l'Ang II. Ainsi, nos résultats suggèrent que la voie Rap1/B-Raf est impliquée dans l'activation des MAPK par l'Ang II et donc dans la différenciation morphologique induite par le récepteur de type AT[indice inférieur 2], indépendamment de la voie Ras/Raf-1. De plus, des résultats préliminaires indiquent que la voie Rap1/B-Raf pourrait être activée par une trans-activation du récepteur à l'EGF, et que la phosphatase SHP-2 serait impliquée dans cette voie de stimulation

Endothelium properties of a tissue-engineered blood vessel for small-diameter vascular reconstruction

Purpose: A tissue-engineered blood vessel (TEBV) produced in vitro by the self-assembly method was developed in our laboratory for the replacement of small-diameter blood vessels. The interior of this vessel is covered by an endothelium. The aim of the present study was to evaluate whether the endothelial layer would make a favorable contribution at the time of implantation of the TEBV by investigating in vitro the hemocompatible properties of the endothelial cells covering its interior. Methods: The secretion of the von Willebrand factor (vWF) and expression of thrombomodulin by the endothelium were assessed, and the adhesive molecules E-selectin and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) were quantified as a function of maturation time. To evaluate the functional response of the endothelium on injury, the cellular response to physiological stimulatory factors (thrombin and lipopolysaccharide [LPS]) was analyzed. Results: The endothelial cells formed a confluent monolayer displaying favorable hemocompatible properties (78% 10% of cells expressing thrombomodulin with only 12 3 mU/106 cells of vWF secreted over a 2-hour period), which acquired their full expression after a culture period of 4 days. Moreover, pro-adhesive properties toward inflammatory cells were not observed. The cells were also able to respond to physiological-stimulating agents (thrombin and LPS) and demonstrated a statistically significant overexpression of the corresponding molecules under the conditions tested. Conclusions: These results indicate that the endothelium of the tissue-engineered blood vessel produced by the self-assembly approach displays advantageous qualities with regard to the vessel’s future implantation as a small-diameter vascular prosthesis