Identificação de Staphyloccus aureus, avaliação do seu pontecial enterotoxigênico e resistência a meticilina pela técnica de PCR em amostras de leite da microrregião de Sete Lagoas - MG, 2009

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-09T22:11:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_1_.pdf: 472331 bytes, checksum: 2a16fa69a07a2fb04cf145a71f6140b4 (MD5) Previous issue date: 10Neste trabalho foi realizada a identificação de Staphylococcus aureus e a avaliação do seu potencial enterotoxigênico a partir de amostras de leite de bovinos de propriedades rurais localizadas na microrregião de Sete Lagoas-MG, no período de março a junho de 2009. Utilizou-se a extração de DNA de S. aureus diretamente de amostras de leite, seguida da amplificação pela técnica da PCR dos genes fem A, sea, seb e sec. Os S. aureus resistentes à Meticilina (MRSA) foram detectados pela amplificação do gene mec A. A avaliação da sensibilidade e especificidade da técnica foi realizada em leite artificialmente contaminado com amostras de S. aureus padrão (ATCC 25923, ATCC 13565, ATCC 14458, ATCC 19095 e ATCC 33591) em concentração bacteriana conhecida. A especificidade foi demonstrada pela presença de produtos de PCR de tamanho esperado ao utilizar como molde, o DNA das amostras de referência (controle positivo) e pela ausência de amplificação do DNA de S. epidermidis (controle negativo). O limite de detecção dos microrganismos foi de 10 UFC/mL para todos os genes avaliados com os iniciadores específicos. Foram analisadas 200 amostras de leite de tanque de expansão da microrregião de Sete Lagoas -MG, quanto à presença do gene fem A. Das 200 amostras estudadas analisou-se estatisticamente se houve correlação entre a presença de S. aureus identificados nas amostras de leite com maiores Contagens bacteriana totais (CBT) e se as maiores Contagens de células somáticas (CCS) também estavam relacionadas com a maior presença de S. aureus. Dessas 200 amostras, em 145 (72,5%) houve amplificação do gene fem A e estas foram analisadas quanto à presença dos genes sea, seb, sec e mec A. Os genes das enterotoxinas mais prevalentes foram: sea (60%), seguida de seb (37,93%) e posteriormente sec (6,89%). Foram encontradas 18 amostras de leite (11,03 %) com S. aureus portadores do gene mec A, identificando a presença de MRSA no leite da microrregião estudada. Não houve correlação entre as taxas de identificação de S. aureus e altas CCS e CBT. A detecção de S. aureus diretamente do leite, sem a necessidade de isolamento bacteriano, e a caracterização do potencial enterotoxigênico sugere a utilização da técnica de PCR para estudos epidemiológicos das infecções estafilocócicas da glândula mamária. O alto percentual (72,5%) de amostras de leite positivas para a presença do gene fem A, sugere que S. aureus constitui-se em um dos principais agentes causadores de infecções intramamárias na microrregião de Sete Lagoas-MG e que seu potencial enterotoxigênico representa um risco potencial à saúde pública. Ressalta-se que a presença de MRSA evidencia a seleção de microorganismos resistentes a antibióticos, provavelmente devido ao uso indiscriminado de antibióticos além de comprometer a qualidade do leite e de produtos derivados é também um risco a saúde humanaThe identification of Staphylococcus aureus in milk and the evaluation of its potential enterotoxic were evaluable during period from march to june of 2009, on the milk samples from cattle farms located in the microregion of Sete Lagoas-MG. A protocol for DNA extraction from S. aureus directly from milk samples, followed by amplifications by PCR of the genes fem A, sea, seb and sec were used. The Methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) were detected by amplification of the mec A gene. The sensitivity and specificity of the technique was tested in milk artificially contaminated milk using a decimal dilution of S. aureus standard strains (ATCC 25923, ATCC 13565, ATCC 14458, ATCC 19095 and ATCC 33591). The detection limit of microorganisms was 10 CFU / mL for all genes evaluated with specific primers. The specificity was determined by the presence of expected PCR products from the DNA of the reference strains (positive control) and not amplified DNA from S. epidermidis (negative control). 200 milk samples from the expansion tank from the microregion of Sete Lagoas-MG were available for the presence of the gene fem A. The results were analyzed statistically if there was a relationship between the presence of S. aureus identified in milk samples with higher Total bacteria cont (CBT) and the largest somatic cell cont (CCS) were also related to increased presence of S. aureus. Of the 200 samples, 145 (72.5%) amplified the gene fem A, and were analyzed for the presence of genes sea, seb, sec and mec A. The genes of enterotoxins most prevalent were: sea (60%), followed by seb (37.93%) and then sec (6.89%). There were found 18 milk samples (11.03%) with S. aureus carriers of the gene mec A, identifying the presence of MRSA. There was no correlation between the rates of identification of S. aureus and high CCS or CBT. The detection of S. aureus directly from milk, without the need for bacterial isolation, and characterization of its enterotoxic potential suggests the use of this PCR technique for epidemiological studies of staphylococcal infections. In addition, the S. aureus is one of the major causative pathogen of intramammary infections in the microregion of Sete Lagoas-MG and have a high potential enterotoxic. It is represents a potential risk to public health. It should be noted that the presence of MRSA highlights the selection of antibiotics resistant microorganisms, suggesting that the indiscriminate use of antibiotics in addition to compromising the quality of milk and milk products is a risk to human healt