Comparison of washing methods and smear conservation periods for llama sperm acrosome assessment using the Coomassie blue stain

El objetivo de este trabajo fue comparar métodos de lavado y conservación de frotis para evaluar el acrosoma en espermatozoides de llama mediante la tinción con Coomassie Blue (CB), con el propósito de facilitar la técnica e independizar los momentos de la extracción de semen de la evaluación de los acrosomas espermáticos. Se procesaron 12 eyaculados, se probaron dos tipos de lavado de los frotis fijados (con PBS o solución fisiológica, SF) y se evaluaron diferentes temperaturas (5º C y temperatura ambiente) y tiempos (0, 1 y 7 días) de conservación. Se evaluaron los siguientes frotis (cada uno lavado con PBS o con SF): 1) fijados, teñidos y evaluados el mismo día de la extracción; 2) fijados, teñidos y conservados 24 hs a temperatura ambiente y luego evaluados; 3) fijados, conservados a 4º C durante 1 día y luego teñidos y evaluados; 4) fijados, conservados a 4º C durante 7 días y luego teñidos y evaluados. Se evaluaron un total de 8 frotis por eyaculado. No se observaron diferencias significativas en el porcentaje de acrosomas presentes evaluado por CB entre las dos metodologías de lavado de los frotis fijados, ni entre las diferentes temperaturas y los diferentes tiempos de conservación de los frotis. Conclusión: es posible utilizar solución fisiológica para lavar los frotis fijados facilitando la técnica de CB para evaluar la presencia de los acrosomas en espermatozoides de llama. Además, se logró independizar los momentos de la extracción de semen de la evaluación de los acrosomas espermáticos.The objective of this study was to compare washing methods and smear conservation periods for llama sperm acrosome assessment using the Coomassie Blue stain, with the aim of facilitating the technique and to allow the moment of sperm acrosome evaluation become independent of the moment of semen collection. Twelve ejaculates were processed; two types of washing of the smears (with PBS or with physiologic solution, PS) and different temperatures (5 ºC and room temperature) and periods of conservation (0, 1 and 7 days) were assessed. The following smears were evaluated: 1) fixed, stained and evaluated the same day of collection; 2) fixed, stained and conserved for 24 hours at room temperature and then evaluated; 3) fixed, conserved at 4º C for 1 day and then stained and evaluated and 4) fixed, conserved at 4º C for 7 days and then stained and evaluated. A total of 8 smears per ejaculate were evaluated. No significant differences were observed in the percentages of acrosomes present, evaluated by CB, between both types of washing of the fixed smears, nor between the different temperatures and conservation periods of the fixed smears. Conclusions: it is possible to use physiologic solution to wash the fixed smears, thus facilitating the Coomassie Blue technique used to evaluate the presence of llama sperm acrosomes. In addition, it was possible to separate the moment of sperm acrosome evaluation from the semen collection.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gimenez, M. L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Chaves, M. G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

El semen porcino vitrificado: ¿es capaz de producir embriones?

La vitrificación es un proceso mediante el cual los líquidos adquieren un estado vítreo sin la formación de cristales de hielo (Luyet & Hodapp, 1938; Gao & Critser, 2000; Katkov y col., 2006; Kumar Gupta y col., 2007). Es un procedimiento simple que requiere menor tiempo y tiene mayor costo-beneficio que la congelación convencional, ya que no necesita equipo ni un operador altamente capacitado para ejecutarla y tanto el proceso de vitrificación como el de atemperado se realizan en segundos (Sanchez y col., 2011). Sin embargo, este método utilizado con éxito en ovocitos y embriones mamíferos, no pudo extrapolarse de forma directa a los gametos masculinos (Isachenko y col., 2004), debido a la elevada concentración de crioprotectores utilizada, las cuales provocan un efecto osmótico deletéreo (Sánchez y col., 2011) produciendo toxicidad y posibles alteraciones químicas en los espermatozoides (Isachenko y col., 2003). Surgió entonces la alternativa de vitrificar espermatozoides utilizando velocidades de enfriamiento y atemperado muy rápidas, en un tamaño de muestra muy pequeño para evitar así las elevadas concentraciones de los crioprotectores (Isachenko y col., 2003). Nuestro laboratorio ha vitrificado espermatozoides porcinos en ausencia de crioprotectores con el método de esferas, logrando conservar la condensación e integridad de la cromatina espermática (Arraztoa y col., 2012; Arraztoa y Neild, 2015). Estos resultados indicarían que la vitrificación espermática porcina, permitiría preservar los recursos genéticos de la especie, surgiendo como un modelo alternativo de criopreservación de la misma. En la especie porcina, la producción de embriones mediante fertilización in vitro (FIV), utilizando ovocitos madurados in vitro (MIV) a partir de ovarios provenientes de faena, es limitada, debido a la alta incidencia de polispermia (Coy y col., 2005). Por esta razón, la técnica de inyección intracitoplasmática de un espermatozoide (ICSI) se presenta como una herramienta alternativa para la producción in vitro de cigotos monospérmicos en la especie (García Roselló y col., 2008). Más aún, siempre y cuando el núcleo espermático conserve su integridad, la ICSI permitiría obtener crías viables, independientemente de la concentración, morfología o movilidad espermáticas (Yanagimachi, 2005).Fil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Evaluation of Sperm DNA quality in South American camelids and other domestic species

Las anormalidades en el material genético pueden expresarse por defectos en la maduración o condensación nuclear, rupturas del ADN y anormalidades cromosómicas. Los parámetros de rutina utilizados para evaluar el semen (movilidad espermática, concentración, viabilidad, funcionalidad de membranas y morfología) no reflejan la calidad del ADN espermático. Esto cobra importancia para las técnicas de reproducción asistida, particularmente en la inyecciónintracitoplasmática de un espermatozoide en la que espermatozoides con genomas anormales pueden alcanzar el material genético del ovocito. Se postula que tres factores pueden estar involucrados en la etiología del daño del ADN: estrés oxidativo, aberraciones en el empaquetamiento de la cromatina y apoptosis. Varias técnicas han sido utilizadas para estudiar los defectos del ADN. A modo general, las técnicas de evaluación de ADN pueden ser divididas en 2 grupos: aquellas que evalúan el grado de condensación o compactación de lacromatina y aquellas que miden el grado de fragmentación del ADN. Muchas de estas técnicas son laboriosas, costosas y algunas dependen de enzimas cuya actividad y accesibilidad a las roturas de ADN pueden ser irregulares. En este artículo se comenta sobre el desarrollo y puesta a punto de varias de las técnicas de evaluación de la cromatina espermática en camélidos sudamericanos (CSA) y otras especies domésticas.Abnormalities in sperm genetic material can be expressed as maturation or nuclear condensation defects, DNA damage or breakdown and chromosomal abnormalities. Routine semen evaluation (sperm motility, concentration, viability, membrane function and morphology) does not reflect sperm DNA quality. This becomes important when applying assisted reproductive techniques, especially intracytoplasmic sperm injection, in which sperm with abnormal genomes can reach the oocyte’s genetic material. Three factors have been suggested to be involved in the etiology of DNA damage: oxidative stress, chromatin packaging anomalies and apoptosis. Various techniques have been used to study DNA defects. In general, DNA evaluation techniques can be divided into two groups: those that evaluate the degree of chromatin condensation or compactation and those that measure the degree of DNA fragmentation. Many of these techniques are laborious, costly and some depend on enzymes whose activity and accessibility to DNA fragments can be irregular. In this article, the development and setting up of various techniques to evaluate sperm chromatin in South American Camelids (SACs) and other domestic species is commented on.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Giuliano, María Susana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Evaluation of DNA integrity and chromatin condensation in cat sperm collected by urethral catheterization and epididymis slicing

The aim of this study was to evaluate the effectiveness of the original sperm chromatin dispersion (SCD) assay and the toluidine blue (TB) stain to assess DNA fragmentation and chromatin condensation, respectively, in cat sperm obtained by urethral catheterization (CT) and epididymis slicing (EP). CT and EP samples were collected from the same cat, and sperm motility, concentration, morphology, DNA integrity and chromatin condensation were evaluated. As controls, aliquots of the samples were incubated with 0.3 M NaOH and with 1% of dithiothreitol (DTT) to promote DNA fragmentation and chromatin decondensation, respectively. With SCD, four DNA dispersion halo patterns were observed: large, medium, small and no halo. TB staining patterns were as follows: light blue (condensed chromatin), light violet (moderate chromatin decondensation) and dark blue-violet (high chromatin decondensation). Sperm incubations with NaOH and with DTT were effective in inducing DNA fragmentation and chromatin decondensation, respectively. No significant differences were observed in the percentages of the SCD and TB patterns between samples (CT and EP) and no correlation was observed between sperm head abnormalities and the different SCD and TB patterns. The original SCD technique and the TB stain were adapted to evaluate DNA integrity and chromatin condensation in cat sperm obtained by CT and EP.Fil: Allera, Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Use of commercial extenders, with and without the addition of egg yolk, for cooling llama semen

The objective of this study was to evaluate the effect of two commercial extenders, AndroMed® (AM) and Androstar® Plus (AS) both with and without the addition of egg-yolk (EY), for cooling llama semen. A total of sixteen ejaculates were collected from four males. Each ejaculate was divided into four aliquots and diluted with: AM, AM with 20 % EY (AM-EY), AS and AS with 20 % EY (AS-EY) and then cooled to 5 °C in an Equitainer®. Evaluations were carried out in raw semen, after dilution (0 h) and after 24 and 48 h of cooling. Data were analysed using either Friedman or ANOVA. Although total motility decreased in all cooled samples compared to the corresponding 0 h (P < 0.05), the highest percentages were observed in AM-EY being significantly higher than all other cooled samples after 24 h and higher than AS and AS-EY after 48 h. No significant differences were observed in the percentages of live acrosome-intact sperm between extenders at all times tested. A significant decrease in the percentage of sperm membrane osmotic function was observed in samples cooled with AS and AS-EY after 24 and 48 h vs. raw semen and in AM 48 h vs. raw semen. Finally, a significant increase in the percentage of sperm with abnormal tails was observed in the samples cooled with AS and AS-EY. Of all the extenders used, AndroMed® could be considered an option for cooling llama semen and the addition of EY to this extender improves its effectiveness. Data Availability: The data that support the findings of this study are available from the corresponding author upon reasonable request.Fil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Udaquiola, Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

In vitro production of porcine zygotes using intracytoplasmic injection of vitrified sperm

The objectives of this study were to evaluate if vitrified porcine spermatozoa are able to maintain their capacity to produce zygotes in vitro using intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and to evaluate the zygote development in two in vitro atmospheric conditions: 5% CO2 and tri-gas. A group of porcine oocytes maturated in vitro were injected with vitrified-warmed sperm (treatment group) and another group, with sperm diluted and conserved at 17°C (control group). To evidence parthenogenetic activation, some oocytes were submitted to a Sham test. The injected oocytes were cultured in G1 medium at 38°C, 100% humidity and 5% CO2 or tri-gas. No significant differences (p >.05) were observed in embryo development between the oocytes injected with vitrified-warmed sperm (31.8%; 36/113), and those injected with semen diluted and conserved at 17°C (35.5%; 32/90), when cultured in 5% CO2 or under tri-gas atmosphere (42.9%; 39/91 vs. 34.2%; 26/76, respectively). No significant differences (p >.05) were observed in the percentage of pronuclei (PN) obtained between 5% CO2 and tri-gas, within each treatment either. Of the 52 oocytes submitted to the Sham test, only two presented a female PN (activation) indicating that the PN observed in the treatment group were a product of fertilization and not parthenogenetic activation. To conclude, porcine sperm vitrified using spheres, at a concentration of 5 × 106 spermatozoa/ml in TALP medium with 1% bovine serum albumin (BSA), conserve condensed and intact chromatin capable of producing early embryo development up to the pronuclear stage.Fil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Baca Castex, Clara. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Alvarez, Gabriel Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Porcine sperm vitrification II: Spheres method

Owing to current problems in boar sperm cryopreservation, this study proposes to evaluate vitrification in spheres as an alternative cryopreservation procedure, comparing the use or not of permeable cryoprotectants and two warming methods. Extended (n = 3; r = 4) and raw (n = 5; r = 2) porcine spermatozoa were diluted in media, in the absence or presence of either 4% dimethylformamide or 4% glycerol, to a final concentration of 5 × 106 spermatozoa/ml and vitrified using the spheres method. Two warming procedures were evaluated: a rapid method (30 s at 37°C) and an ultrarapid method (7 s at 75°C, followed by 30 s at 37°C). Percentages of total motility (phase contrast), membrane function (hypo-osmotic swelling test), acrosome integrity (phase contrast), sperm viability (6-carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide stain), chromatin condensation (toluidine blue stain) and chromatin susceptibility to acid denaturation (acridine orange stain) were evaluated in the samples before and after vitrification. Results, analysed using Friedman's test, suggest that rapid warming of raw porcine spermatozoa vitrified without permeable cryoprotectants may preserve DNA condensation and integrity better than the other processing methods studied in this work. Hence, porcine sperm vitrification using spheres could be used to produce embryos with ICSI to further validate this method.Fil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Miragaya, M. H.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gambarotta, M.C.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Evaluation of the acrosomal status in Lama glama sperm incubated with acrosome reaction inducers

The objectives of this study were to evaluate the effect of different acrosome reaction (AR) inducers on viability and acrosomal status in llama spermatozoa, by using the FITC-PNA/PI technique and evaluate if there is a positive correlation between the FITC-PNA/PI and the Coomassie blue (CB) staining techniques. After incubating twenty ejaculates in 0.1% collagenase the centrifuged pellets were resuspended in TALP-BSA medium. An aliquot was sonicated to remove the acrosomal content (positive control). The rest of the sample was incubated for 3h at 38 °C with 5% CO2 and 100% humidity. TREATMENTS: Three aliquots were further incubated 1h with one of the following AR inducers: calcium ionophore, ionomycin or progesterone. CONTROLS: One without inducers and the other, incubated with dimethyl sulfoxide (vehicle of the inducing agents). Acrosomes were evaluated at time 0 and after 4h incubation. Calcium ionophore was the most potent agent for inducing the AR (67.2 ± 14.4% live+dead AR sperm) (P < 0.05). These samples showed no motility and viability was very low (0-30%). Both ionomycin and progesterone presented significantly higher (P < 0.05) percentages of total AR sperm than the controls, but had similar percentages of dead reacted sperm to the controls. A positive correlation was observed between the intact acrosome FITC-PNA/PI pattern (live+dead sperm) and the acrosome-present CB pattern (r = 0.64; P = 0.000) in all the evaluated samples. CONCLUSIONS: The FITC-PNA/PI technique simultaneously evaluates viability and acrosomal status in llama spermatozoa and calcium ionophore could be used as a control of AR.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Evaluation of the cryoprotective effect of seminal plasma on llama (Lama glama) spermatozoa

In South American camelids, sperm survival is low after thawing and poor results are obtained when artificial insemination is performed with cryopreserved semen. The aim of this study was to evaluate the effect of different percentages (10% and 50%) of seminal plasma added prior to the process of cryopreservation and also to evaluate the absence of seminal plasma on llama sperm survival after freezing and thawing. A total of 15 ejaculates from five adult llama males (n = 5; r = 3) were evaluated. A significant decrease in sperm motility, viability, membrane function and intact acrosomes was observed in thawed samples (0%, 10% and 50%) when compared to raw semen. Neither morphology nor chromatin condensation was altered in all thawed samples (p > 0.05), but a significant increase (p < 0.05) in the percentage of spermatozoa with fragmented DNA was observed after thawing all samples compared to raw semen. Higher percentages of total and progressive sperm motility were observed when 0% and 10% of seminal plasma were used compared to 50%. However, no statistical differences were established for sperm viability, membrane function, morphology, acrosome status and DNA quality between thawed treatments. To conclude, neither of the percentages of seminal plasma used showed superiority nor cryoprotective effect on llama sperm survival.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Chaves, Maria G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentin

Evaluación de la cromatina espermática mediante la tinción de azul de toluidina

La incorporación de técnicas de repducción asistida como la fertilización in vitro y la inyección intracitoplasmática de un espermatozoide (ICSI: Intracytoplasmic Sperm Injection) ha generado un mayor interés en la evaluación del ADN espermático. Esto se debe, principalmente, a que en la ICSI el espermatozoide no requiere estar vivo y/o moverse, pero necesita que su cormatina se encuentre intacta.Los espermatozoides con ADN dañado son capaces de fertilizar y transmitir material genético defectuoso que podría tener consecuencias adversas en el desarrollo embrionario. Los espermatozoides son incapaces de reparar el ADN dañado porque no contienen enzimas funcionales de reparación y aunque después de la fertilización, el ovocito puede reparar cierto nivel de ADN dañado, esto puede resultar en un pobre o defectuoso desarrollo embrionario y en pérdidas embrionarias tempranas. Por esto, sería beneficioso incorporar técnicas de evaluación de ADN espermático al espermograma de rutina, colaborando en una mejor estimación de la capacidad fecundante de un macho reproductor.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Monachesi, Norma Estela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Allera, Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentin