Cross-cultural adaptation of simplified version (s) of Behçet's Disease Current Activity Form (BDCAF) and comparison between two different instruments with Brazilian versions for evaluating Behçet's Disease Activity: BR-BDCAF and BR-BDCAF(s)

OBJETIVO: Um instrumento de avaliação da atividade da Doença de Behçet (DB) denominado Behçet's Disease Current Activity Form (BDCAF) foi originalmente elaborado em língua inglesa e adaptado para a língua portuguesa do Brasil na versão BR-BDCAF. Recentemente, um modelo simplificado desse protocolo (com 12 itens) foi apresentado pela Sociedade Internacional para a Doença de Behçet (International Society for Behçet's Disease, ISBD) para produzir um índice denominado BDAI (Behçet's Disease Activity Index). Por esse motivo, neste trabalho produzimos o modelo simplificado da versão brasileira, medimos sua confiabilidade e avaliamos a validade dos resultados de ambos os instrumentos, comparando seus desempenhos. MÉTODO: O modelo simplificado da versão brasileira BR-BDCAF, adaptada transculturalmente, foi denominado BR-BDCAF(s). Ambos os protocolos foram aplicados em 25 pacientes com DB. A confiabilidade do BR-BDCAF(s) foi avaliada através das reprodutibilidades intra e interobservadores pela estatística kappa. A validade e as propriedades diagnósticas sensibilidade(S), especificidade(E) e acurácia dos dois protocolos na definição de casos ativos da doença foram avaliadas pela comparação ao julgamento clínico de um reumatologista perito em DB, e os melhores pontos de corte foram estabelecidos para cada instrumento através da curva ROC (receive-operator characteristic). RESULTADOS E CONCLUSÕES: BR-BDCAF(s) apresentou boa confiabilidade nas questões sobre manifestações mucocutâneas e articulares da DB. Os melhores pontos de corte para a definição de casos ativos foram índices maiores que quatro no BR-BDCAF (S = 80,0%, E = 86,7%) e maiores que um no BR-BDCAF(s) (S = 70,0%, E = 86,7%). Suas acurácias foram semelhantes, sugerindo que ambos podem ser utilizados como instrumentos de medida de atividade da DB.OBJECTIVE: Behçet's Disease Current Activity Form (BDCAF), an instrument for assessing activity of Behçet's Disease (BD), was originally produced in English. Its cross-cultural adaptation to Brazilian Portuguese language generated a version called BR-BDCAF. Recently, a simplified model of this protocol (with 12 items) was developed by the International Society for Behçet's Disease (ISBD) to generate an index called BDAI (Behçet's Disease Activity Index). For this reason, in this work we intended to create the simplified model of the Brazilian version, measure their reliability and evaluate the validity of the results of both instruments, comparing their performances. METHODS: The simplified version of BR-BDCAF was called BR-BDCAF(s). Both protocols were applied in 25 BD patients. Reliability of BR-BDCAF(s) was evaluated through intra- and interobserver agreement according to kappa statistic. Sensitivity (Se), specificity (Sp) and accuracy of both protocols on defining BD active cases were evaluated by comparing the rheumatologist expert clinical judgement to each protocol, and the best cut-off points were established for each instrument by the ROC curve (receive-operator characteristic). RESULTS AND CONCLUSIONS: BR-BDCAF(s) showed good reliability on items relating to mucocutaneous and articular manifestations of BD. The best cut-off points for the definition of active cases were: higher than four with BR-BDCAF (Se = 80.0%, Sp = 86.7%) and higher than one with BR-BDCAF( s) (Se = 70.0%, Sp = 86.7%). Accuracy of both protocols was similar, suggesting that both can be used as tools to assess activity of DB

Low sclerostin levels: a predictive marker of persistent inflammation in ankylosing spondylitis during anti-tumor necrosis factor therapy?

Abstract\ud \ud \ud \ud Introduction\ud \ud Sclerostin levels have been reported to be low in ankylosing spondylitis (AS), but there is no data regarding the possible role of this Wnt inhibitor during anti-tumor necrosis factor (TNF) therapy. The present study longitudinally evaluated sclerostin levels, inflammatory markers and bone mineral density (BMD) in AS patients under anti-TNF therapy.\ud \ud \ud \ud Methods\ud \ud Thirty active AS patients were assessed at baseline, 6 and 12 months after anti-TNF therapy regarding clinical parameters, inflammatory markers, BMD and baseline radiographic damage (mSASSS). Thirty age- and sex-matched healthy individuals comprised the control group. Patients' sclerostin levels, sclerostin binding low-density lipoprotein receptor-related protein 6 (LRP6) and BMD were evaluated at the same time points and compared to controls.\ud \ud \ud \ud Results\ud \ud At baseline, AS patients had lower sclerostin levels (60.5 ± 32.7 vs. 96.7 ± 52.9 pmol/L, P = 0.002) and comparable sclerostin binding to LRP6 (P = 0.387) than controls. Improvement of Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index (BASDAI), Bath Ankylosing Spondylitis Functional Index (BASFI), Bath Ankylosing Spondylitis Metrology Index (BASMI), Ankylosing Spondylitis quality of life (ASQoL) was observed at baseline vs. 6 vs. 12 months (P < 0.01). Concomitantly, a gradual increase in spine BMD (P < 0.001) and a positive correlation between baseline mSASSS and spine BMD was found (r = 0.468, P < 0.01). Inflammatory parameters reduction was observed comparing baseline vs. 6 vs. 12 months (P <0.01). Sclerostin levels progressively increased [baseline (60.5 ± 32.7) vs. 6 months (67.1 ± 31.9) vs. 12 months (72.7 ± 32.3) pmol/L, P <0.001]. At 12 months, the sclerostin levels remained significantly lower in patients compared to controls (72.7 ± 32.3 vs. 96.70 ± 52.85 pmol/L, P = 0.038). Moreover, sclerostin serum levels at 12 months were lower in the 10 patients with high C reactive protein (CRP) (≥ 5 mg/l) compared to the other 20 patients with normal CRP (P = 0.004). Of note, these 10 patients with persistent inflammation also had lower sclerostin serum levels at baseline compared to the other patients (P = 0.023). Univariate logistic regression analysis demonstrated that AS patients with lower sclerostin serum levels had an increased risk to have high CRP at 12 months (odds ratio = 7.43, 95% CI 1.23 to 45.01, P = 0.020) than those with higher sclerostin values.\ud \ud \ud \ud Conclusions\ud \ud Persistent low sclerostin levels may underlie continuous inflammation in AS patients under anti-TNF therapy.This study was supported by grants from Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP #2009/51897-5 to EB), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (#300248/2008-3 to CAS, #301411/2009-3 to EB and #300559/2009-7 to RMRP) Federico Foundation (to CGSS, CAS, EB and RMRP)

Effect of inflammation on atrial natriuretic peptide (NT-proBNP) levels in active ankylosing spondylitis patients receiving anti-TNF therapy

Introdução: O fragmento amino-terminal do pró-peptídeo natriurético do tipo B (NT-proBNP) é um forte marcador de doença cardiovascular com evidências recentes de que a inflamação também pode influenciar seus valores. A diferenciação dessa variável de confusão é de particular interesse nas doenças reumáticas. Objetivos: Avaliar o comportamento dos valores de NT-proBNP em pacientes com espondilite anquilosante (EA) pré e pós uso de bloqueadores de TNF para determinar a possível associação entre os valores de NT-proBNP e os parâmetros inflamatórios. Métodos: Quarenta e cinco pacientes consecutivos com EA sem evidência prévia ou atual de doença cardiovascular ou disfunção miocárdica sistólica e que eram elegíveis para terapia anti-TNF foram incluídos prospectivamente. Todos os pacientes receberam bloqueadores de TNF e foram avaliados para concentrações circulantes de NT-proBNP, parâmetros clínicos e laboratoriais de atividade de doença, fatores de risco cardiovasculares tradicionais e ecodopplercardiografia convencional e tecidual no momento da inclusão e após seis meses de tratamento. Resultados: No momento da inclusão, todos os pacientes tinham EA ativa, os valores de NT-proBNP tinham uma mediana de 36 (20-72) pg/mL e 11% dos valores estavam altos mesmo na ausência de alteração miocárdica sistólica. A análise de regressão linear múltipla revelou que esse peptídeo estava independentemente correlacionado com o VHS (p < 0,001), com a idade dos pacientes (p = 0,01) e com a pressão de pulso (p = 0,01) no momento da inclusão. Após seis meses, todos os parâmetros relacionados a doença de base melhoraram e os valores de NT-proBNP se reduziram significativamente [24 (16-47) pg/mL, p = 0,037] quando comparados com os valores do momento da inclusão. As mudanças nos valores de NT-proBNP correlacionaram-se positivamente com as mudanças nos valores do VHS (r = 0,41, p = 0.006). Os fatores de risco cardiovasculares avaliados permaneceram estáveis durante o seguimento. Conclusão: As elevações nos valores de NT-proBNP devem ser interpretadas com cuidado nos pacientes com EA ativa e sem evidência de doença cardiovascular. A redução no curto prazo dos valores de NT-proBNP nesses pacientes recebendo terapia anti-TNF parece refletir uma melhora do estado inflamatórioIntroduction: N-terminal pro-brain natriuretic peptide (NT-proBNP) is a strong marker of cardiovascular disease with recent evidence that inflammation may also influence its levels; discrimination of this confounding variable is of particular interest in rheumatic diseases. Objectives: to evaluate NT-proBNP in ankylosing spondylitis (AS) patients pre- and post-TNF blocker to determine the possible association between NT-proBNP levels and inflammatory parameters. Methods: Forty-five consecutive AS patients without previous/current cardiovascular disease or systolic myocardial dysfunction, who were eligible to anti-TNF therapy, were prospectively enrolled. All patients received TNF blockers and they were evaluated for circulating NT-proBNP levels, clinical and laboratory parameters of disease activity, traditional cardiovascular risk factors, and conventional and tissue Doppler imaging echocardiography at baseline (BL) and six months after (6M) treatment. Results: At BL, all patients had active AS, NT-proBNP levels had a median of 36 (20-72) pg/mL and 11% were high in spite of no systolic alteration. Multiple linear regression analysis revealed that this peptide, at BL, was independently correlated with ESR (p < 0.001), age (p = 0.01) and pulse pressure (p = 0.01). After 6M, all disease parameters improved and NT-proBNP levels were significantly reduced [24 (16-47) pg/mL, p = 0.037] compared to BL. Changes in NT-proBNP were positively correlated with ESR changes (r = 0.41, p = 0.006). Cardiovascular risk factors remained stable during follow-up. Conclusion: our data suggests that elevations of NT-proBNP should be interpreted with caution in active AS patients with no other evidence of cardiovascular disease. The short-term reduction of NT-proBNP levels in these patients receiving anti-TNF therapy appears to reflect an improvement in inflammatory statu

Síndrome de Behçet: à procura de evidências

A síndrome de Behçet (SB) é uma afecção inflamatória multissistêmica, de acometimento vascular e de causa ainda desconhecida, basicamente caracterizada por úlceras orais e genitais recorrentes, uveíte e lesões cutâneas. A perda da visão é freqüente, resultado de ataques repetidos de inflamação. Reconhecida atualmente como um modelo singular de vasculite, a SB parece apresentar elementos de suscetibilidade genética do portador e fatores ambientais desencadeantes. O estabelecimento de critérios internacionais de diagnóstico/classificação, em 1990, e protocolos clínicos em desenvolvimento para medida da atividade da doença podem permitir a padronização das pesquisas na área. Neste artigo são revistos dados epidemiológicos, clínicos, as hipóteses correntes sobre etiogenia e fisiopatologia e dados atuais sobre as diferentes intervenções terapêuticas, considerando as drogas imunossupressoras clássicas e os novos agentes biológicos, destacando a necessidade de novas informações baseadas em evidências nesta área

Frequência de anticorpos aos agentes etiológicos da síndrome da imunodeficiência adquirida, sífilis, hepatites virais B e C e doença de Chagas em pacientes reumatológicos em tratamento com antifator de necrose tumoral (Tumor Necrosis Factor - TNF) Frequency of antibodies against the etiologic agents of acquired imunodeficiency syndrome, syphilis, hepatitis B and C, and Chagas' disease in patients with rheumatic diseases treated with anti-tumor necrosis factor

INTRODUÇÃO: Os pacientes reumatológicos em terapia com antifator de necrose tumoral (anti-TNF, Tumor Necrosis Factor) são considerados imunodeprimidos. Neste sentido, a pesquisa de doenças infecciosas nesta população é imperiosa devido à alta morbidade e, por vezes, mortalidade associada a este quadro. OBJETIVOS: O presente trabalho teve por objetivo avaliar a frequência de soropositividade para os seguintes agentes infecciosos: Treponema pallidum (sífilis), Trypanosoma cruzii (doença de Chagas), vírus da imunodeficiência humana adquirida (Human imunnodeficiency Virus - HIV) e hepatites B e C (HBV e HCV, respectivamente) em pacientes recebendo terapia anti-TNF. PACIENTES E MÉTODOS: Foram avaliados 143 pacientes reumatológicos em um estudo observacional, com artrite reumatoide, espondilite anquilosante, artrite psoriásica e outras doenças, em uso de terapia anti-TNF (adalimumabe, etanercepte e infliximabe) no período de setembro de 2007 a novembro de 2008. Foram coletados dados clínicos e demográficos, bem como uma amostra de sangue para a análise da presença de anticorpos contra os agentes infecciosos HIV (Aids), HBV e HCV (hepatites B e C, respectivamente), Treponema pallidum (sífilis) e Trypanosoma cruzii (doença de Chagas). RESULTADOS: A média de idade da população estudada foi de 45,78 ± 12,7 anos, sendo 60,1% do sexo feminino e 76,9% de cor branca. Treze (9%) dos pacientes apresentaram pelo menos uma sorologia positiva. Nenhum dos pacientes apresentou sorologia positiva para o Trypanosoma cruzii (doença de Chagas), bem como para HIV. Somente dois (1,4%) indivíduos apresentaram positividade para o Treponema pallidum (sífilis) (ELISA positivo e VDRL negativo). A frequência de anti-HBc total foi de 5% (7/140), sendo que todos estes foram positivos também para anti-HBs. O HBsAg foi negativo em todos os pacientes. Quatro pacientes tiveram HCV positivo, sendo que dois deles tinham PCR negativo para o vírus e os outros dois foram positivos e estavam estáveis. CONCLUSÃO: A frequência de soropositividade para certas doenças infecciosas em pacientes em terapia com anti-TNF é baixa. Os indivíduos que merecem maior atenção são aqueles com sorologia positiva para o HCV.<br>INTRODUCTION: Patients with rheumatic diseases treated with anti-tumor necrosis factor (anti-TNF) are considered to be immunosuppressed. Therefore, investigation for infectious diseases is mandatory in this population due to the high morbidity and, occasionally, mortality associated with this condition. OBJECTIVES: The objective of the present study was to evaluate the frequency of seropositivity for the following infectious agents: syphilis, Chagas' disease, acquired human immunodeficiency virus (HIV), and hepatitis B and C in patients under anti-TNF therapy. PATIENTS AND METHODS: This observational study evaluated 143 rheumatology patients with rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, psoriatic arthritis, and others, under anti-TNF therapy (adalimumab, etanercept, and infliximab) from September 2007 to November 2008. Clinical and demographic data, as well as presence of antibodies against HIV, hepatitis B and C, syphilis, and Chagas' disease, were evaluated. RESULTS: The study population had a mean age of 45.78 ± 12.7 years; 60.1% were females and 76.9% Caucasian. Thirteen (9%) patients had at least one positive serology. None of the patients had antibodies to Chagas' disease and HIV. Only two (1.4%) individuals were positive for syphilis (positive ELISA and negative VDRL). The frequency of total anti-HBc was 5% (7/140), and those patients were also positive for anti-HBs. All patients were negative for AgHBs. Four patients were HCV positive: and two of them had negative virus PCR and the other two were positive, but they were stable. CONCLUSION: The frequency of seropositivity for different infectious diseases in patients under anti-TNF therapy is low. Individuals with positive serology for hepatitis C deserve close attention

Complicações Imediatas de 3.555 aplicações de agentes anti-TNF&#945; Immediate complications of 3,555 injections of anti-TNF&#945;

OBJETIVO: Avaliar as complicações imediatas da aplicação de agentes anti-TNF&#945; no Centro de Dispensação de Medicação deAlto Custo do HC-FMUSP. PACIENTES E MÉTODOS: Foram incluídos todos os pacientes que receberam agentes anti-TNF&#945; entre agosto/2007 e março/2009.As complicações imediatas (até 1 hora após o término da aplicação) foram classificadas em leves (cefaleia, rash, tontura, prurido, náuseas), moderadas (febre, urticária, palpitação, dor torácica, dispneia, variação da pressão arterial de 20 a 40 mmHg) ou graves (febre com calafrios, dispneia com sibilância, variação da pressão arterial > 40 mmHg). RESULTADOS: Foram avaliados 242 pacientes: 94 (39%) com artrite reumatoide, 64 (26%) com espondilite anquilosante, 32 (13%) com artrite psoriásica, 26 (11%) com artrite idiopática juvenil e 27 (11%) com outros diagnósticos. O número total de aplicações foi de 3.555, sendo 992 (28%) de adalimumabe, 1.546 (43%) de etanercepte e 1.017 (29%) de infliximabe. Complicações imediatas foram observadas em 39/242 (16%) pacientes. As complicações ocorreram em 45/3.555 (1,2%) aplicações. Estas foram mais frequentes com infliximabe comparado com adalimumabe (3,7% vs. 0,5%, P < 0,0001), e com etanercepte (3,7% vs. 0,25%, P < 0,0001). As complicações foram: leves 14/45 (31%), moderadas 21/45 (47%) e graves 10/45 (22%); ocorreram principalmente nos primeiros seis meses de tratamento (56%) e nas aplicações endovenosas, predominantemente na primeira hora de infusão (76%). CONCLUSÃO: As reações agudas, apesar de raras, são potencialmente graves e ocorrem principalmente nas primeiras aplicações tanto no uso de medicações endovenosas como de subcutâneas. É necessário realizar mais estudos para definir a necessidade de aplicação dos imunobiológicos via subcutânea em locais capacitados para atendimento de emergências.<br>OBJECTIVE: To evaluate the immediate complications of anti-TNF&#945; drugs at the "Center for Dispensation of High Cost Medications" of HC-FMUSP. PATIENTS AND METHODS: All patients who received anti-TNF&#945; agents between August 2007 and March 2009 were included in this study. Immediate complications (up to 1 hour after the injection) were classified as mild (headache, rash, dizziness, itching, nausea), moderate (fever, urticaria, palpitation, chest pain, dyspnea, blood pressure variations between 20 and 40 mmHg), or severe (fever with chills, dyspnea with wheezing, variations in blood pressure > 40 mmHg). RESULTS: Two hundred and forty-two patients were evaluated: 94 (39%) with rheumatoid arthritis, 64 (26%) with ankylosing spondylitis, 32 (13%) with psoriatic arthritis, 26 (11%) with juvenile idiopathic arthritis; and 27 (11%) with other diagnoses. A total of 3,555 injections were administered: 992 (28%) adalimumab, 1,546 (43%) etanercept, and 1,017 (29%) infliximab. Immediate adverse events were observed in 39/242 (16%) patients. Injectionrelated complications were observed in 46/3,555 (1.2%) injections. They were more common with infliximab than adalimumab (3.7% vs. 0.5%, P < 0.0001) and etanercept (3.7% vs. 0.25%, P < 0.0001). Complications were classified as mild 14/45 (31%), moderate 21/45 (47%), and severe 10/45 (22%), and occurred mainly in the first six months of treatment (56%) and after intravenous injections, especially (76%) in the first hour. CONCLUSION: Although rare, acute reactions can be severe, being observed more commonly after the initial injections, both intravenous and subcutaneous. More studies are necessary to define whether those immunobiological agents should be administered only in facilities capable of managing medical emergencies

Pesquisa de autoanticorpos em pacientes com artrite psoriásica sob terapia anti-TNF&#945; Autoantibodies in patients with psoriatic arthritis on anti-TNF&#945; therapy

INTRODUÇÃO: A terapia imunobiológica anti-TNF&#945; tem-se mostrado efetiva no tratamento de pacientes com artrite psoriásica (APs) refratária. No entanto, não está bem definido o risco de desenvolvimento de autoanticorpos comumente encontrados nas doenças reumatológicas em pacientes com APs na vigência desse tratamento. OBJETIVO: avaliar a indução de autoanticorpos específicos durante a terapia anti-TNF&#945; em pacientes com APs. PACIENTES E MÉTODOS: Foram analisadas amostras de soro de 23 pacientes com APs (mulheres: 61%, idade: 45,04 ± 12,68 anos, quadro poliarticular: 69,6%, duração da doença: 13,3 ± 7,7 anos, infliximabe: 82,60%) obtidas imediatamente antes (basal) e cerca de um ano após a introdução da terapia anti-TNF (última amostra) (385 ± 131,45 dias). A pesquisa incluiu a detecção de anticorpos antinucleares (ANA) e anticorpos para dsDNA (imunofluorescência indireta em células Hep-2 e em Crithidia luciliae, respectivamente); RNP e Sm (hemaglutinação passiva); Ro/SS-A e/ou La/SS-B, cromatina, histona, peptídeo citrulinado (CCP) e cardiolipina (ELISA). RESULTADOS: A pesquisa basal de ANA revelou positividade em 47,8% dos pacientes, com predomínio do padrão nuclear homogêneo (81,8%). Todas as amostras de soro testadas foram negativas para fator reumatoide e anticorpos anticardiolipina, RNP, Sm, Ro/SS-A, La/SS-B, histona e dsDNA, enquanto dois pacientes apresentaram positividade para anticromatina e um para anti-CCP. Todas as amostras de ANA positivas no tempo basal, exceto uma, mantiveram essa reatividade após a introdução da terapia anti-TNF. Reatividade "de novo" ANA foi observada em quatro dos pacientes originalmente negativos (33,3%). Anticorpos anti-Ro/SS-A, La/SS-B, cardiolipina, histona, dsDNA e fator reumatoide foram sistematicamente negativos em todas as amostras finais de soro testadas e positividade anticromatina foi detectada em outros três pacientes. CONCLUSÃO: Nossos achados mostram que a terapia anti-TNF induziu positividade ANA em um terço dos pacientes com APs e o uso concomitante de metotrexato não alterou esse achado. Além disso, todos os soros foram sistematicamente negativos para a maioria dos autoanticorpos específicos de doenças reumatológicas testados após a introdução da terapia biológica.INTRODUCTION: Anti-TNF&#945; therapy has been effective in the treatment of patients with refractory psoriatic arthritis (PSA). However, the risk of developing autoantibodies commonly found in rheumatic diseases in PSA patients undergoing this therapy is not clear. OBJECTIVE: To evaluate the induction of specific autoantibodies after anti-TNF&#945; therapy in PSA patients. PATIENTS AND METHODS: Serum samples from 23 PSA patients (women: 61%, age: 45.04 ± 12.68 years, polyarticular: 69.6%, disease duration: 13.3 ± 7.7 years, infliximab: 82.60%) obtained immediately before (baseline) and approximately one year after the introduction of anti-TNF therapy (last sample) (385 ± 131.45 days), were analyzed. The analysis included detection of antinuclear antibodies (ANA) and anti-dsDNA antibodies (indirect immunofluorescence on Hep-2 cells and Crithidia luciliae, respectively); anti-RNP and anti-Sm (passive hemagglutination); and anti-Ro/ SS-A and/or anti-La/SS-B, anti-chromatin, anti-histones, anti-citrullinated peptide (CCP), and anti-cardiolipin (ELISA) antibodies. RESULTS: At baseline, ANA was positive in 47.8% of patients, with predominance of homogeneous nuclear pattern (81.8%). All baseline serum samples were negative for rheumatoid factor and antibodies to cardiolipin, RNP, Sm, Ro/SS-A, anti-La/SS-B, anti-histone, and anti-dsDNA antibodies, while two patients were positive for anti-chromatin and one for anti-CCP. All ANA-positive samples at baseline, except for one, remained positive after the introduction of anti-TNF therapy; however, de novo ANA reactivity was observed in four originally negative patients (33.3%). Anti-Ro/SS-A, La/SS-B, cardiolipin, histones, dsDNA, and rheumatoid factor antibodies remained negative in all final serum samples tested, and anti-chromatin positivity was detected in three other patients. CONCLUSION: Our findings have shown that anti-TNF therapy induced ANA positivity in one third of PSA patients. The concomitant use of methotrexate did not interfere with this finding. In addition, all serum samples were systematically negative for specific rheumatic autoantibodies tested after the introduction of the biological treatment