Klonierung methylierungsabhängiger Gene in Neuroendokrinen Pankreastumorzellen durch cDNA Representational Difference Analysis (cDNA-RDA)

Hypermethylierung ist ein alternativer Mechanismus der frühen Gen-Inaktivierung in Tumorzellen. Voruntersuchungen hatten gezeigt, dass 5-Aza-2´-Deoxycytidin (5-Aza-CdR) neben morphologischen Veränderungen das Wachstum neuroendokriner Pankreastumorzellen QGP-1 inhibiert. Es daher wurde angenommen, dass der demethylierungs-assoziierte Phänotyp neben der nachgewiesenen Restoration der p16/CDKN2A Expression eine Konsequenz der Reexpression mehrerer durch abberante Methylierung supprimierte Gene ist. Um die Bedeutung der DNA Methylierung zu validieren hatte die vorliegende Arbeit zum Ziel, methylierungs-spezifische Transkripte in QGP-1 Zellen zu isolieren. Differentiell exprimierte Gene wurden durch die cDNA-Representational Difference Analysis (cDNA-RDA) isoliert, sequenziert und die methylierungasabhängige Expression durch semi-quantitative RT-PCR bestätigt. Es konnten 48 methylierungsabhängig differentiell exprimierte Genfragmente in QGP-1 Zellen bestätigt werden. Davon waren nach 5-Aza-2´-Deoxycytidin-Behandlung 26 Genfragmente verstärkt bzw. neu exprimiert, und 22 weitere Genfragmente signifikant schwächer exprimiert oder supprimiert. Die Sequenzanalyse der isolierten cDNA Fragmente zeigte Homologie zu 41 bekannten Genen. Sieben der cDNA Fragmente zeigten Homologie zu Genen mit bisher unbekannter Funktion. Bei einigen der klonierten Genen besteht ein Zusammenhang mit der Onkogenese anderer Tumorentitäten, sodass diese auch in neuroendokrinen Pankreastumorzellen eine pathogenetische Rolle spielen könnten. Interessant ist die 5-Aza-2´-Deoxycytidin induzierte Neuexpression von Cofilin-1, das über Depolymerisation von Aktin-Filamenten die Bewegungsfähigkeit der Zellen und somit das Metastasierungspotential reduziert, sowie die Repression von Matriptase, einer Serinprotease, die durch Matrixdegradation Metastasierung und invasives Wachstum fördert. Die vorliegende Arbeit weist darauf hin, dass DNA Methylierung ein Mechanismus in der Genese neuroendokriner Pankreastumorzellen ist, sodass es möglich wäre, zukünftig den Methylierungsstatus diagnostisch im Sinne eines Methylierungsfingerprint einzusetzen

Klonierung methylierungsabhängiger Gene in Neuroendokrinen Pankreastumorzellen durch cDNA Representational Difference Analysis (cDNA-RDA)

Hypermethylierung ist ein alternativer Mechanismus der frühen Gen-Inaktivierung in Tumorzellen. Voruntersuchungen hatten gezeigt, dass 5-Aza-2´-Deoxycytidin (5-Aza-CdR) neben morphologischen Veränderungen das Wachstum neuroendokriner Pankreastumorzellen QGP-1 inhibiert. Es daher wurde angenommen, dass der demethylierungs-assoziierte Phänotyp neben der nachgewiesenen Restoration der p16/CDKN2A Expression eine Konsequenz der Reexpression mehrerer durch abberante Methylierung supprimierte Gene ist. Um die Bedeutung der DNA Methylierung zu validieren hatte die vorliegende Arbeit zum Ziel, methylierungs-spezifische Transkripte in QGP-1 Zellen zu isolieren. Differentiell exprimierte Gene wurden durch die cDNA-Representational Difference Analysis (cDNA-RDA) isoliert, sequenziert und die methylierungasabhängige Expression durch semi-quantitative RT-PCR bestätigt. Es konnten 48 methylierungsabhängig differentiell exprimierte Genfragmente in QGP-1 Zellen bestätigt werden. Davon waren nach 5-Aza-2´-Deoxycytidin-Behandlung 26 Genfragmente verstärkt bzw. neu exprimiert, und 22 weitere Genfragmente signifikant schwächer exprimiert oder supprimiert. Die Sequenzanalyse der isolierten cDNA Fragmente zeigte Homologie zu 41 bekannten Genen. Sieben der cDNA Fragmente zeigten Homologie zu Genen mit bisher unbekannter Funktion. Bei einigen der klonierten Genen besteht ein Zusammenhang mit der Onkogenese anderer Tumorentitäten, sodass diese auch in neuroendokrinen Pankreastumorzellen eine pathogenetische Rolle spielen könnten. Interessant ist die 5-Aza-2´-Deoxycytidin induzierte Neuexpression von Cofilin-1, das über Depolymerisation von Aktin-Filamenten die Bewegungsfähigkeit der Zellen und somit das Metastasierungspotential reduziert, sowie die Repression von Matriptase, einer Serinprotease, die durch Matrixdegradation Metastasierung und invasives Wachstum fördert. Die vorliegende Arbeit weist darauf hin, dass DNA Methylierung ein Mechanismus in der Genese neuroendokriner Pankreastumorzellen ist, sodass es möglich wäre, zukünftig den Methylierungsstatus diagnostisch im Sinne eines Methylierungsfingerprint einzusetzen

Fast-growing pancreatic neuroendocrine carcinoma in a patient with multiple endocrine neoplasia type 1: a case report

<p>Abstract</p> <p>Introduction</p> <p>Predictive genetic screening and regular screening programs in patients with multiple endocrine neoplasia type 1 are intended to detect and treat malignant tumors at the earliest stage possible. Malignant neuroendocrine pancreatic tumors are the most frequent cause of death in these patients. However, the extent and intervals of screening in patients with multiple endocrine neoplasia type 1 are controversial as neuroendocrine tumors are usually slow growing. Here we report the case of a patient who developed a fast-growing neuroendocrine carcinoma within 15 months of a laparoscopic distal pancreatic resection.</p> <p>Case presentation</p> <p>We followed a group of 45 patients with multiple endocrine neoplasia type 1 by an annual screening program in the Department of Visceral, Thoracic, and Vascular Surgery at the University Hospital Marburg in cooperation with the Department of Radiology and the Division of Endocrinology. A man with multiple endocrine neoplasia type 1 who was diagnosed with a recurrent primary hyperparathyroidism underwent a distal pancreatic resection for a non-functional neuroendocrine tumor. In the context of our regular screening program, a large non-functional neuroendocrine tumor was diagnosed in the pancreatic head 15 months after the first pancreatic surgery. Therefore, we performed an enucleation and regional lymph node resection. At histology, the diagnosis of a neuroendocrine carcinoma with one lymph node metastasis was established. There was no evidence of recurrence 9 months after re-operation.</p> <p>Conclusion</p> <p>Fast-growing neuroendocrine tumors are rare in patients with multiple endocrine neoplasia type 1. The intervals, both postoperative and in newly diagnosed pancreatic lesions, in patients with multiple endocrine neoplasia type 1 should be reduced to 6 months to establish the early diagnosis of rapidly progressive disease in a small subset of patients.</p

Liver-specific therapies for metastases of neuroendocrine pancreatic tumors

The presence or development of liver metastases in patients with neuroendocrine pancreatic tumors is the most important prognostic factor. Liver resection, transplantation and many different therapeutic approaches are discussed in this special review

Case report-delayed splenic rupture in combination with medial femoral neck fracture after low energy trauma. Development of hemorrhagic shock 5 days after hip prosthesis due to a rare cause

A 79 year old female patient was admitted to our emergency department with a fracture of the right medial femoral neck six days after a fall on her right side and a cemented hemiprosthesis was implanted. Five days later, she developed a hemorrhagic shock and was diagnosed with a delayed splenic rupture and the spleen was resected. Histopathological examination showed a delayed rupture of an otherwise normal spleen without signs of an underlying pathology. The outcome was fatal: In the postoperative course she developed pneumonia, three weeks later she succumbed due to multiple organ failure. Even careful reevaluation of the case did not provide any clues to expect an injury of the spleen according to trauma mechanism. This case shows that delayed splenic rupture of a normal spleen may occur even after a low energy trauma. Injury of the spleen should therefore always be considered, even with an uncharacteristic anamnesis. Physical examination after trauma should therefore always include a careful clinical evaluation. The clinical threshold for a FAST examination should be low. The coincidence of a femoral neck fracture and a splenic rupture after a low energy trauma has not been reported before

PLK1 has tumor-suppressive potential in APC-truncated colon cancer cells

The spindle assembly checkpoint (SAC) acts as a molecular safeguard in ensuring faithful chromosome transmission during mitosis, which is regulated by a complex interplay between phosphatases and kinases including PLK1. Adenomatous polyposis coli (APC) germline mutations cause aneuploidy and are responsible for familial adenomatous polyposis (FAP). Here we study the role of PLK1 in colon cancer cells with chromosomal instability promoted by APC truncation (APC-ΔC). The expression of APC-ΔC in colon cells reduces the accumulation of mitotic cells upon PLK1 inhibition, accelerates mitotic exit and increases the survival of cells with enhanced chromosomal abnormalities. The inhibition of PLK1 in mitotic, APC-∆C-expressing cells reduces the kinetochore levels of Aurora B and hampers the recruitment of SAC component suggesting a compromised mitotic checkpoint. Furthermore, Plk1 inhibition (RNAi, pharmacological compounds) promotes the development of adenomatous polyps in two independent ApcMin/+ mouse models. High PLK1 expression increases the survival of colon cancer patients expressing a truncated APC significantly