北米産野性マウスより見出されたMHCクラスIII遺伝子重複の分子生物学的解析

金沢大学がん研究所北米ミシガン州の野性マウスから単離されたHー2W7ハプロタイプはC4/Slp関連遺伝子を5つ有し、通常は性ホルモン依存的なSlp抗原を構成的に発現している。その機構を分子生物学的なレベルで明らかにする目的で、W7の5つのC4/Slp遺伝子の塩基配列の解析を行ない.1は異型的なC4,1つは典型的なSlp,残りの3つは5\u27側がC4,3\u27側がSlpから由来するハイブリッド遺伝子であることを明らかにした。従って,これらハイブリッド遺伝子はC4ーSlp遺伝子間の不等交叉による組み換えによって生じ、C4のプロモ-タ-がSlpの構造遺伝子と結びついた為に,みかけ上のSlp抗原の構成的発現に列ったCとが示唆された。しかしながら組み換え点付近では、3つのハイブリッド遺伝子共にC4の配列とSlpの配列が交互にモザイク状に認められる複雑なパタ-ンを示し、又そのパタ-ンが3つのハイブリッド遺伝子間で異なっており、これら,遺伝子はくり返し生じた組み換えによって形成されたと思われた。又、実際にどの遺伝子が転写されているかを調べる目的で、5つの遺伝子間で塩基置換の認められる部位について近年開発されたPCRーSSCP法を用いたW7マウス肝mRNAの解析を行なった。その結果、雌雄共に最も多く存在するのはC4のmRNAで、2つのハイブリッド遺伝子はその数分の一のレベルで、もう一つのハイブリッド遺伝はC4の1/20位のレベルで発現しており、真のSlpのmRNAはまったく検出されなかった。以上の結果により、W7に於けるSlpの構成的発現は、不等々叉によりC4のプロモ-タ-がSlpの構造遺伝子に結合した為であることが確認された。研究課題/領域番号:02206201, 研究期間(年度):1990出典：研究課題「北米産野性マウスより見出されたMHCクラスIII遺伝子重複の分子生物学的解析」課題番号02206201（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-02206201/）を加工して作

野生マウスにおける補体C4,S1p遺伝子の重複,欠損の頻度とその分子機構の解析

金沢大学がん研究所野性マウスにおけるC4,S1p遺伝子の重複、欠損を検出するために両遺伝子の転写開始点から約250bp上流に存在するCAGAの繰り返しからなるマイクロサテライト配列を狭むプライマ-を用意した。このマイクロサテライト配列はS1pの方が約60bp短く成っているため、全DNAをPCRで増幅したあとアガロ-ス・ゲルを流す事により両遺伝子の相対濃度からコピ-数の異常が検出される事が期待されたが、実際にコピ-数の異常が知られている数種のインブレッド・マウスを用いた予備実験によりその有効性が確認された。そこで国立遺伝学研究所より供与された日本産、中国産及びヨ-ロッパ産の野性マウスのDNA約200サンプルをスクリ-ニングした。その結果、約80%のサンプルにおいてPCRによる増幅に成功した。日本産、中国産のマウスからはマイクロサテライトの長さのポリモルフィズムは検出されたが、コピ-数の異常は見つからなかった。一方、ヨ-ロッパ産のマウスからはデンマ-ク産の一頭からC4遺伝子の欠損をヘテロに有する事を示唆するパタ-ンが検出された。サザン・ブロッティングによる解析でもこの結果は確認された。このデンマ-ク産のマウスの系統は国立遺伝学研究所に維持されているため、今後ホモ欠損個体を捜しC4遺伝子領域をクロ-ニングし、欠損の範囲、機構を明らかにしたい。以上の結果により、野生マウスにおけるC4,S1p遺伝子の欠損、重複の頻度はヒトの場合よりかなり低い事が判明した。一方、北米産野生マウスより単離され、C4,S1p遺伝子を5コピ-有する事が示されたw7、及び4コピ-有するw16,w19の三つのH-2ハプロタイプのC4,S1p遺伝子領域を解析した結果,この三種のハプロタイプは互いに極めて類似しておりw16,w19からさらなる重複によりw7が生じたか、又はw7から欠損によりw16,w19が生じたことが示された。研究課題/領域番号:03206203, 研究期間(年度):1991出典：研究課題「野生マウスにおける補体C4,S1p遺伝子の重複,欠損の頻度とその分子機構の解析」課題番号03206203（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-03206203/）を加工して作

C4,Slp遺伝子コピー数異常の野性マウスにおける探索とその分子機構解析

金沢大学がん研究所野性マウス集団におけるC4,Slp遺伝子コピー数の異常を検出する目的で両遺伝子のプロモーター領域に存在し、両者間で長さの異なるマイクロサテライトをPCRで増幅して検討した。日本、アジア、ヨーロッパ産のマウス5亜種127個体を調べ、87個体についてPCRによる増幅に成功したが、C4,Slp遺伝子のコピー数に異常の認められるものは一列を無かった。ヒトの重複したC4遺伝子の場合は約10%の染色体において欠損が、数%の染色体においてさらなる重複が認められることが報告されているので、マウスの場合はヒトに比べて欠損、重複の頻度は極めて低いと結論された。この頻度の違いが何によって生じているかは興味深い問題であり、二つのC4遺伝子間の相同性の違い(ヒトでは99%以上、マウスでは95%程度)、C4遺伝子に近接して存在し一緒に重複している21-hydroxylaseのうち活性を有するものがヒトでは後方に存在するものであり、マウスでは前方に存在するものであることなどが原因となっている可能性が考えられるがこの点について結論を出すにはさらなる検討が必要である。一方、構成的に発現するC4と、テストステロン依存性に発現するSlpの転写活性の違いを規定する要因の解析から、C4には存在しSlpには存在しない転写因子NF1への結合部位が重要な役割を果たしていることが明らかになった。日本産マウス由来のFMストレインでは従来よりSlpを構成的に発現していること、及びそれはSlp遺伝子以外の複数のトランスに働く因子によって規定されていることが知られている。そこで今後、FMとM.spretusの掛け合わせにより原因遺伝子のマッピングを行い、NF1である可能性を含めてその本体を明らかにしたい。研究課題/領域番号:04206202, 研究期間(年度):1992出典：研究課題「C4,Slp遺伝子コピー数異常の野性マウスにおける探索とその分子機構解析」課題番号04206202（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-04206202/）を加工して作

マウス補体第4成分遺伝子の構造と発現調節機構の解析

金沢大学がん研究所研究課題/領域番号60770358, 研究期間(年度):1985出典：研究課題「マウス補体第4成分遺伝子の構造と発現調節機構の解析」課題番号60770358（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-60770358/）を加工して作

下等脊椎動物における補体系の進化的起源の探索

金沢大学がん研究所研究課題/領域番号:57770360, 研究期間(年度):1982出典：研究課題「下等脊椎動物における補体系の進化的起源の探索」課題番号57770360（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-57770360/）を加工して作

マウス補体第4成分 cDNA のクローニングと遺伝子の構造解析

金沢大学がん研究所研究課題/領域番号59770335, 研究期間(年度):1984出典：研究課題「マウス補体第4成分 cDNA のクローニングと遺伝子の構造解析」課題番号59770335（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-59770335/）を加工して作

MHCクラスIII補体遺伝子のホルモンによる発現調節機構の分子生物学的解析

金沢大学がん研究所成長ホルモン欠損のリトル・マウスでは、雌雄共にSlpの発現が認められなかったが、ヒト成長ホルモンを12時間おきに3日間パルス投与したところ、小量ながらSlpの発現が検出され、Slpのテストステロンによる誘導は間に成長ホルモンを介していることが示唆された。又、構成的に発現するとC4と、ホルモン依存的に発現するSlpとの発現様式の違いを規定する領域のマッピングを行うために両者のプロモ-タ-領域を転写開始点から上流1kbの範囲でCATアッセイにより比較した。HepG2細胞を用いアツセイしたところ、1kbの断片を含むものではC4では高い活性が認められたが、Slpでは極しく低い活性しか検出されなかった。5\u27側を順次削除してゆくと、C4ではー200bp付近まで殆ど変化が認められなかったが、Slpではー700bp付近まで削るとC4同様の高い活性を示す様になった。したがってSlpの1kb断片に活性がないのはー700bp付近に存在する負の制御領域によることが示唆された。Slpのこの部分のDNA断片をプロ-ブとしてHepG2核抽出物によるゲルシフト・アッセイを行なったが、現在までのことろ特異的な結合は検出されていない。今後、通常ストレインのマウス、Slpを構成的に発現するFM系のマウスの雌雄の肝核抽出物を用いてこの領域への特異的結合タンパクの存在を更に検討し、結合因子が検出された場合はその因子のクロ-ニングを目指したい。研究課題/領域番号:02670200, 研究期間(年度):1990出典：研究課題「MHCクラスIII補体遺伝子のホルモンによる発現調節機構の分子生物学的解析」課題番号02670200（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-02670200/）を加工して作