Modulação da ativação de linfócitos T \03B3\03B4 por mediadores lipídicospapel de leucotrieno B4, prostaglandina E2 e lipoxina A4

Submitted by Gilvan Almeida ([email protected]) on 2017-01-10T13:34:33Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Approved for entry into archive by Anderson Silva ([email protected]) on 2017-02-13T12:14:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 catarina_negreiros_ioc_mest_2015.pdf: 4244749 bytes, checksum: 2571599ea843d17de13f81f8e56d0a77 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Made available in DSpace on 2017-02-13T12:14:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 catarina_negreiros_ioc_mest_2015.pdf: 4244749 bytes, checksum: 2571599ea843d17de13f81f8e56d0a77 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, BrasilOs linfócitos T \03B3\03B4 constituem um subtipo de linfócitos T não convencional, capazes de reconhecer antígenos de forma independente de MHC, que apresentam uma importante atividade citotóxica. Os linfócitos T \03B3\03B4 humanos são altamente ativados pelo reconhecimento direto de metabólitos fosforilados, tal como o isopentenil pirofosfato (IPP), produzidos por células tumorais e infectadas. Além disso, mediadores inflamatórios, como eicosanóides, são capazes de modular a resposta destes linfócitos. Dados prévios do nosso laboratório demonstram que o acúmulo tecidual de linfócitos T \F067\F064 em diferentes modelos experimentais murinos é coordenado pelo mediador lipídico leucotrieno B4 (LTB4), cuja produção aumenta no tecido durante a resposta inflamatória, o que ocorre em paralelo à expressão do seu contrareceptor BLT1 na membrana dos linfócitos T \F067\F064. Em adição, dados da literatura demonstram que a prostaglandina E2 (PGE2) inibe a atividade citotóxica de linfócitos T \F067\F064 contra tumores. Desta forma, considerando que LTB4 é capaz de estimular linfócitos T, enquanto a PGE2 e o mediador pró-resolutivo lipoxin A4 (LXA4) são capazes de inibir a ativação de linfócitos, o objetivo deste projeto foi estudar o papel dos mediadores lipídicos LTB4, PGE2 e LXA4 na ativação de linfócitos T \03B3\03B4. Nós observamos que linfócitos T \03B3\03B4 expressam receptores BLT1, EP4 e FPR2/ALX funcionais e que têm sua expressão aumentada após estímulo com IPP. Além disso, o LTB4 levou à ativação dos linfócitos T \03B3\03B4 induzindo: i) a quimiotaxia in vitro, ii) reduzindo a expressão de L-selectina (CD62L) e iii) a polarização para a produção de IFN- \03B3 (aumento da população TCR \03B3\03B4/CD27+) O estímulo com LTB4 também potencializou a liberação de granzima B e expressão do marcador de degranulação CD107a induzido por IPP em linfócitos T \03B3\03B4. Por outro lado, a PGE2 inibiu o aumento da expressão de CD25 e a diminuição da expressão de L-selectina induzida por IPP, e induziu um aumento na população de linfócitos TCR \03B3\03B4/CCR6+ (produtores de IL-17). Ainda, o tratamento de linfócitos T \03B3\03B4 com PGE2 foi capaz de inibir a degranulação destas células (liberação de granzima B e expressão de CD107a). Os efeitos induzidos pela LXA4 sobre os linfócitos T \03B3\03B4 foram tênues, sendo mais evidentes sobre a ativação induzida por LTB4 (e não por IPP), incluindo a inibição da migração e da degranulação induzida pelo LTB4, assim como a expressão de CD25. De forma interessante, observamos que camundongos deficientes de 5- lipoxigenase (5-LO; que não produzem LXA4 e LTB4) submetidos ao modelo de metástase tumoral induzida pela injeção intravenosa da linhagem tumoral de melanoma B16F10 apresentaram mais IL-17 e menos IFN-\03B3 nos pulmões metastáticos do que camundongos selvagens. Este fenômeno ocorreu em paralelo ao maior número de grânulos tumorais. Nossos dados indicam que o LTB4 potencializa e a PGE2 inibe a ativação de linfócitos T \03B3\03B4, sugerindo um papel destes mediadores na atividade destas células\03B3\03B4 T lymphocytes constitute an unconventional subtype of T lymphocytes that are capable to recognize antigens independently of MHC and present an important cytotoxic activity. Human \03B3\03B4 T lymphocytes are highly activated by direct recognition of phosphorylated metabolites such as isopentenyl pyrophosphate (IPP) produced by tumors and infected cells. In addition, these lymphocytes can be modulated by inflammatory mediators, such as eicosanoids. Previous data from our laboratory show that, in different experimental models, \F067\F064 T cell accumulation in inflamed tissue is coordinated by the lipid mediator leukotriene B4 (LTB4), which levels increase in parallel to the expression of its counter-receptor BLT1 by \F067\F064 T lymphocytes. In addition, published data show that prostaglandin E2 (PGE2) inhibits \F067\F064 T lymphocyte cytotoxic activity against tumor cells. Considering that LTB4 is known to stimulate T lymphocyte functions, whereas PGE2 and the pro-resolving lipid mediator lipoxin A4 (LXA4) downmodulate T lymphocyte activation, the aim of the present study was to investigate the role of these lipid mediators on \03B3\03B4 T lymphocyte activation. We observed that \03B3\03B4 T lymphocyte express functional BLT1, EP4 and FPR2/ALX receptors, which in turn are upregulated by IPP stimulation. Furthermore, LTB4 induced \03B3\03B4 T cell activation, by triggering i) in vitro chemotaxis, ii) downmodulation of L-selectin (CD62L) and iii) polarization of IFN-\03B3 production (increase of \03B3\03B4/CD27+ population) LTB4 stimulation also enhanced IPP-induced release of granzyme B and expression of the degranulation marker CD107a by \F067\F064 T lymphocytes. Furthermore, PGE2 inhibited IPP (and LTB4)-induced CD25 expression and L-selectin shedding, as well as increased of \03B3\03B4/CCR6+ population (IL-17 producers). Moreover, PGE2 inhibited \03B3\03B4 T cell CD107a expression and release of granzyme B through degranulation. The effect of LXA4 on \F067\F064 T lymphocyte activation was mild, being more prominent on LTB4 (but not IPP)-induced activation. LXA4 impaired LTB4-induced migration and degranulation, as well as CD25 expression. Interestingly, intravenous injection of the melanoma tumor cell line B16F10 in 5-lipoxigenase (5-LO) deficient mice (which do not produce LXA4 and LTB4) induced higher levels of IL-17 and lower levels of IFN-\03B3 in metastatic lungs compared to wild type mice. This phenomenon occurred in tanden with the increased number of tumor granules. Our data indicate that LTB4 enhances, whereas PGE2 inhibits, the activation of \03B3\03B4 T cells, suggesting a role for these mediators in the modulation of their activit

Murine IL-17+ Vγ4 T lymphocytes accumulate in the lungs and play a protective role during severe sepsis

Submitted by sandra infurna ([email protected]) on 2016-04-18T16:50:53Z No. of bitstreams: 1 richard_valente_etal_IOC_2015.pdf: 1511614 bytes, checksum: 53c0a3196037eb84c301fc62a641a380 (MD5)Approved for entry into archive by sandra infurna ([email protected]) on 2016-04-18T17:07:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 richard_valente_etal_IOC_2015.pdf: 1511614 bytes, checksum: 53c0a3196037eb84c301fc62a641a380 (MD5)Made available in DSpace on 2016-04-18T17:07:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 richard_valente_etal_IOC_2015.pdf: 1511614 bytes, checksum: 53c0a3196037eb84c301fc62a641a380 (MD5) Previous issue date: 2015Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada.. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Inovação em Doenças Negligenciadas (INCT-IDN). Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Mount Sinai School of Medicine. New York City, NY, USA.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Toxinologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Faculdade de Medicina de Petrópolis. Laboratório de Imunologia. Petrópolis, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Inovação em Doenças Negligenciadas (INCT-IDN). Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Universidade Federal do Rio de Janeiro. Centro de Ciências da Saúde. Instituto de Ciências Biomédicas. Laboratório de Inflamação, Estresse Oxidativo e Câncer. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Farmanguinhos. Departamento de Farmacologia. Laboratório de Farmacologia Aplicada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Inovação em Doenças Negligenciadas (INCT-IDN). Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Background: Lung inflammation is a major consequence of the systemic inflammatory response caused by severe sepsis. Increased migration of γδ T lymphocytes into the lungs has been previously demonstrated during experimental sepsis; however, the involvement of the γδ T cell subtype Vγ4 has not been previously described. Methods: Severe sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP; 9 punctures, 21G needle) in male C57BL/ 6 mice. γδ and Vγ4 T lymphocyte depletion was performed by 3A10 and UC3-10A6 mAb i.p. administration, respectively. Lung infiltrating T lymphocytes, IL-17 production and mortality rate were evaluated. Results: Severe sepsis induced by CLP in C57BL/6 mice led to an intense lung inflammatory response, marked by the accumulation of γδ T lymphocytes (comprising the Vγ4 subtype). γδ T lymphocytes present in the lungs of CLP mice were likely to be originated from peripheral lymphoid organs and migrated towards CCL2, CCL3 and CCL5, which were highly produced in response to CLP-induced sepsis. Increased expression of CD25 by Vγ4 T lymphocytes was observed in spleen earlier than that by αβ T cells, suggesting the early activation of Vγ4 T cells. The Vγ4 T lymphocyte subset predominated among the IL-17+ cell populations present in the lungs of CLP mice (unlike Vγ1 and αβ T lymphocytes) and was strongly biased toward IL-17 rather than toward IFN-γ production. Accordingly, the in vivo administration of anti-Vγ4 mAb abrogated CLP-induced IL-17 production in mouse lungs. Furthermore, anti-Vγ4 mAb treatment accelerated mortality rate in severe septic mice, demonstrating that Vγ4 T lymphocyte play a beneficial role in host defense. Conclusions: Overall, our findings provide evidence that early-activated Vγ4 T lymphocytes are the main responsible cells for IL-17 production in inflamed lungs during the course of sepsis and delay mortality of septic mice