Biological, Serological and Molecular Detection of Watermelon Mosaic Virus (WMV-2) in Watermelon Growing Fields in Eastern Mediterranean Region

Çalışma, Adana, Mersin ve Osmaniye illerinde karpuz yetiştirilen alanlarda WMV-2’nin serolojik, biyolojik ve moleküler yöntemler kullanılarak saptanması ve tanılanması amacı ile 2012 yılı ilkbahar ve yaz aylarında yürütülmüştür. Araziden toplanan ve virüslü olduğundan şüphenilen 182 bitki örneği öncelikle ELISA yöntemi ile testlenmiş ve toplanan örneklerde WMV-2 infeksiyon oranı % 46.7 olarak hesaplanmıştır. Seçilen WMV-2 izolatları mekanik inokulasyon ve RT-PCR çalışmalarında kullanılmıştır. Mekanik inokulasyon yöntemi ile WMV-2 bulaştırılan kabak (Cucurbita pepo L.), kavun (Cucumis melo L.), hıyar (Cucumis sativus L.) ve karpuz (Citrillus lanatus (Thunb.) Matsum. & Nakai) bitkilerinin yapraklarında mozayik, deformasyon, kabarcıklaşma ve damar bantlaşması, akkazayağı (C. quinoa Willd., C. amaranticolor Coste and Reynier) ve hanım düğmesi (G. globosa L.) bitkilerinin yapraklarında ise, klorotik lokal lezyonlar gözlenmiştir. Tütün (N. tabacum L. Nicotiana benthamiana L. N. glutinosa L. ve N. rustica L.) bitkilerinin yapraklarında ise, herhangi bir simptom ortaya çıkmamıştır. Sonuçlar, ELISA testleri ile doğrulanmıştır. WMV-2 ile infekteli olduğu saptanan bitkilerden elde edilen total RNA’lar RT-PCR çalışmalarında kullanılmış ve 408 bp büyüklüğe sahip band % 1’lik agaroz jelde elektroforez yöntemi ile gözlenmiştir.This study was carried out with the aim of biological, serological and molecular detection and ide1ntification of WMV-2 in watermelon growing fields in Adana, Mersin and Osmaniye provinces in the spring and summer months of 2012. The presence of WMV infection in collected 182 samples was firstly investigated by ELISA and infection ratio was determined as 46.7%. Selected WMV-2 isolates were used in mechanical inoculation and RT-PCR studies. In mechanical inoculation studies, squash (Cucurbita pepo L.), melon (Cucumis melo L.), cucumber (Cucumis sativus L.) and watermelon (Citrillus lanatus (Thunb.) Matsum.&Nakai) produced mosaic, mottle, deformation and vein banding while C. quinoa Willd., C. amaranticolor Coste and Reynier and G. globosa L. showed chlorotic local lesions of leaves. WMV-2 did not induce any symptoms in tobacco species (N. tabacum L., Nicotiana benthamiana L., N. glutinosa L. and N. rustica L.). The results were confirmed by ELISA. Total RNAs were used in RT-PCR and respected size of DNA band (408 bp) was observed by 1% agarose gel electrophoresis

Turunçgil tristeza virüs (CTV) ırklarına spesifik monoklonal antibody'lerin üretilmesi ve CTV ırklarının tanımlanmasında kullanılması

TEZ3607Tez (Doktora) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2000.Kaynakça (s. 81-92) var.viii, 93 s. : rnk. res. ; 30 cm.…Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi Tarafından Desteklenmiştir. Proje No: FBE. 95. 123

Detection of Tospoviruses in Ornamental Plants in Hobby Gardens and Landscaping Areas in Adalar District of Istanbul Province

Bu çalışma, İstanbul ili Adalar İlçesinde (Büyükada, Heybeliada, Kınalıada, Burgazada) hobi bahçeleri ve peyzaj alanlarında yetiştirilen süs bitkilerinde Tomato spotted wilt virus (TSWV), Iris yellow spot virus (IYSV) ve Impatients necrotic spot virus (INSV) varlığının saptanması amacıyla, 2015 ile 2016 yılları arasında yürütülmüştür. Bölgede yapılan survey çalışmalarında simptomolojik olarak şüpheli süs bitkileri ile simptom göstermeyen süs bitkilerinden doku örnekleri alınmıştır. Toplanan 150 adet süs bitkisi örneği öncelikle Double Antibody Sandwich (DAS) ELISA yöntemi ile testlenmiş ve örneklerin hiçbirinde TSWV ve INSV infeksiyonu saptanmamıştır. ELISA testlerinde IYSV ile bulaşık olduğu saptanan örnekler RT-PCR çalışmalarında kullanılmıştır. IYSV465c; IYSV-239f primer çifti ile yapılan RT-PCR çalışmalarında Pittosporum tobira ve Hydrangea macrophylla için 240 bp büyüklüğe sahip band gözlenmiştir. Böylece, IYSV'nin Adalar ilçesinde varlığı moleküler olarak da ortaya konulmuştur.This study was conducted in order to detect Tomato spotted wilt virus (TSWV), Irish yellow spot virus (IYSV) and Impatients necrotic spot virus (INSV) in ornamental plants growing in hobby gardens and landscaping areas in Adalar district (Büyükada, Heybeliada, Kınalıada and Burgazada) of Istanbul province between 2015 and 2016. During the surveys carried out in that district, the samples were collected from both simptomatologically suspicious ornamental plants and the plants which did not show any symptoms. All of the collected samples (n=150) were firstly tested by Double Antibody Sandwich (DAS) ELISA and none of the samples were found to be infected with TSWV and INSV. The samples detected to be positive with IYSV by ELISA tests were then used in RT-PCR studies. At the RT-PCR using the IYSV-465c; IYSV-239f primer pair, a band with a size of 240 bp was observed for Pittosporum tobira and Hydrangea macrophylla. Therefore, the presence of IYSV infection in Adalar was also confirmed molecularl

İstanbul İli Adalar İlçesi’nde Hobi Bahçeleri ve Peyzaj Alanlarında Yetiştirilen Süs Bitkilerinde Tospovirüslerin Saptanması

Bu çalışma, İstanbul ili Adalar İlçesinde (Büyükada, Heybeliada, Kınalıada, Burgazada) hobi bahçeleri ve peyzaj alanlarında yetiştirilen süs bitkilerinde Tomato spotted wilt virus (TSWV), Iris yellow spot virus (IYSV) ve Impatients necrotic spot virus (INSV) varlığının saptanması amacıyla, 2015 ile 2016 yılları arasında yürütülmüştür. Bölgede yapılan survey çalışmalarında simptomolojik olarak şüpheli süs bitkileri ile simptom göstermeyen süs bitkilerinden doku örnekleri alınmıştır. Toplanan 150 adet süs bitkisi örneği öncelikle Double Antibody Sandwich (DAS) ELISA yöntemi ile testlenmiş ve örneklerin hiçbirinde TSWV ve INSV infeksiyonu saptanmamıştır. ELISA testlerinde IYSV ile bulaşık olduğu saptanan örnekler RT-PCR çalışmalarında kullanılmıştır. IYSV-465c; IYSV-239f primer çifti ile yapılan RT-PCR çalışmalarında Pittosporum tobira ve Hydrangea macrophylla için 240 bp büyüklüğe sahip band gözlenmiştir. Böylece, IYSV’nin Adalar ilçesinde varlığı moleküler olarak da ortaya konulmuştur

Turunçgil tristeza virüs (CTV) ırklarına spesific monoklonal antibadi'lerin üretilmesi ve CTV ırklarının tanılanmasında kullanılması

CTV kolon kromatografi ve sukroz density gradient santrifügasyon yöntemleri kullanılarak saHaşlmlmışlır. Farelerin bağışıklanmasmdu ve monoklonal antibody ile ilgili scrolojik çalışmalarda, daha saf virüs elde edildiğinden kolon kromatografi yönteminden elde edilen preparasyonlar kullanılmıştır. UV absorbsiyon spektrumu oranı(260/280) 1.20 saplanmıştır. SDS-PAGE sonucunda CTV kılıf proteinlerinin moleküler ağırlıkları yaklaşık olarak 26 ve 27 000 kDa bulunmuştur. Ayrıca, CTV izolatları ELISA, İSEM ve slot-blolling yöntemleri kullanılarak saptanmıştır. Füzyon sonunda, CTV spesifik monoklonal antikor üreten bir hibril hücre haltı (IG8) elde edilmiştir. IG8, PTA-I ELISA leslinde İğdır, Serdengeçti ve Kıbrıs, izolatları ile reaksiyon vermiş, DAS- ELISA leslinde ise, Serdengeçti i/olalı reaksiyon vermem i şii r.CTV was purified by column chromalography and sucrose density gradient cenlrifugation methods. However, more concentrated virus particles were obtained by column chromatography. The absorption spectrum at 260/280 ratio and virus yield were 1.20 and 454 mg/ml respectively. Two bands were observed in SDS- PAGE and the molecular weight of CTV coat proteins was defined as 26 and 27 ± 1000 kDa. CTV was detected by ELISA lest, ISEM and slot-blolting. Al the end of fusions, a hybrid cell clone (1G8) was obtained for CTV specific anlibody. 1G8 was reacted lo the Igdir, Serdengecti and Cyprus isolates of CTV with PTA-I ELISA. However, 1G8 did not react to Ihe Serdengecti isolate with DAS-I ELISA