Efecto del suero fetal bovino en producción y criotolerancia de embriones bovinos in vitro de novillas criollas ecuatorianas.

En los Andes ecuatorianos hay un biotipo bovino criollo cuya población está desapareciendo. La producción in vitro de embriones y la crioconservación es una biotecnología importante que permite la conservación de animales en peligro de extinción. El objetivo de este estudio fue determinar la producción in vitro y la crioconservación de embriones de novillas criollas criadas en las tierras altas de Ecuador. Los complejos de ovocitos y cúmulos inmaduros (COC) se recuperaron mediante recolección de óvulos de 10 novillas criollas (OPU) y de ovarios de matadero (control). El experimento se completó en 8 repeticiones. Los COC se cultivaron en un medio de maduración después de la FIV y el cultivo in vitro. Después de la denudación (día 1 después de la FIV), los supuestos embriones de cada fuente de ovocitos se dividieron en 2 grupos: con (FCS +) y sin (FCS-) FCS (2,5%), que se añadió el día 5 después de la FIV. En el día 7, se evaluaron los embriones y se vitrificaron los de calidad I. Después de calentar la reexpansión del embrión a las 2 h, se evaluó la reexpansión del embrión y la eclosión a las 24 y 48 h. Independientemente de la fuente de ovocitos, la adición de un 2,5% de FCS redujo la reexpansión del embrión a las 2 h y redujo la eclosión de los embriones a las 48 h en el grupo OPU. En conclusión, el FCS no mejoró la producción de embriones y afectó adversamente la criotolerancia de los embriones producidos in vitro a partir de novillas criollas ecuatorianas.In the Ecuadorian Andes there is a Creole bovine biotype whose population is disappearing. In vitro embryo production and cryopreservation is an important biotechnology that allows the conservation of animals threatened with extinction. The objective of this study was to determine the in vitro production and cryopreservation of embryos from creole heifers raised in the highlands of Ecuador. Immature cumulus-oocyte complexes (COC´s) were retrieved by ovum pickup from 10 Creole heifers (OPU) and from abattoir ovaries (control). The experiment was completed within 8 replicates. COC´s were cultured in a maturation medium following IVF and in vitro culture. After denudation (Day 1 after IVF), presumptive embryos from each oocyte source were split into 2 groups: with (FCS+) and without (FCS-) FCS (2,5%), which was added on day 5 after IVF. On day 7, embryos were evaluated, and those with quality I were vitrified. After warming embryo re-expansion at 2h and embryo re-expansion and hatching at 24 and 48h were evaluated. Regardless of the oocyte source, the addition of 2,5% FCS decreased embryo re-expansion at 2h and reduced embryo hatching at 48h in the OPU group. In conclusion, FCS did not improve embryo production and adversely affected the cryotolerance of embryos produced in vitro from Ecuadorian creole heifers.Nueva Orleans, Luisian

Estimación combinada de número alelos, heterocigosidad esperada y observada en microsatélites de bovinos mediante metaanálisis

El objetivo de este trabajo fue obtener por medio del metaanalisis las estimaciones combinadas del numero de alelos observadas, heterocigosidad esperada y heterocigosidad observada en estudios de microsatelites en bovinos criollos de America. Se utilizaron 34 resultados de trabajos cientificos para el metaanalisis, provenientes de diferentes rebanos de bovinos criollos de 11 paises de America publicados entre 2006 y 2017 y que utilizaron metodos de analisis de microsatelites y determinaron el numero de alelos NA; la heterocigosidad esperada HE y la heterocigosidad observada HO. El tamano de muestra vario entre 12 y 183 animales. Se obtuvieron las siguientes estimaciones de NAc, HEc y Hoc y sus errores estandar combinados respectivamente: 6,890±0,00157; 0,762± 0,0017 y 0,629 ±0,0016. No se encontraron diferencias al comparar los trabajos de las regiones de Norteamerica, Centroamerica y el Caribe y Suramerica, ni tampoco cuando se compararon los trabajos de Colombia con los de Ecuador. Las estimaciones combinadas del numero de alelos, la heterocigosidad esperada y la heterocigosidad observada en microsatelites estudiados en bovinos criollos de America al emplear metaanalisis permite disponer de informacion confiable y mas resumida para facilitar las comparaciones en los estudios del tema

Evaluación de la calidad de ovocitos provenientes de vaquillas criollas y ovarios de matadero para formar bancos de germoplasma

El bovino criollo americano descendiente del ganado ibérico, se adaptó fenotípica y genotípicamente a la región andina, generando biotipos que se caracterizan por rusticidad, eficiencia reproductiva y baja producción lechera, provocando la sustitución por otras razas de alta producción Holstein y Brown-Swiss. En términos biológicos, ocasiona pérdida importante del material genético, patrimonio del país, por esto se promueve la conservación de gametas y embriones mediante biotécnicas reproductivas creando bancos de germoplasma. El objetivo fue evaluar la calidad de ovocitos recuperados a partir de aspiración folicular transvaginal guiada por ultrasonografía (OPU) en ganado criollo y aspiración folicular en ovarios de matadero. Se emplearon 10 novillas criollas, cíclicas, condición corporal 3 a 3,5; en pastoreo con suministro de minerales; y 200 ovarios de matadero. Se recuperaron ovocitos por OPU y aspiración folicular, con agujas 18G, a 90mmHg de presión. Se clasificaron en tres categorías A, B, C. La morfometría se determinó con una cámara de alta definición colocada sobre un microscopio invertido con lente 10X y equipado con software AmScope V.3.7. La viabilidad se evaluó con azul tripán y la actividad enzimática con test de azul de cresilo brillante (BCB). El análisis estadístico utilizó la prueba de Chi-cuadrado y estadístico “U de Mann Withney” (P<0,05). En relación a la calidad de ovocitos, se observaron diferencias significativas según la procedencia (P<0,05), siendo mejores los obtenidos de ovarios de matadero. Mocha & Quezada (2017) obtuvieron ovocitos de mejor calidad por OPU con presión de 65mmHg, factor que probablemente incidió en la característica de las células recuperadas en nuestra investigación. La viabilidad y actividad enzimática de los ovocitos A y B de OPU y Camal no expresan diferencias significativas (P>0,05); se observó que las hembras bovinas criollas producen mayor porcentaje de ovocitos clase A capacitados para el desarrollo in vitro (82,9%) que de matadero (70,6%), diferencia explicable por el estado de los ovarios al momento de la colecta y tiempo transcurrido hasta la aspiración. Mota (2008) evaluó actividad enzimática mediante BCB en ovocitos de matadero y obtuvo 60,37% BCB (-) de respuesta a la prueba. Se concluye que los ovocitos recuperados de calidad A y B de ovarios de matadero por aspiración folicular representan un mayor porcentaje con relación a los A y B obtenidos por OPU. La viabilidad y actividad enzimática no muestra diferencia, siendo útiles para programas FIV y formación de bancos de germoplasma.Guayaqui

Efecto del benzoato de estradiol en el tamaño del folículo y cuerpo lúteo en vacas Holstein sincronizadas con D-cloroprostenol

The effect of two treatments, farms, and body shape on the size of the follicle and Corpus Luteum were evaluated. D-Cloprostenol (150 ug) was used in one of the treatments; in the other, D-Cloprostenol (150 ug) and Estradiol Ben-zoate (1 mg), were used. Two groups of 32 Holstein dairy cows each, from the Nero and Irquis farms in Cuenca, Ec-uador, were set up. Body condition (2.75-3.50) was considered. The calving number was 1-6; the farms, Irquis and Nero; and animal age, 3-10 years. Ultrasound scanning was used on days 0; 3 and 7, in order to measure the Luteum first, then the dominant ovarian follicle, and finally, the Corpus Luteum. Factor analysis of variance was performed. No significant differences were found for follicle size due to any factors; nor due to interaction. Concerning luteum, significant differences (P < 0.05) were observed for the treatments and for the farm. The values were 0.33 cm higher for the treatment with Benzoate, and 0.36 cm, at Irquis, in comparison to Nero. The treatment with Benzoate, along with better husbandry at Irquis played a critical role in the appearance and evolution of the luteum.The effect of two treatments, farms, and body shape on the size of the follicle and Corpus Luteum were evaluated. D-Cloprostenol (150 ug) was used in one of the treatments; in the other, D-Cloprostenol (150 ug) and Estradiol Ben-zoate (1 mg), were used. Two groups of 32 Holstein dairy cows each, from the Nero and Irquis farms in Cuenca, Ec-uador, were set up. Body condition (2.75-3.50) was considered. The calving number was 1-6; the farms, Irquis and Nero; and animal age, 3-10 years. Ultrasound scanning was used on days 0; 3 and 7, in order to measure the Luteum first, then the dominant ovarian follicle, and finally, the Corpus Luteum. Factor analysis of variance was performed. No significant differences were found for follicle size due to any factors; nor due to interaction. Concerning luteum, significant differences (P < 0.05) were observed for the treatments and for the farm. The values were 0.33 cm higher for the treatment with Benzoate, and 0.36 cm, at Irquis, in comparison to Nero. The treatment with Benzoate, along with better husbandry at Irquis played a critical role in the appearance and evolution of the luteum

La presencia de un cuerpo lúteo activo modifica la tasa de maduración pero no afecta la morfometría de los ovocitos bovinos

En la actualidad, la información publicada sobre la influencia que tiene un cuerpo lúteo activo o funcional sobre la capacidad de maduración y morfometría de los ovocitos bovinos presentan aún discrepancias. Se estableció como objetivo de investigación determinar el efecto de la presencia de un cuerpo lúteo activo sobre la tasa de maduración y la morfometría de ovocitos bovinos obtenidos de ovarios de matadero. El estudio se llevó a cabo en el Laboratorio de Biotecnología de la Reproducción Animal de la Universidad de Cuenca, Ecuador. Se colectaron ovarios con cuerpo lúteo activo o funcional (CCL; n=30) y sin estructura lútea alguna (SCL; n=60) del matadero municipal de la ciudad de Cuenca. Con una jeringa desechable y una aguja calibre 18x1.5 pulgadas se puncionaron todos los folículos antrales de 2-8mm de cada ovario. Posteriormente, del líquido folicular obtenido se recuperaron y seleccionaron los mejores complejos cúmulos ovocitos (Coc’s) de cada grupo de ovarios: CCL (n=242) y SCL (n=523), los cuales fueron incubados por 24hs en un medio de maduración a base de TCM199, suero fetal bovino, FSH-p, estradiol, piruvato de sodio, L-glutamina y gentamicina en una estufa con 5% de CO2, 38.5°C y 90%rh. Luego de madurados, los Coc´s fueron denudados por pipeteo en una solución de hialuronidasa 0.1% (p/v) e inmediatamente teñidos con Hoechst 33342 y observados en un microscopio de fluorescencia. Aquellos que habían expulsado el primer corpúsculo polar se consideraron maduros, y este resultado fue expresado en porcentaje. Consecutivamente los ovocitos fueron fotografiados con una cámara acoplada a un microscopio provisto con un software (AmScope V.3.7) calibrado para mediciones microscópicas, cuyas medidas fueron expresadas en micrómetros. Los resultados fueron analizados con el software estadístico SAS. Los Coc´s provenientes de ovarios CCL tuvieron un espesor estadísticamente similar que los de SCL (16,0±0,18 y 15,8±0,22 µm). Asimismo, en las dos categorías de ovarios (CCL y SCL) el diámetro (125,9±0,49 y 126,5±0,57 µm) y el volumen (1´060.254,6±12502,0 y 1´072.845,0±11748,3µm3) fue también similar. Sin embargo, la tasa de maduración fue mayor (P<0,0001) en los ovocitos provenientes de ovarios CCL que en los SCL (62,8 ± 1.3 y 47,3 ± 1.6%). Se concluye que los Coc´s que fueron recuperados de ovarios que tenían un cuerpo lúteo activo o funcional presentaron una mayor tasa de maduración, pero iguales características morfométricas.Guayaqui

Efecto de la presión de vacío sobre las características morfológicas de ovocitos bovinos obtenidos de ovarios de matadero

El efecto adverso de la presión de vacío sobre la competencia de los ovocitos recuperados mediante ovum pick up (OPU), y de los embriones obtenidos de estos, ha sido documentado previamente, pero poco se sabe sobre su efecto en las características morfológicas de los ovocitos. Se estableció como obejtivo del estudio evaluar el efecto de la presión de vacío sobre las características morfométricas de ovocitos bovinos recuperados de ovarios de matadero. El estudio se realizó en el Laboratorio de Biotecnología de la Reproducción Animal de la Universidad de Cuenca, Ecuador. Los ovarios recolectados (n=252) de un matadero local fueron divididos al azar de manera homogénea en tres grupos con diferente presión de aspiración folicular: 50, 65 y 80mmHg. Se aspiraron los folículos entre 2-8 mm de diámetro; para la punción se utilizó una aguja 18Gx1.5 pulgadas conectada a una bomba de vacío. Se recuperaron y seleccionaron los mejores COC´s (complejos cúmulos ovocito) de cada grupo: 50 (n=283), 65 (n=263) y 80 mmHg (n=226). Un 30% de cada grupo fueron colocados en un medio con hialuronidasa al 0,1% (p/v) y denudados por pipeteo sucesivo. Los ovocitos se fotografiaron con una cámara montada sobre un microscopio provisto con un software (AmScope V.3.7) calibrado para realizar mediciones microscópicas. El otro 70% de COC´s fueron incubados por 24hs en medio de maduración a base de TCM199, suero fetal bovino, FSH-p, estradiol, piruvato de sodio, L-glutamina y gentamicina en una estufa con 5% de CO2, 38.5°C y 90%rh. Luego de madurados, los COC´s fueron denudados y medidos como se indicó anteriormente. Los datos se analizaron con el programa estadístico SAS. Los ovocitos aspirados con 50mmHg antes de la maduración tuvieron un diámetro (sin zona pelúcida) y un volumen (125.8±0.5 µm y 1052327.9±11792.9 µm3) mayor que los obtenidos con 65 (123.3±0.5 µm y 990510.6±12603.9 µm3) o 80 mmHg (122.2±0.5 µm y 992296.4 ± 13652.9 µm3) (P<0,001). Luego de ser madurados, los ovocitos obtenidos con 50 mmHg tuvieron un diámetro y un volumen (121.9±0.6 µm y 954686.4±14072.2 µm3) mayor que los recuperados con 65 (120.1±0.6 µm y 913819.1±14879.8 µm3) (P<0,05), pero fueron similares a los obtenidos con 80 mmHg (121.4±0.7 µm y 945211.9±16359 µm3). Como conclusión, a mayor presión de vacío los ovocitos tendieron a ser más pequeños, es decir, tuvieron menor diametro y volumen. Asimismo, independientemente de la presión de aspiración, los ovocitos redujeron su diámetro y volumen como consecuancia de la maduración.Guayaqui

Assessment of two superovulation protocols for embryo production in Holstein cows

The aim of this paper was to compare the effects of two superovulation protocols: synchronization of the follicular wave (SFW), and natural estrus (NE) induction of embryos produced for transference in Holstein cows. Twenty cows were chosen as donors, with body condition (BC) of 2.75-3.5; 40-60 months old; 1-2 previous services per ges-tation, and without reproductive problems. Two superovulation protocols were applied: SFW and NE. SFW was not observed to produce more embryos than the NE in the blastocyst and morula stages

Morphometric and functional analysis of bovine oocytes obtained from abattoir ovaries and by transvaginal follicle aspiration in creole cows of the Ecuadorian Andean highland

El estudio analizó las características morfométricas y funcionales de ovocitos de 10 vacas nativas de los Andes ecuatorianos, colectados por aspiración folicular transvaginal (OPU) y de ovocitos colectados post mortem (PM) de ovarios de matadero. Para este propósito, 1157 complejos cúmulo-ovocito (CCOs) del grupo OPU (n=271) y PM (n=886) fueron recuperados en 10 repeticiones por grupo por aspiración folicular a 90 mm Hg de presión y clasificados en calidad A, B o C, de acuerdo con las características del citoplasma y células del cúmulo. Se determinó la actividad de la enzima glucosa 6 fosfato deshidrogenasa (G6PD) y la integridad de la membrana plasmática tiñendo dos grupos de CCOs con azul brillante de cresilo (BCB+) y azul de tripán, respectivamente. Se evaluó el tamaño (diámetro y volumen) de los ovocitos usando un software CaptaVision® (v. 5.1). Los datos se analizaron por regresión logística y por el modelo lineal general del SAS, y las medias se compararon por el método de los mínimos cuadrados. Los resultados mostraron que los ovocitos del grupo PM presentaron mayor diámetro (126.0±0.48 vs 122.7±0.79 μm; p<0.01) e integridad de la membrana plasmática (86.0 vs 76.8%; p<0.05) que el grupo OPU. Sin embargo, los ovocitos de calidad A y B no registraron diferencias significativas entre grupos con respecto a la integridad de la membrana plasmática y valores de BCB+. Los resultados sugieren que, a pesar de que el tamaño y la viabilidad fue más afectada en los ovocitos aspirados por OPU, los de calidad A y B provenientes de ambas fuentes mostraron valores similares con respecto a la integridad de la membrana plasmática y condición metabólica para proseguir la maduración.This study assessed the morphometric and functional characteristics of oocytes from 10 native cows to the Ecuadorian Andes, collected by transvaginal follicular aspiration (OPU) and oocytes collected post mortem (PM) from abattoir ovaries. For this purpose, 1157 cumulus-oocyte complexes (CCOs) of the OPU group (n=271) and PM group (n=886) were recovered in 10 repetitions per group by follicular aspiration at 90 mm Hg pressure and classified as A, B or C, according to the characteristics of the cytoplasm and cumulus cells. The activity of the enzyme glucose 6 phosphate dehydrogenase (G6PD) and the integrity of the plasma membrane was determined by staining two groups of CCOs with cresyl brilliant blue (BCB +) and trypan blue, respectively. The size (diameter and volume) of the oocytes was evaluated using CaptaVisio® software v. 5.1. The data were analysed by logistic regression and by the SAS general linear model, and the means were compared by the least square method. The results showed that the oocytes of the PM group had a larger diameter (126.0 ± 0.48 vs. 122.7 ± 0.79 μm; p<0.01) and integrity of the plasma membrane (86.0 vs. 76.8%; p<0.05) than the OPU group. However, quality A and B oocytes did not show significant differences between groups with respect to plasma membrane integrity and BCB + values. The results suggest that, although the fact that the size and viability were more affected in the oocytes aspirated by OPU, those of quality A and B from both sources showed similar values regarding the integrity of the plasma membrane and metabolic condition to continue maturation

El cuerpo luteo afecta la capacidad de desarrollo y la produccion de embriones bovinos

Este estudio se realizó con el objetivo de determinar el efecto del cuerpo lúteo bovino en la producción de embriones in vitro. Los complejos de ovocitos y cúmulos inmaduros (AOC) fueron aspirados de ovarios de matadero de vacas con (ipsilateral; CL +) y sin (contralateral; CL-) cuerpo amarillo (CL), y de vacas sin CL en cualquiera de los ovarios. El experimento se completó en 12 repeticiones (100 ovarios por grupo). Los AOC se cultivaron en medio de maduración (TCM-199 complementado con 10% de suero bovino fetal, 100 µg / ml de piruvato de sodio, 0,75 mg / ml de L-glutamina, 4 µg / ml de FSH-p, cisteamina 2 µM y 250 µg / ml de gentamicina ) seguido de fertilización in vitro (medio fluido hepiducal sintético oviductal suplementado con 10 µg / ml de heparina) y cultivo in vitro (medio fluido citrato sintético oviductal). El día 7 después de la fertilización in vitro, los embriones se evaluaron y clasificaron en mórulas (M), blastocistos tempranos (EB), blastocistos (B), blastocistos expandidos (ExB) y blastocistos eclosionados (HB), y se registraron los embriones con mejor calidad. . Los datos se analizaron mediante regresión logística y modelo lineal general del SAS, y las medias se compararon mediante el método de medias de mínimos cuadrados. Los resultados de la escisión, la tasa de embriones en el día 7 y las tasas de M + EB, B, ExB y HB se muestran en la Tabla 1. El número de embriones por ovario fue mayor (P <0.01) en CL + (1.16 ± 0.11) que en CL- (0.45 ± 0.15) y C (0.55 ± 0.15). Además, el número de embriones por ovocito cultivado fue significativamente mayor en CL + que en CL- y C (0.27 ± 0.02 vs 0.14 ± 0.03 y 0.15 ± 0.03 respectivamente, P <0.01). Los resultados de este estudio revelan que la presencia del cuerpo lúteo en el ovario en el momento de la recuperación de los ovocitos afecta la capacidad de desarrollo de los embriones bovinos, y tal influencia probablemente se produce a través de interacciones intraováricas.This study was conducted with the aim to determine the effect of bovine corpus luteum on in vitro embryo production. Immature cumulus–oocyte complexes (COCs) were aspirated from abattoir ovaries from cows with (ipsilateral; CL+) and without (contralateral; CL-) corpus luteum (CL), and from cows without CL in any of the ovaries. The experiment was completed within 12 replicates (100 ovaries per group). COCs were cultured in maturation medium (TCM-199 supplemented with 10% fetal bovine serum, 100 µg/ml sodium pyruvate, 0.75 mg/ml L-glutamine, 4 µg/ml FSH-p, 2 µM cysteamine and 250 µg/ml gentamicin) followed by in vitro fertilization (hepes synthetic oviductal fluid medium supplemented with 10 µg/ml heparin) and in vitro culture (citrate synthetic oviductal fluid medium). On day 7 after in vitro fertilization the embryos were evaluated and classified into morulae (M), early blastocysts (EB), blastocysts (B), expanded blastocysts (ExB) and hatched blastocysts (HB), and the embryos with better quality were recorded. Data were analyzed by logistic regression and general linear model of the SAS, and means compared by least-squares means method. Results of cleavage, embryo rate at day 7, and rates of M + EB, B, ExB and HB are shown in Table 1. The number of embryos per ovary was greater (P < 0.01) in CL+ (1.16 ± 0.11) than in CL- (0.45 ± 0.15) and C (0.55 ± 0.15). Also, the number of embryos per cultured oocyte was significantly greater in CL + than in CL- and C (0.27 ± 0.02 vs 0.14 ± 0.03 and 0.15 ± 0.03 respectively, P < 0.01). The results of this study reveal that the presence of the corpus luteum in the ovary at the time of the oocytes recovery affects the developmental capacity of the bovine embryos, and such influence probably occur through intraovarian interactions.New Orlean

Adición de fluido folicular en la maduración de ovocitos de cerdas prepúberes

La producción in vitro de embriones en los porcinos y otras especies de interés zootécnico es indispensable para el desarrollo productivo e investigativo. Diariamente se faenan cientos de cerdos en el camal municipal de Cuenca, Ecuador; donde sería posible rescatar material genético (complejos cúmulos ovocitos; Coc´s) valioso si se recuperan los ovarios de las cerdas; sin embargo, estos animales son beneficiados antes de la pubertad (<5 meses de edad) en cuyo caso la maduración de los Coc´s es deficiente. Se estableció como objetivo del estudio determinar el efecto del fluido folicular porcino (FFP) en maduración de Coc´s de cerdas prepúberes. Se obtuvieron ovarios (n=30) de cerdas faenadas en el camal municipal de Cuenca, los cuales fueron transportados al Laboratorio de Biotecnología de la Reproducción Animal de la Universidad de Cuenca, Ecuador. Inmediatamente se puncionaron los folículos antrales de 2-8mm con una aguja 18x1.5 pulgadas acoplada a una jeringa. El líquido folicular resultante fue filtrado para posteriormente realizar la búsqueda y recuperación de los Coc´s. Adicionalmente, se recuperó FFP, que fue centrifugado a 2000g x 20 minutos, esterilizado por doble filtración con filtros de jeringa estériles de 0.22µm y congelado hasta su uso. Para la maduración, los Coc´s de excelente y buena calidad (n=245) se dividieron aleatoriamente en tres grupos a los que se adicion diferentes porcentajes de FFP: 0% (n=79) ,10% (n=94) y 20%(n=72). Los Coc´s fueron incubados por 48hs en medio de maduración compuesto por TCM199, suero fetal bovino, FSH-p, HCG, piruvato de sodio, L-glutamina, gentamicina y FFP en una estufa con 5% de CO2, 38.5°C y 90%rh. Luego de madurados, los Coc´s fueron denudados por pipeteo en una solución dehialuronidasa 0.1% (p/v), inmediatamente teñidos conHoechst 33342 y observados en un microscopio de fluorescencia. Aquellos que presentaron la expulsión del corpúsculo polar fueron consideraron maduros y el resultado se expresó en porcentaje. Se aplicó un análisis de varianza (ANOVA) seguido de un test de Tukey. El grupo de Coc´s que no fue suplementado con FFP (0%) tuvo menor tasa de maduración (21,33+1,4 %) que los grupos suplementados con 10 (51,53+3,4%) y 20 % (52,93+5,7%) (P<0.05). Se concluye que, irrespectivamente del porcentaje adicionado el FFP fue necesario para mejorar la maduración de Coc´s de cerdas prepúberesLa producción in vitro de embriones en los porcinos y otras especies de interés zootécnico es indispensable para el desarrollo productivo e investigativo. Diariamente se faenan cientos de cerdos en el camal municipal de Cuenca, Ecuador; donde sería posible rescatar material genético (complejos cúmulos ovocitos; Coc´s) valioso si se recuperan los ovarios de las cerdas; sin embargo, estos animales son beneficiados antes de la pubertad (<5 meses de edad) en cuyo caso la maduración de los Coc´s es deficiente. Se estableció como objetivo del estudio determinar el efecto del fluido folicular porcino (FFP) en maduración de Coc´s de cerdas prepúberes. Se obtuvieron ovarios (n=30) de cerdas faenadas en el camal municipal de Cuenca, los cuales fueron transportados al Laboratorio de Biotecnología de la Reproducción Animal de la Universidad de Cuenca, Ecuador. Inmediatamente se puncionaron los folículos antrales de 2-8mm con una aguja 18x1.5 pulgadas acoplada a una jeringa. El líquido folicular resultante fue filtrado para posteriormente realizar la búsqueda y recuperación de los Coc´s. Adicionalmente, se recuperó FFP, que fue centrifugado a 2000g x 20 minutos, esterilizado por doble filtración con filtros de jeringa estériles de 0.22µm y congelado hasta su uso. Para la maduración, los Coc´s de excelente y buena calidad (n=245) se dividieron aleatoriamente en tres grupos a los que se adicion diferentes porcentajes de FFP: 0% (n=79) ,10% (n=94) y 20%(n=72). Los Coc´s fueron incubados por 48hs en medio de maduración compuesto por TCM199, suero fetal bovino, FSH-p, HCG, piruvato de sodio, L-glutamina, gentamicina y FFP en una estufa con 5% de CO2, 38.5°C y 90%rh. Luego de madurados, los Coc´s fueron denudados por pipeteo en una solución dehialuronidasa 0.1% (p/v), inmediatamente teñidos conHoechst 33342 y observados en un microscopio de fluorescencia. Aquellos que presentaron la expulsión del corpúsculo polar fueron consideraron maduros y el resultado se expresó en porcentaje. Se aplicó un análisis de varianza (ANOVA) seguido de un test de Tukey. El grupo de Coc´s que no fue suplementado con FFP (0%) tuvo menor tasa de maduración (21,33+1,4 %) que los grupos suplementados con 10 (51,53+3,4%) y 20 % (52,93+5,7%) (P<0.05). Se concluye que, irrespectivamente del porcentaje adicionado el FFP fue necesario para mejorar la maduración de Coc´s de cerdas prepúberesGuayaqui