Facteurs d'hôtes influençant la sécrétion de protéines hétérologues chez Lactococcus lactis

Les bactéries lactiques présentent une parfaite innocuité hygiénique et sont de bons candidats pour le développement de nouvelles utilisations. Dans le développement de vaccins vivants, la sécrétion peut être préférable à une production cytoplasmique. Nous avons étudié la sécrétion de protéines hétérologues chez Lactococcus lactis en employant la nucléase de S. aureus comme protéine sécrétée modèle. Nous avons agi sur les facteurs intrinsèques de Nuc par l'utilisation d'un peptide signal de L. lactis pour diriger la sécrétion et sur l'équilibre des charges de la partie N-terminale pour augmenter l'efficacité de sécrétion. Pour mieux comprendre la sécrétion chez L. lactis, nous avons identifié des facteurs d'hôtes qui sont impliqués directement ou non dans la sécrétion. Par mutagenèse insertionnelle aléatoire nous avons identifié, puis analysé, deux nouveaux facteurs d'hôtes, dltA et ybdD. L'inactivation de dltA modifie les charges à la surface de la cellule et entraîne la rétention de Nuc sécrétée. L'inactivation de ybdD dérégule l'expression de gènes pouvant contrôler la sécrétion. Tous les composants de la machinerie Sec sont présents, à l'exception de SecDF. Chez B. subtilis, SecDF maintient une forte capacité de sécrétion. La complémentation du sécrétome de L. lactis par SecDF de B. subtilis augmente la sécrétion. Afin d'évaluer la possible utilisation de L. lactis comme vecteur de protéines immunogènes pour déclencher une réponse immune chez la souris, nous avons construit des souches de L. lactis produisant une fusion entre Nuc et un épitope immunogène de la beta-lactoglobuline (Blg). La Blg est l'allergène majeur chez les nourrissons allergiques au lait de vache et constitue un bon modèle d'allergie alimentaire. L'administration orle des souches de L. lactis produisant l'epitope declenche chez la souris une réponse immunitaire mucosale, non allergique, spécifique de la Blg.Lactic acid bacteria (LAB) are Gram-positive bacteria generally considered as safe (GRAS) and they are therefore excellent potential candidates for the development of new uses such as live vectors for the delivery of immunogenic proteins. To this purpose, secretion of heterologous proteins could be more advantageous than cytoplasmic production. We studied the heterologous protein secretion in Lactococcus lactis with the staphylococcal nuclease (Nuc) as secretory model protein. By the use of a lactococcal signal peptide to drive Nuc secretion and a synthetic propeptide to maintain an optimal charge balance at the N-terminal end of Nuc, the Nuc secretion efficiency was strongly improved. To better understand secretion, we identified by random insertional mutagenesis two new host factors indirectly involved in secretion. Inactivation of dltA unbalances charges present at the cell surface and leads to Nuc entrapment into the cell wall. Inactivation of ybdD up-regulates expression of several genes of which products might control secretion in L. lactis. The analysis of the so-called secretome in L. lactis reveals that all components of the Sec machinery are present except SecDF. In B. subtilis, SecDF is necessary in late secretion stages. Introduction of SecDF from B. subtilis into the L. lactis secretome improves secretion of several heterologous proteins. To evaluate the potential use of L. lactis as vector of an allergen to trigger an immune response in mice, we developed L. lactis strains secreting a fusion between Nuc and an immunogenic epitope of b-lactoglobulin (Blg). Blg is the major cow milk allergen in childhood and a good model for study of food allergy. Oral administration of L. lactis secreting this fusion protein triggers a specific mucosal immune and non allergic type response in mice, against both the epitope and the entire Blg.ORSAY-PARIS 11-BU Sciences (914712101) / SudocSudocFranceF

RNA dynamics to control gene expression

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5’UTR sequences influence protein levels in Escherichia coli by regulating translation initiation and mRNA stability

International audienceA set of 41 synthetic 5'UTRs with different theoretical translation initiation rates were generated to explore the role of 5'UTRs in the regulation of protein levels in Escherichia coli. The roles of the synthetic 5'UTRs in regulating the expression of different reporter genes were analyzed in vivo. Protein levels varied substantially between the different constructs but for most of the 5'UTRs, protein levels were not correlated with theoretical translation initiation rates. Large variations in mRNA concentrations were measured with the different 5'UTRs even though the same concentration of transcription inducer was used in each case. 5'UTRs were also found to strongly affect mRNA stability, and these changes in mRNA stability often contributed to observed differences in mRNA concentration. Unexpectedly, the effect of the 5'UTRs on mRNA half-lives was found to vary depending on the downstream reporter gene. These results clearly demonstrate that 5'UTRs contribute to gene expression regulation at the level of translation initiation and of mRNA stability, to an extent that depends on the nature of the downstream gene

Role of 5’UTRs in gene expression regulation in Escherichia coli

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To manage obsolescence risks: anticipate

Cette communication fournit les principes directeurs de la maîtrise des risques liés aux obsolescences des composants électroniques et des substances chimiques (matériaux). En effet, les produits et leurs environnements évoluent en permanence et ces évolutions, parfois difficilement prévisibles, ont un impact direct sur les systèmes développés et opérationnels. Cette communication s’adresse donc aux donneurs d’ordre, mais aussi et surtout aux maîtrises d’oeuvres industrielles et à leurs sous-traitants qui se heurteront à cette problématique tout au long du développement et du MCO de leurs systèmes. Un parallèle entre les composants électroniques et les substances chimiques démontre qu’en matière de gestion des obsolescences, la proactivité est indispensable. Le métier « Composant, énergie et environnement » (C2E) de la Direction technique de la Direction Générale de l’Armement (DGA) a mis en place des outils techniques et contractuels permettant de s’assurer d’une bonne gestion de la pérennité des constituants des systèmes militaires tout au long de leur cycle de vie. S’il fallait résumer en un seul mot les dispositifs mis en oeuvre : ANTICIPATION !This communication provides risk management guidelines related to electronic components and chemicals (materials) obsolescence. Indeed, products and their environments are constantly changing and these changes are sometimes difficult to predict and have a direct impact on operational systems. This communication is therefore available to contracting authority but especially industrial prime contractor and their subcontractors who will face this problem during systems development and operational using and maintenance. A parallel between electronic components and chemicals demonstrates that in terms of obsolescence management, proactivity is required. The department "Component, Energy and Environment" (C2E) of the Technical Directorate of French DoD (DGA) has established contractual and technical tools to ensure good management of components and materials sustainability for military systems throughout their life cycle. If we had to summarize in one word the tools implemented: ANTICIPATION

Adaptation des bactéries à leur environnement : antagonisme entre Stabilité et Concentration des ARNm

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Genome-wide mRNA degradation is involved in bacterial adaptation

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