Integrierung des B-Zell-Rezeptor-Antigens LRPAP1 in ein IgG1-Antikörperformat zur Therapie des Mantelzell-Lymphoms

Das Mantelzell-Lymphom ist ein seltenes B-Zell-Non-Hodgkin-Lymphom. Es befällt vor allem den älteren Mann mit einer geschlechterspezifischen Prävalenz von 3:1 und einem medianen Erkrankungsalter von 60 Jahren, Dieses primär nodale Lymphom wird histologisch als indolent klassiziert, jedoch weist es häufig einen klinisch aggressiven Verlauf auf. Pathognomonisch ist die chromosomale Translokation t(11;14)(q13;q32) mit einer daraus resultierenden Überexpression von Cyclin D1. Die meisten Krankheitsfälle zeigen einen gewissen Grad an somatischer Hypermutation der Immunglobulin-Gene, welche auf einen Antigenkontakt der B- Zell-Rezeploren hinweist und eine chronische B-Zell-Rezeptor-Stimulation in der Pathogenese des Lymphoms vermulen lässt. Die Diagnose wird bei der Mehrzahl der Patienten erst im fortgeschrittenen Stadium mit bereits bestehender extralymphatischer Organbeleiligung gestellt. Mit einer medianen Überlebenszeit von fünf Jahren hat das Mantelzell-Lymphom die schlechteste Prognose aller Non-Hodgkin-Lymphome. Das Therapiakonzept ist palliativ mit dem Anspruch einer Langzeitremission zur Verlängerung der Überlebenszeit. Bei jüngeren Patienten besteht die Therapie aus einer aggressiven, Cytarabin-haltigen Chemotherapie mit konsekutiver autologer Stammzelltransplantation. Bei älteren Patienten steht die Immunchemotherapie mit einer Rituximab-Erhaltungstherapie im Vordergrund. Neuere Therapiekonzepte, die im Falle eines Rezidivs eingesetzt werden, sind die Substanzen Ibrutinib und Venetoclax. Diese sind zwar zunächst sehr effektiv, können aber weitere Rezidive bisher meist nicht verhindern. Auch nach dem Einsatz einer allogenen Stammzelltransplantation oder einer CAR-T-Zell-Therapie ist nur selten eine Heilung möglich. Aufgrund dieser schlechten Prognose werden dringend neue Therapieformate benötigt. Da der B-Zell-Rezeptor aller maligne entarteten Mantelzell-Lymphomzellen identisch ist und sich von den Rezeptoren gesunder B-Lymphozyten unterscheidet, eignet er sich ideal als Zielstruktur für therapeutische Ansätze. LRPAP1 wurde als gemeinsames Autoantigen von einem beträchtlichen Teil aller MCL beschrieben. Ziel dieser Dissertationsarbeit war es, dieses Antigen in ein IgG-Antikörperformat zu integrieren (LRPAP1 BAR-body), in welchem die Epitop-Region des Antigens die variablen Regionen ersetzt. Dadurch sollte eine gezielte Bindung an die maligne entarteten B- Lymphozyten von Mantelzell-Lymphomen über deren BZR erreicht werden. In funktionellen Experimenten konnte gezeigt werden, dass LRPAP1 BAR-bodies sowohl an Mantelzell- Lymphomzelllinien binden als auch spezifisch Lymphomzellen töten, die einen Rezeptor exprimieren, der LRPAP1-reaklv ist.Integration of the B-cell receptor antigen LRPAP1 into an IgG1 antibody format for the therapy of mantle cell lymphoma Mantle cell lymphoma is a rare B-cell non-Hodgkin lymphoma. It mainly affects older men with a gender-specific prevalence of 3:1 and a median age of 60 years. This primarily nodal lymphoma is histologically classified as indolent, but often shows a clinically aggressive course. Pathognomonic is the chromosomal translocation t(11;14)(q13 ,q32) with a resulting overexpression of cyclin D1. Most cases of the disease show some degree of somatic hypermutation of immunglobulin genes indicating antigen contact of B-cell receptors and suggesting that chronic B-cell receptor stimulation plays a role in the pathogenesis of mantle cell lymphoma. In the majority of patients, the diagnosis is made at an advanced stage with already existing extralymphatic organ involvement. With a median survival time of five years, mantle cell lymphoma has the worst prognosis of all non-Hodgkin lymphomas. The therapy concept is usually palliative with the aim of long-term remission to extend survival time. For younger patients, therapy with aggressive, cytarabine-containing chemotherapy and subsequent autologous stem cell transplantation is the standard of care. Concerning older patients, immunochemotherapy with rituximab maintenance therapy is used as therapeutic regimen in most cases. In the case of relapse ibrutinib and venetoclax are used as more recent therapeutic substances. Although these compounds are very effective, subsequent relapses are inevitable. Even after allogeneic stem cell transplantation or CAR-T-cell therapy, curing of MCL is rarely possible. Due to this poor prognosis, new therapeutic formats are urgently needed. Because the B-cell receptor of all malignant mantle cell lymphoma cells is identical and distinct from the B-cell receptors of healthy B-lymphocytes, it is ideally suited as a target for therapeutic approaches. LRPAP1 has been described as a common autoantigen of about one third of all mante cell lymphomas. The alm of this dissertation was to integrate this antigen into an IgG antibody format (LRPAP1 BAR-body). The antibody should carry the epitope region of the antigen instead of its variable regions to target mantle cell lymphoma cells via their B-cell receptor. Functional experiments demonstrated that LRPAP1 BAR-bodies both bind to mantle cell lymphoma cell lines and specifically kill lymphoma cells expressing a B-cell receptor that is LRPAP1-reactive

The B-cell Receptor Autoantigen LRPAP1 Can Replace Variable Antibody Regions to Target Mantle Cell Lymphoma Cells

Mantle cell lymphoma (MCL) accounts for 5%–10% of all lymphomas. The disease’s genetic hallmark is the t(11; 14)(q13; q32) translocation. In younger patients, the first-line treatment is chemoimmunotherapy followed by autologous stem cell transplantation. Upon disease progression, novel and targeted agents such as the BTK inhibitor ibrutinib, the BCL-2 inhibitor venetoclax, or the combination of both are increasingly used, but even after allogeneic stem cell transplantation or CAR T-cell therapy, MCL remains incurable for most patients. Chronic antigenic stimulation of the B-cell receptor (BCR) is thought to be essential for the pathogenesis of many B-cell lymphomas. LRPAP1 has been identified as the autoantigenic BCR target in about 1/3 of all MCLs. Thus, LRPAP1 could be used to target MCL cells, however, there is currently no optimal therapeutic format to integrate LRPAP1. We have therefore integrated LRPAP1 into a concept termed BAR, for B-cell receptor antigens for reverse targeting. A bispecific BAR body was synthesized consisting of the lymphoma-BCR binding epitope of LRPAP1 and a single chain fragment targeting CD3 or CD16 to recruit/engage T or NK cells. In addition, a BAR body consisting of an IgG1 antibody and the lymphoma-BCR binding epitope of LRPAP1 replacing the variable regions was synthesized. Both BAR bodies mediated highly specific cytotoxic effects against MCL cells in a dose-dependent manner at 1–20 µg/mL. In conclusion, LRPAP1 can substitute variable antibody regions in different formats to function in a new therapeutic approach to treat MCL