Desarrollo de un suero equino hiperinmune para el tratamiento de COVID-19 en Argentina

La enfermedad denominada COVID-19 es causada por el coronavirus SARS-CoV-2 y es actualmente considerada una pandemia a nivel global. El desarrollo de vacunas es sin duda la mejor estrategia a largo plazo, pero debido a la emergencia sanitaria, existe una necesidad urgente de encontrar soluciones rápidas y efectivas para el tratamiento de la enfermedad. Hasta la fecha, el uso de plasma de convalecientes es la única inmunoterapia disponible para pacientes hospitalizados con COVID-19. El uso de anticuerpos policlonales equinos (EpAbs) es otra alternativa terapéutica interesante. La nueva generación de EpAbs incluyen el procesamiento y purificación de los mismos y la obtención de fragmentos F(ab’)2 con alta pureza y un excelente perfil de seguridad en humanos. Los EpAbs son fáciles de producir, lo cual permite el desarrollo rápido y la elaboración a gran escala de un producto terapéutico. En este trabajo mostramos el desarrollo de un suero terapéutico obtenido luego de la inmunización de caballos utilizando el receptor-binding domain de la glicoproteína Spike del virus. Nuestro producto mostró ser alrededor de 50 veces más potente en ensayos de seroneutralización in vitro que el promedio de los plasmas de convalecientes. Estos resultados nos permitirían testear la seguridad y eficacia de nuestro producto en ensayos clínicos de fase 2/3 a realizarse a partir de julio de 2020 en la zona metropolitana de Buenos Aires, Argentina.The disease named COVID-19, caused by the SARS-CoV-2 coronavirus, is currently generating a global pandemic. Vaccine development is no doubt the best long-term immunological approach, but in the current epidemiologic and health emergency there is a need for rapid and effective solutions. Convalescent plasma is the only antibody-based therapy available for COVID-19 patients to date. Equine polyclonal antibodies (EpAbs) put forward a sound alternative. The new generation of processed and purified EpAbs containing highly purified F(ab’)2 fragments demonstrated to be safe and well tolerated. EpAbs are easy to manufacture allowing a fast development and scaling up for a treatment. Based on these ideas, we present a new therapeutic product obtained after immunization of horses with the receptor-binding domain of the viral Spike glycoprotein. Our product shows around 50 times more potency in in vitro seroneutralization assays than the average of convalescent plasma. This result may allow us to test the safety and efficacy of this product in a phase 2/3 clinical trial to be conducted in July 2020 in the metropolitan area of Buenos Aires, Argentina.Fil: Zylberman, Vanesa. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sanguineti, Santiago. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pontoriero, Andrea. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Higa, Sandra V.. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; ArgentinaFil: Cerutti, Maria Laura. Universidad Nacional de San Martín. Centro de Rediseño e Ingeniería de Proteínas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Morrone Seijo, Susana María. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pardo, Romina Paola. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Muñoz, Luciana. Inmunova; ArgentinaFil: Acuña Intieri, María Eugenia. Universidad Nacional de San Martín. Centro de Rediseño e Ingeniería de Proteínas; ArgentinaFil: Alzogaray, Vanina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Avaro, Martín M.. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Benedetti, Estefanía. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Berguer, Paula Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Bocanera, Laura. mAbxience; ArgentinaFil: Bukata, Lucas. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bustelo, Marina S.. Inmunova; ArgentinaFil: Campos, Ana M.. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Colonna, Mariana. Inmunova; ArgentinaFil: Correa, Elisa. mAbxience; ArgentinaFil: Cragnaz, Lucí­a. mAbxience; ArgentinaFil: Dattero, María E.. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Dellafiore, María Andrea. mAbxience; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Foscaldi, Sabrina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: González, Joaquí­n V.. Inmunova; ArgentinaFil: Guerra, Luciano Lucas. mAbxience; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Klinke, Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Labanda, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Lauché, Constanza Elena. Inmunova; ArgentinaFil: López, Juan C.. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; ArgentinaFil: Martínez, Anabela M.. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; ArgentinaFil: Otero, Lisandro Horacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Peyric, Elías H.. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; ArgentinaFil: Ponziani, Pablo F.. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; ArgentinaFil: Ramondino, Romina. Inmunova; ArgentinaFil: Rinaldi, Jimena Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Rodrí­guez, Santiago. mAbxience; ArgentinaFil: Russo, Javier E.. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; ArgentinaFil: Russo, Mara Laura. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Saavedra, Soledad Lorena. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Seigelchifer, Mauricio. mAbxience; ArgentinaFil: Sosa, Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Vilariño, Claudio. Universidad Nacional de San Martín. Centro de Rediseño e Ingeniería de Proteínas; ArgentinaFil: López Biscayart, Patricia. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; ArgentinaFil: Corley, Esteban. mAbxience; ArgentinaFil: Spatz, Linus. Inmunova; ArgentinaFil: Baumeister, Elsa. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Universidad Nacional de San Martín. Centro de Rediseño e Ingeniería de Proteínas; Argentina. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentin

Interaction network and localization of Brucella abortus membrane proteins involved in the synthesis, transport, and succinylation of cyclic β-1,2-glucans

Cyclic β-1,2-glucans (CβG) are periplasmic homopolysaccharides that play an important role in the virulence and interaction of Brucella with the host. Once synthesized in the cytoplasm by the CβG synthase (Cgs), CβG are transported to the periplasm by the CβG transporter (Cgt) and succinylated by the CβG modifier enzyme (Cgm). Here, we used a bacterial two-hybrid system and coimmunoprecipitation techniques to study the interaction network between these three integral inner membrane proteins. Our results indicate that Cgs, Cgt, and Cgm can form both homotypic and heterotypic interactions. Analyses carried out with Cgs mutants revealed that the N-terminal region of the protein (Cgs region 1 to 418) is required to sustain the interactions with Cgt and Cgm as well as with itself. We demonstrated by single-cell fluorescence analysis that in Brucella, Cgs and Cgt are focally distributed in the membrane, particularly at the cell poles, whereas Cgm is mostly distributed throughout the membrane with a slight accumulation at the poles colocalizing with the other partners. In summary, our results demonstrate that Cgs, Cgt, and Cgm form a membrane-associated biosynthetic complex. We propose that the formation of a membrane complex could serve as a mechanism to ensure the fidelity of CβG biosynthesis by coordinating their synthesis with the transport and modification.Fil: Guidolin, Leticia Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Morrone Seijo, Susana María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Guaimas, Francisco Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Comerci, Diego José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Ezeiza; ArgentinaFil: Ciocchini, Andres Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

A T4SS Effector Targets Host Cell Alpha-Enolase Contributing to Brucella abortus Intracellular Lifestyle

Brucella abortus, the causative agent of bovine brucellosis, invades and replicates within cells inside a membrane-bound compartment known as the Brucella containing vacuole (BCV). After trafficking along the endocytic and secretory pathways, BCVs mature into endoplasmic reticulum-derived compartments permissive for bacterial replication. Brucella Type IV Secretion System (VirB) is a major virulence factor essential for the biogenesis of the replicative organelle. Upon infection, Brucella uses the VirB system to translocate effector proteins from the BCV into the host cell cytoplasm. Although the functions of many translocated proteins remain unknown, some of them have been demonstrated to modulate host cell signaling pathways to favor intracellular survival and replication. BPE123 (BAB2_0123) is a B. abortus VirB-translocated effector protein recently identified by our group whose function is yet unknown. In an attempt to identify host cell proteins interacting with BPE123, a pull-down assay was performed and human alpha-enolase (ENO-1) was identified by LC/MS-MS as a potential interaction partner of BPE123. These results were confirmed by immunoprecipitation assays. In bone-marrow derived macrophages infected with B. abortus, ENO-1 associates to BCVs in a BPE123-dependent manner, indicating that interaction with translocated BPE123 is also occurring during the intracellular phase of the bacterium. Furthermore, ENO-1 depletion by siRNA impaired B. abortus intracellular replication in HeLa cells, confirming a role for alpha-enolase during the infection process. Indeed, ENO-1 activity levels were enhanced upon B. abortus infection of THP-1 macrophagic cells, and this activation is highly dependent on BPE123. Taken together, these results suggest that interaction between BPE123 and host cell ENO-1 contributes to the intracellular lifestyle of B. abortus

Desarrollo de un suero equino hiperinmune para el tratamiento de COVID-19 en Argentina

Fil: Pontoriero, A. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Virología. Servicio de Virosis Respiratorias. Centro Nacional de Influenza PAHO/WHO; Argentina.Fil: Baumeister, Elsa. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Virología. Servicio de Virosis Respiratorias. Centro Nacional de Influenza PAHO/WHO; Argentina.Fil: Campos, Ana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Virología. Servicio de Virosis Respiratorias. Centro Nacional de Influenza PAHO/WHO; Argentina.Fil: Avaro, Martín. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Virología. Servicio de Virosis Respiratorias. Centro Nacional de Influenza PAHO/WHO; Argentina.Fil: Benedetti, Estefanía. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Virología. Servicio de Virosis Respiratorias. Centro Nacional de Influenza PAHO/WHO; Argentina.Fil: Dattero, María. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Virología. Servicio de Virosis Respiratorias. Centro Nacional de Influenza PAHO/WHO; ArgentinaFil: Zylberman, Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET); Buenos Aires, Argentina.Fil: Sanguineti, Santiago. INMUNOVA S.A.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Higa, Sandra V. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Cerutti, María L. Universidad Nacional de San Martín. Centro de Rediseño e Ingenieria de Proteínas (CRIP); Buenos Aires, Argentina.Fil: Morrone Seijo, Susana M. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET); Buenos Aires, Argentina.Fil: Pardo, Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET); Buenos Aires, Argentina.Fil: Muñoz, Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET); Buenos Aires, Argentina.Fil: Acuña Intrieri, María E. Universidad Nacional de San Martín. Centro de Rediseño e Ingenieria de Proteínas (CRIP); Buenos Aires, Argentina.Fil: Alzogaray, Vanina A. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: Berguer, Paula M. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: Bocanera, Laura. mAbxience; Buenos Aires, Argentina.Fil: Bukata, Lucas. INMUNOVA S.A.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Bustelo, Marina S. INMUNOVA S.A.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Colonna, Mariana. INMUNOVA S.A.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Correa, Elisa. mAbxience; Buenos Aires, Argentina.Fil: Cragnaz, Lucía. mAbxience; Buenos Aires, Argentina.Fil: Dellafiore, María. mAbxience; Buenos Aires, Argentina.Fil: Foscaldi, Sabrina. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: González, Joaquín V. INMUNOVA S.A.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Guerra, Luciano L. mAbxience; Buenos Aires, Argentina.Fil: Klinke, Sebastián. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: Labanda, María S. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: Lauché, Constanza. INMUNOVA S.A.; Buenos Aires, Argentina.Fil: López, Juan C. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Martínez, Anabela M. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Otero, Lisandro H. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: Peyric, Elías H. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Ponziani, Pablo F. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Ramondino, Romina. INMUNOVA S.A.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Rinaldi, Jimena. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: Rodríguez, Santiago. mAbxience; Buenos Aires, Argentina.Fil: Russo, Javier E. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Russo, Mara L. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Virología. Servicio de Virosis Respiratorias. Centro Nacional de Influenza PAHO/WHO; Argentina.Fil: Saavedra, Soledad L. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: Seigelchifer, Mauricio. mAbxience; Buenos Aires, Argentina.Fil: Sosa, Santiago. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.Fil: Vilariño, Claudio. Universidad Nacional de San Martín. Centro de Rediseño e Ingenieria de Proteínas (CRIP); Buenos Aires, Argentina.Fil: López Biscayart, Patricia. Instituto Biológico Argentino S.A.I.C.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Corley, Esteban. mAbxience; Buenos Aires, Argentina.Fil: Spatz, Linus. INMUNOVA S.A.; Buenos Aires, Argentina.Fil: Goldbaum, Fernando A. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBA). Fundación Instituto Leloir. Laboratorio de Inmunología y Microbiología Molecular; Buenos Aires, Argentina.The disease named COVID-19, caused by the SARS-CoV-2 coronavirus, is currently generating a global pandemic. Vaccine development is no doubt the best long-term immunological approach, but in the current epidemiologic and health emergency there is a need for rapid and effective solutions. Convalescent plasma is the only antibody-based therapy available for COVID-19 patients to date. Equine polyclonal antibodies (EpAbs) put forward a sound alternative. The new generation of processed and purified EpAbs containing highly purified F(ab')2 fragments demonstrated to be safe and well tolerated. EpAbs are easy to manufacture allowing a fast development and scaling up for a treatment. Based on these ideas, we present a new therapeutic product obtained after immunization of horses with the receptor-binding domain of the viral Spike glycoprotein. Our product shows around 50 times more potency in in vitro seroneutralization assays than the average of convalescent plasma. This result may allow us to test the safety and efficacy of this product in a phase 2/3 clinical trial to be conducted in July 2020 in the metropolitan area of Buenos Aires, Argentina