Software educativo de rehabilitación con tecnología asistencial enfocado en la comunicación y lenguaje (RTA-CL) especializado en trastornos asociados a retos múltiples.

152 p.Durante años Chile ha modificado su política respecto a las personas discapacitadas, se han acortado las brechas sociales y en consecuencia dichas personas poco a poco se han integrado a la comunidad, pasando a ser una prioridad y no una molestia. Dentro del grupo de personas con capacidades especiales se encuentra el subgrupo denominados “Retos Múltiples”, dicha discapacidad es muy compleja ya que las personas afectadas manifiestan más de una limitante en su funcionamiento [5]. El número de personas afectadas por algún tipo de alteración en sus capacidades físicas, mentales o visuales alcanza el 12.9% de los habitantes según los resultados que arrojó el estudio realizado por el INE y FONADIS 2004-2005 [3]. Considerando los datos obtenidos, se usaron las herramientas informáticas para el desarrollo de un software que de alguna manera ayudase a las personas discapacitadas con Retos Múltiples, el cual tiene por objetivo generar la comunicación. Derecho que a la mayoría de estas personas la naturaleza se los ha negado y la amplia familia de la informática se los devolverá como se explica en el marco teórico y desarrollo del proyecto. Al ser revisadas las necesidades de estas personas se pensó en el desarrollo de una herramienta de software especializada en Retos Múltiples enfocada en el desarrollo de la comunicación verbal y del lenguaje. Una de sus principales característica es que su configuración sea intuitiva, además de contener un conjunto de imágenes y audios para seleccionar las secuencias de estudio. RTA-CL se comunica a través de imágenes que están asociadas a sonidos característicos los cuales se desplegaran al momento que la persona con retos múltiples pueda acceder a ella, generando de esta manera una comunicación artificial. Para lograr un uso más extenso de RTA-CL se incorporaron el código Brille y el Lenguaje de señas, además de las vocales, diccionario y un diccionario ilustrado. Visto lo anterior se dará paso al cuerpo del proyecto./ABSTRACT:For years Chile has changed its policy towards disabled people have shortened the social gaps and consequently these people gradually integrated into the community, becoming a priority, not a nuisance. Within the group of people with special needs is the subgroup called "Multiple Challenges", the disability is complex and affected people appear more of a limiting its operation [5].The number of people affected by any alteration in their physical, mental or visual capacity reaches 12.9% of the population according to the study results yielded by the INE and FONADIS 2004-2005 [3].Considering the data, the tools for developing software that somehow assist the disabled with Multiple Challenges, which aims to generate communication were used. Law that most of these people nature has denied them and the extended family of computing the return as explained in the theoretical framework and Project Being reviewed the needs of these people thought of developing a software tool specialized in Multiple Challenges focused on the development of verbal communication and language. One of their main characteristic is that its configuration is intuitive, and contain a set of images and audios to select sequences of study. RTA-CL communicates through images that are associated with characteristic sounds which are deployed when a person with multiple challenges can access it, thereby generating an artificial communication. For a more extensive use of the RTA-LC Brille code and sign language, in addition to voice, dictionary and illustrated dictionary is incorporated.Given the above step will be to project body

Propuesta de modelo de trabajo para el uso de la sala de prototipado del centro de negocios SERCOTEC de la provincia de Curicó

65 p.El objetivo de este estudio es proponer un modelo de gestión para el uso de los espacios colaborativos que el Centro de Negocios Sercotec de Curicó (CNS Curicó) dispone para sus asesorados. Actualmente, el CNS cuenta, dentro de su infraestructura, de dos espacios colaborativos, para los cuales es necesario implementar la gestión de su uso. Para ello, se analizaron espacios colaborativos exitosos en diversos países. Se destacan dos casos: Fab Lab León, de España y AMROC Fab Lab de Estados Unidos. Se evalúa su forma de funcionamiento, publico objetivo, tipo de equipamiento, infraestructura, entro otros factores. En base a la información estudiada, se realizó una propuesta de modelo de trabajo, donde se definió el objetivo, el capital humano, talleres de capacitación para las tecnologías disponibles y procedimientos para el uso de los espacios colaborativos. Esta propuesta de trabajo busca posicionar al centro de negocios de Curicó como un referente para el demás centro de negocio del país, en cuanto al uso de los espacios colaborativos por parte de las Pymes, de manera que los demás centros puedan replicar el modelo trabajo con las particularidades de los territorios en los que desarrollan las actividades. // ABSTRACT: The aim of this study is to propose a management model for the use of collaborative spaces that the Sercotec Business Center in Curicó (CNS Curicó, according to its name in Spanish, Centro de Negocios Sercotec) has available for its clients. At present, CNS Curicó has two collaborative spaces within its facility, for which it is necessary to manage their use. This study highlights two cases: Fab Lab León in Spain and AMROC Fab Lab in the United States, whose mode of operation, target group, type of equipment and infrastructure, among other factors, are evaluated. Based on the studied information, a working model proposal was created. In this proposal, the objective, human capital, training workshops for the available technologies and procedures for the use of collaborative spaces were defined. Regarding the use of collaborative spaces by SMEs, this work proposal aims to position CNS Curicó as a reference for other business centers in Chile. Thus, other centers can replicate the working model according to the distinctive features of the territories in which their activities take place

Estudio estructural y funcional de glutation S-transferasa 3 de V. vinifera (VvGST3) como transportador de flavonoides.

114 p.Glutation S-Transferasa (GST) es una superfamilia de proteínas presentes en eucariontes y procariontes, involucradas en el metabolismo primario y secundario, detoxificación de compuestos xenobióticos y defensa ante patógenos. Se dividen en diez grupos de acuerdo a su porcentaje de identidad de secuencia, de los cuales dos, denominados tau y phi, participan en el transporte de flavonoides desde el retículo endoplasmático hasta el tonoplasto de vacuolas para su depósito. Dentro de ellas, la proteína TT19 de Arabidopsis y varias de sus homólogas, como AN9 en petunia, BZ2 en maíz, VvGST4 y VvGST1 en vid, se involucran en el transporte de antocianinas. Se ha evidenciado que TT19 además participa en el transporte de PAs.En esta memoria, la proteína VvGST3 fue estructural y funcionalmente caracterizada. El modelo estructural de calidad presentó dos sitios de unión a flavonoides, afines a antocianinas y/o PAs, similares a los de TT19. Uno de estos sitios se estructura por los aminoácidos F10, A11, S12, V52, V53, E65, E66, H107, D111 e I115 y el otro por A175, D176, E185, K191, W194, D195, S198, S199, W203, K204 y F207, entre otros. Además, se evaluó el papel del aminoácido W203, mediante la mutación Trp203Leu. Este resultó ser fundamental para mantener la afinidad por PAs, tal como ha sido reportado experimentalmente en TT19. Funcionalmente, se evaluaron los niveles de transcritos del gen VvGST3 en distintos tejidos y etapas de desarrollo de la baya de vid. El gen presentó una expresión significativa en semillas, correlacionado con los periodos, lugares de síntesis y acumulación de PAs en frutos. Finalmente, se evaluó la capacidad de VvGST3, para complementar el fenotipo del mutante tt19-1 de A. thaliana, mostrando su participación en el transporte de PAs en semillas./ ABSTRACT: Glutathione S-transferase (GST) is a superfamily of proteins in prokaryotes and eukaryotes, involved in primary and secondary metabolism, detoxification of xenobiotics and defense against pathogens. They are divided into ten groups according to their percent identity, two of which, called tau and phi, are involved in the transport of flavonoids from the ER to the tonoplast of vacuoles for his deposit. Among them, the Arabidopsis TT19 protein and several of its counterparts, as AN9 in petunia, maize BZ2, VvGST4 and VvGST1 on vine, are involved in the anthocyanins transport. While TT19 also had been shown to be involved in the Pas transport. Herein, the protein VvGST3 was structurally and functionally characterized. The structural model presented two flavonoids binding sites, related to anthocyanins and/or PAs, similar to the TT19. The amino acids, present in both, were: F10, A11, S12, V52, V53, E65, E66, H107, D111 and I115, and the other: A175, D176, E185, K191, W194, D195, S198, S199, W203, K204 and F207, respectively. Moreover, the role of the amino acid W203 was evaluated through of Trp203Leu mutation. This proved to be critical for maintaining affinity for PAs, as has been reported experimentally in TT19. Functionally, the levels of transcripts of the VvGST3 gene were evaluated in different grape tissues and developmental stages. The gene expression was significantly seeds correlated with periods and sites of synthesis and accumulation of PAs in fruit. Finally, the capacity of VvGST3 was evaluated, to complement the mutant phenotype tt19-1from A. thaliana, showing their participation in the PAs transport in seeds

Modelamiento molecular de la conexina CX46 para identificar sitios de unión a CA²+ y a lípidos.

103 p.Las conexinas corresponden a una familia de proteínas transmembranales. Seis subunidades de conexinas forman un canal iónico llamado “hemicanal” el cual es capaz de comunicar el citoplasma con el medio extracelular. Facilitando el intercambio de iones y moléculas pequeñas (< 1-2 kDa) entre el interior de las células y el espacio extracelular. La regulación de la apertura de los hemicanales, está determinada por la presencia de cationes divalentes (Ca²+) en el medio extracelular, como es el caso del hemicanal de Cx46 que se expresa en las células del cristalino. La Cx46 participa en el mantenimiento de la homeostasis del calcio intracelular y su falta provoca la aparición de cataratas. Por otra parte, estudios han demostrado que el ácido linoleico en bajas concentraciones (0,1 μM) aumenta las corrientes de los hemicanales formados por la Cx46, mientras que a concentraciones altas (100 μM) inhibe la función del canal. Dado que se desconoce cómo funciona la regulación de la Cx46 mediada por Ca²+ extracelular y por lípidos, se pretende estudiar su estructura y así determinar los sitios de unión a estos ligandos. Para ello se realizó un modelo comparativo de Cx46. Se utilizó un servidor web que buscan los aminoácidos de la proteína, con los cuales el Ca²+ pueda interactuar favorablemente. Además se analizaron en una simulación de dinámica molecular (DM) cómo el Ca²+ se une y/o permea el hemicanal de Cx46. Para estudiar la unión a ácido linoléico se realizó un acoplamiento molecular y a continuación una simulación molecular de DM, para ver cómo interactúa el complejo proteína-ligando. Se logró obtener los posibles sitios de unión a Ca²+ y ácido linoleico en la estructura de la Cx46, mediante los métodos anteriormente mencionados, donde el Ca²+ interactúa con bucles extracelulares de la Cx46 y el AL con segmentos transmembrana de este. Palabras claves: Conexina 46, ácido linoleico, Ca²+, cataratas./ABSTRACT:Connexins are a family of transmembrane proteins. Six subunits of connexins make a ionic channel called “hemichannel” which enable the communication of the cytoplasm with the extracellular medium. Facilitates the exchange of ions and small molecules (<1.2 kDa) between the inside of cells and the extracellular space. The regulation of the opening of hemichannels is determined by extracellular divalent cations (Ca²+), like the connexin 46 (Cx46) that is expressed in cells of the lens. Cx46 is involved in maintaining calcium homeostasis and its absence make activation of cataracts. Moreover, studies have shown that linoleic acid in low concentrations (0,1 μM) increases the hemichannel voltage formed by Cx46, whereas at high concentration (100 μM) inhibits the channel function. Because it is known how it provokes the regulation of Cx46 mediated by extracellular Ca2+ and by lipids, we need to study its structure to determine the putative binding sites for these ligands. To this was performed a comparative Cx46 model. We used web servers that search possible amino acids of the protein which could interact with Ca²+ favorably. Also was analyzed in a molecular dynamics simulation (DM) how the Ca²+ binds and/or permeates the hemichannel of Cx46. The study for linoleic acid binding, we perform a docking molecular and then a DM simulation for see how interact the protein-ligand complex.We obtain the putative Ca²+ and linoleic acid binding sites in the structure of Cx46, using the above methods, where Ca²+ interacts with the extracellular loops of Cx46 and AL with transmembrane segments of this.Keywords: Connexin 46, linoleic acid, Ca²+, cataracts

Generación de plantas transgénicas de Arabidopsis thaliana con el gen codificante de un inhibidor de tripsina tipo Kunitz (PdKTI3), asociado a tolerancia a exceso de cobre en álamos

72 p.El cobre es uno de los metales pesados más abundantes en Chile, el cual a su vez es considerado contaminante del medio ambiente. Por otro lado, también este es uno de los micronutrientes esenciales de las plantas, y que en exceso puede producir efectos biológicos negativos. La fitorremediación es el proceso de limpieza de terrenos contaminados mediante el uso de plantas y organismos asociados. Esta tecnología implica establecer vegetales en lugares con contaminantes, para remover o evitar su dispersión. Las plantas útiles para estos propósitos deben ser tolerantes al exceso de metales pesados. En estudios previos se demostró que álamos (Populus deltoides), especies candidatas para fitorremediación de metales pesados, expresan significativamente un gen que codifica un inhibidor de tripsina tipo Kunitz (PdKTI3) cuando son expuestas a estrés por exceso de cobre. Sin embargo, su función no es conocida. Para evaluar su rol como factor de tolerancia al exceso de dicho metal, el uso de modelos de estudio, como Arabidopsis thaliana, son importantes. Por este motivo, esta memoria tuvo como objetivo principal la transformación de dicha especie con el gen PdKTI3. Para ello se usó plantas de Arabidopsis thaliana sensibles a cobre, las cuales fueron transformadas con un vector de expresión que portaba el gen PdKTI3, mediante el método de transformación de inmersión floral (floral dip), mediado por Agrobacterium tumefaciens. El vector (pENTR+PdKTI3+pK7WGF2) fue elaborado en dos etapas mediante el sistema Gateway Cloning (Invitrogen). En la primera se produjo el vector de entrada (pENTR+PdKTI3). En la segunda, el vector de entrada fue fusionado a un vector de destinación (pK7WGF2), permitiendo la obtención del vector de expresión completo. Luego, dicho vector fue utilizado para transformar Agrobacterium tumefaciens por shock térmico, el cual fue usado en la producción de plantas de Arabidopsis thaliana transgénicas a través del método de inmersión floral. La aplicación del método de inmersión floral permitió la obtención de plantas de Arabidopsis thaliana transformadas genéticamente. Por lo que la presencia del gen PdKTI3, en el ADN de las plantas transformadas, fue confirmada. Lo que lleva a concluir que se cumplió el objetivo de este estudio y las plantas transgénicas obtenidas representan una plataforma de trabajo importante para estudios posteriores, tendientes a evaluar el rol del gen PdKTI3 en la respuesta defensiva de las plantas frente al estrés por cobre y su utilidad para sistemas de fitorremediación. /ABSTRACT:Copper is one of the most abundant heavy metals in Chile, which in turn is considered environmental pollutant. On the other hand, this also is an essential micronutrient for plants, which in excess can produce adverse biological effects. Phytoremediation is the process of cleaning up contaminated land by using plants and associated organisms. This technology involves establishing plants in places with contaminants, to remove or prevent its spread. Useful plants for this purpose must be tolerant of excess heavy metals. Previous studies showed that poplar (Populus deltoides), candidate for phytoremediation of heavy metals, significantly express a gene encoding a Kunitz trypsin inhibitor (PdKTI3) when exposed to excess copper stress. However, their function is not known. To assess your role as a factor of tolerance excess of said metal, the use of study models, such as Arabidopsis thaliana, is important. For this reason, this report's main objective was the transformation of the species with PdKTI3 gene. To do Arabidopsis thaliana plants sensitive to copper was used, which they were transformed with an expression vector carrying the gene PdKTI3 by the transformation method floral dip (floral dip) mediated by Agrobacterium tumefaciens. The vector (pENTR+pK7WGF2+PdKTI3) was prepared in two steps by the Gateway Cloning system (Invitrogen). At first there was the input vector (pENTR+PdKTI3). In the second, the input vector was fused to a destination vector (pK7WGF2), allowing obtaining full expression vector. Then he said vector was used to transform Agrobacterium tumefaciens by thermal shock, which was used in the production of transgenic Arabidopsis thaliana plants through floral dip method. Applying the floral dip method allowed the obtention of plants genetically transformed Arabidopsis thaliana. So the presence of PdKTI3 gene in DNA from the transformed plants, was confirmed. What leads to the conclusion that the objective of this study and transgenic plants obtained represent an important platform for further work, aimed at assessing the role of PdKTI3 gene in the plant defense response to stress studies fulfilled copper and useful in phytoremediation systems

Estudio de migracion de sondas solvatocromicas en un sistema micelar, mediante Simulacion de Dinamica Molecular

48 p.Cálculos de dinámica molecular fueron utilizadas para simular sistemas constituidos de una betaína solvatocrómica en una solución acuosa de un copolímero de tipo A-BA (“poloxámero”) formado por bloques de polietillenoxi (PEO) y polipropilenoxi (PPO), de fórmula (PEO)11-(PPO)16-(PEO)11 (Stuart y col., 2009). Tres betaínas fueron estudiadas en presencia de este copolímero, la N-metil-2,4-difenil-6-(4- oxifenil)piridinio (1a), la N-octil-2,4-difenil-6-(4- oxifenil)piridinio (1b) y la N-(3,5-difenil- 4-oxi)fenil-2,4,6-trifenilpiridinio (ET(30) de Reichardt) (2). Los resultados teóricos fueron comparados con el comportamiento espectral de estos compuestos solvatocrómicos en presencia de algunos poloxámeros. La diferencia en la respuesta espectral del par de betaínas 1a-b se había racionalizado en base a los diferentes grados de inserción de estas sondas dentro del núcleo hidrofóbico micelar. Esta interpretación fue ratificada por los resultados de las simulaciones teóricas, las cuales demostraron que las sondas con un nivel mayor de lipofilia penetran más profundamente dentro de la cavidad hidrofóbica de la micela con respecto a las sondas con un nivel menor de lipofília. En lo que se refiere a la betaína de Reichardt, evidencias espectrales habían sugerido la existencia de dos microambientes distintos para esta sonda, uno originado de la interacción de 2 con unímeros aislados en solución, y el otro correspondiendo al interior más hidrofóbico de la micela formada por varios unímeros (Anexo 10.2). La simulación de estos sistemas permitió definir más claramente estos ambientes y estimar el grado de solvatación acuosa de 2 dentro de la micela polimérica./ ABSTRACT: Molecular dynamics calculations were employed to mimic systems comprising an aqueous solution of a solvatochromic betaine in the presence of a copolymer of the type A-B-A ( “poloxamers”), formed of a polyethyleneoxy (PEO) and a polypropyleneoxy (PPO) block, with the formula (PEO)11-(PPO)16-(PEO)11 (Stuart et al.,2009). Three betaines were studied in the presence of this copolymer, the N-methyl- 2,4-diphenyl-6-(4-oxyphenyl)pyridinium (1a), the N-octyl-2,4- diphenyl-6-(4- oxyphenyl)pyridinium (1b) and the N-(3,5-diphenyl-4-oxyphenyl)- ,4,6- triphenylpyridinium (Reichardt’s ET(30) dye ) (2). The theoretical results were compared with the spectral behaviour of these solvatochromic compounds in the presence of some poloxamers. The differences in the spectral responses of the betaine pair 1a-b had been rationalized as arising from the different degrees of insertion of these probes inside the hydrophobic micellar nucleus. This interpretation found support in the results of the theoretical simulations, which showed that the probe with the greater lipophilicity was more deeply buried inside the hydrophobic cavity of the micelle than that with a smaller lipophilicity. As for Reichardt’s betaine, spectral evidences had suggested the existence of two different microenvironments for this probe, one originating from the interaction of 2 with isolated unimers in solution, and the other corresponding to the more hydrophobic micellar core, formed by aggregation of several unimers (Anexo 10.2). The simulation of these systems yielded a clearer picture of these environments, and allowed the estimation of the aqueous solvation of 2 inside the polymeric micelle

Efectos estructurales y energéticos de residuos críticos (Y671 Y K639) en la capacidad de transportar iones en el poro del canal receptor de potencial transitorio vaniloide tipo 1 (TRPV1)

87 p.El canal receptor de potencial transitorio vaniloide tipo 1 (TRPV1), es un integrador molecular de estímulos físicos y químicos en nociceptores periféricos.Este canal se destaca por participar en la percepción del dolor y la hipersensibilidad térmica durante procesos que involucran inflamación, por lo que es considerado un potencial blanco terapéutico para el desarrollo de fármacos anestésicos. Dentro de la estructura de TRPV1 han sido identificadas varias regiones y aminoácidos involucrados en funciones específicas del canal. De modo que, datos experimentales han mostrado que la mutación del residuo Tyr671 en el poro de TRPV1, por aminoácidos con propiedades fisicoquímicas diferentes altera la permeabilidad iónica del canal y su capacidad de desensibilización. A su vez, la neutralización del residuo K639 aumenta la inhibición por protones. Por lo que, mediante la utilización de metodologías bioinformáticas se analizó los efectos estructurales y energéticos que generan mutaciones en los residuos Y671 y K639. A partir de los resultados obtenidos, se logró establecer que las variaciones producidas en la conductancia de TRPV1, son el resultado principalmente de cambios en el potencial electrostático del poro, más que a la generación de barreras estéricas que afecte el paso de los iones./ABSTRACT: The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1) channel is a molecular integrator of physical and chemical stimuli in peripheral nociceptors. This channel is characterized by participating in pain perception and thermal hypersensitivity during processes involving inflammation, therefore it is considered a potential target for the development of anesthetic drugs.Within the structure of TRPV1 have been identified several regions and amino acids involved in specific functions of the channel, so as experimental data have shown that mutation of Tyr671 residue on TRPV1 pore, by amino acids with different physicochemical properties, alters the permeability to ions of the channel and its desensitization capacity. In turn, the K639 residue neutralization increases the inhibition by protons. Therefore, the structural and energetic effects residues were analized using bioinformatics methodologies by mutations in Y671 and K639. Based on the results obtained, it was possible to establish that variations produced in the conductance of TRPV1, occur mainly from changes in electrostatic potential of the pore, instead of steric barrier that affects the passage of ions

Estudio de las interacciones con NADP y NAD en 6-fosfogluconato deshidrogenasa de Escherichia coli mediante dinámica molecular de las formas silvestre y mutantes.

61 p.La rama oxidativa de la vía de las pentosas-fosfato, es una de las principales fuentes de producción de NADPH en bacterias heterotróficas. La 6-fosfogluconato deshidrogenasa (6PGDH), es la tercera enzima de la rama oxidativa y cataliza la oxidación del 6-fosfogluconato, para formar ribulosa-5-fosfato, a través de la reducción del NAD(P) y la formación de CO2. En Escherichia coli esta enzima es específica por NADP. El objetivo del proyecto es entender las causas estructurales de la fuerte preferencia de la 6PGDH de Escherichia coli (Ec6PGDH) por NADP y proponer mutaciones puntuales de la enzima, que incrementarían la afinidad por NAD y desfavorezcan la interacción por NADP. A través de simulaciones moleculares, se estudiaron las interacciones de NADP y NAD con Ec6PGDH. En estos sistemas se cuantificaron los puentes de hidrógeno entre la proteína y el cofactor. El análisis de los cambios estructurales (a través del cálculo de la función RMSD) y el cálculo de la energía total del sistema también se realizó sobre estos sistemas Así mismo se realizó un alineamiento múltiple para caracterizar las relaciones filogenéticas de la familia de la Ec6PGDH, e identificar homólogos lejanos con diferentes especificidades por el cofactor. Por medio del análisis de módulos centrípetos de Ec6PGDH, se identificará el módulo que contiene los residuos responsables de unión a cofactor, y su secuencia será comparada con un homólogo lejano que una a NAD. Como proyección de los resultados de esta tesis, distintas mutaciones podrán ser usadas en estudios in vitro, a fin de encontrar variantes específicas por NAD. Estas mutantes serán relevantes en estudios fisiológicos para alterar el balance de la producción de equivalentes de reducción, como una estrategia de ingeniería metabólica./ABSTRACT:The oxidative branch of the pentose-phosphate pathway is one of the major sources of NADPH in heterotrophic bacteria. The 6-phosphogluconate dehydrogenase (6PGDH) is the third enzyme of the pathway and catalyzes the reaction of 6-phosphogluconate oxidation to form ribulose-5-phosphate and CO2 along with NAD(P) reduction. In Escherichia coli this enzyme is NADP specific.The main goal of this work is to understand the structural basis of the strong preference of 6PGDH from Escherichia coli (Ec6PGDH) for NADP, allowing the proposition of point enzyme mutations that would increase the NADP affinity, and disfavoring NADP interaction.Through molecular simulations, we studied the NAD and NADP interactions with Ec6PGDH. In these systems the hydrogen bonds between the protein and the cofactor were quantified. The analysis of the structural changes (according to the RMSD function) and the calculation of total system energy also were performed on these systems Likewise, a multiple sequence alignment was performed to characterize the phylogenetic relationships of the Ec6PGDH family, and identify distant homologues with different cofactor specificities. By using the centripetal distance function over Ec6PGDH structure, we identified the module that contains the residues responsible in directly binding the cofactor. The sequence of the corresponding modules in 6PGDHs showing different cofactor specificities is compared. As a future projection of this thesis, the mutations here proposed will be used in the search for NAD-specific variants, by in vitro studies. These mutants will be relevant in physiological studies to alter the balance of the production of reducing equivalents, as well as metabolic engineering tool

Estudio fisiológico y molecular del rol de etileno y aba durante la maduración de la papaya cultivada en Chile (Vasconcellea pubescens

79 p.La papaya de montaña (Vasconcellea pubescens) es una especie exótica, perteneciente a la familia Caricaceae y nativa de las regiones andinas de América del Sur, introducida en Chile hace más de 50 años, cultivándose en zonas costeras y protegidas de heladas. El fruto de V. pubescens posee atractivas características organolépticas y nutricionales, como un agradable sabor y aroma, además de su gran contenido de vitaminas y antioxidantes. La producción del fruto es más bien artesanal y el tiempo de postcosecha es reducido (7 a 9 días), implicando perdidas sustanciales y provocando un impacto económico para los productores de fruta fresca y elaborada, como es en su presentación en conserva, mermelada, miel y zumo. En este contexto y con el objetivo de mejorar nuestro entendimiento del proceso de ablandamiento del fruto de papaya de montaña se procedió a realizar un seguimiento de los cambios que ocurren durante su maduración.Los resultados confirman la naturaleza climatérica del fruto y su rápido ablandamiento, que incide en su corta vida de postcosecha. Además tanto la aplicación de etileno, como ABA adelantaron y/o aumentaron la tasa de ablandamiento del fruto. Por el contrario, las muestras tratadas con 1.MCP y Fluridona mostraron un retraso en el ablandamiento, lo que siguiere en conjunto que existen componentes regulados por estas dos hormonas durante la maduración de la papaya de montaña Con el propósito de esclarecer a nivel genético-molecular los mecanismos que subyacen al ablandamientos del fruto, se realizó la identificación a gran escala de genes que estén involucrados en el ablandamiento del fruto, debido a que es una de las características fisiológicas que más afecta la calidad del fruto. Para lo cual a partir de los resultados del año 1 del proyecto FONDECYT N°11100481, los cuales consistieron en la obtención del transcriptoma del proceso de maduración, con especial énfasis en el ablandamiento de la papaya de montaña, mediante la técnica de pirosecuenciación 454, se obtuvo una compleja lista de ESTs, de los cuales fueron seleccionados algunos genes candidatos de acuerdo a la evidencia experimental en otros frutos de su acción VIII en el ablandamiento, como es la especie modelo de maduración Solanum lycopersicum. Como resultado del análisis de verificación de la anotación funcional de las secuencias estudiadas se logró seleccionar un grupo de genes asociados al ablandamiento del fruto de papaya de montaña. Finalmente, se procedió al diseño de partidores de qPCR, lo cual permitirá validar experimentalmente los resultados de genómica funcional. Esta información podrá ser utilizada en el diseño de estrategias para aumentar atributos de calidad, costos asociados y disminución de pérdidas asociados al proceso de ablandamiento del fruto de papaya de montaña. Palabras claves: Papaya de montaña, Vasconcellea ubescens,ablandamiento/ABSTRACT: pubescens, mountain papaya (Vasconcellea pubescens) is an exotic species,belonging to the family Caricaceae and native to Andean regions of South America, introduced in Chile over 50 years ago, cultivated in coastal areas and protected from frost. The fruPalabrasit of V. pubescens has attractive organoleptic and nutritional characteristics, as a pleasant taste and aroma, in addition to its high content of vitamins and antioxidants. The fruit production is more artisanal and postharvest time is reduced (7-9 days), implying substantial losses and causing economic impact for producers of fresh and processed fruit, as in canned presentation, jam, honey and juice. In this context and in order to improve our understanding of the process of softening of mountain papaya fruit proceeded to track the changes that occur during ripening. The results confirm the nature climacteric fruit and its rapid softening, which affects its short postharvest life. Furthermore both application of ethylene, as ABA forward and / or increased rate of fruit softening. By contrast, samples treated with Fluridone 1.MCP and showed a delay in softening, which follows ther existing components together these two hormones regulated during maturation of the mountain papaya In order to elucidate the molecular-genetic level mechanisms underlying the softening of the fruit, was performed on a large scale identification of genes that are involved in fruit softening, because it is one of the physiological characteristics that affects the fruit quality. To which after one year results of the project FONDECYT No. 11,100,481, which consisted in obtaining the transcriptome of the maturation process, with special emphasis on the softening of mountain papaya, using the 454 pyrosequencing technique, complex yielded a list of ESTs, of which some candidate genes were selected according to the experimental evidence in other fruits of his action in softening, as is the species Solanum lycopersicum maturity model. As a result of verification testing functional annotation of the sequences studied were able to select a group of genes associated with papaya fruit softening mountain. Finally, we proceeded to design qPCR primers, allowing experimentally validate the results of functional genomics. This information may be used in the design of strategies to enhance quality attributes associated costs and reduce losses associated with the process of softening of mountain papaya fruit. Keywords: Mountain Papaya, Vasconcellea pubescens, softening

Estudio de la vía de ingreso de hierro en ferritina de Chlorobium tepidum

74 p.El hierro es un metal de importancia en muchos procesos bioquímicos de la célula. Las ferritinas (Ftns) pertenecen a una familia de proteínas que almacenan hierro, compuesta por 24 subunidades que forman una cáscara esférica con una cavidad interna donde se almacena el hierro. La estructura de la subunidad consiste en un ordenamiento cerrado de 4 alfa hélices, con una quinta alfa hélice corta en el extremo carboxilo terminal. La cavidad interna se conecta con el exterior por medio de canales de simetría “Three-fold” y “Four-fold”. Chlorobium tepidum, es un organismo de interés que podría ser útil en la síntesis de nanomateriales. Sin embargo, estudios previos indican que su capacidad de almacenamiento de hierro es menor. Ferritina de Chlorobium tepidum (CtFtn) posee ciertas diferencias en comparación a Ftns de otros organismos, las que se especula podrían afectar su capacidad de almacenamiento. Posee un extremo Cterminal más extenso, el cual se piensa se proyecta hacia el interior de la cavidad, afectando el espacio disponible para almacenar hierro. Estudios anteriores indican que ferritina mutante de C. tepidum, la cual carece del extremo C-terminal y posee además la mutación Ala19Tyr incorporada, presenta un comportamiento similar al del tipo silvestre. Se especula que además de la cola C-terminal es posible que el Threefol Channel no permita el ingreso de hierro hacia el interior de la proteína. A partir de lo anterior, se realizaron nuevas mutaciones en el Three-fol Channel de la CtFtn mutada, Leu109Glu y Phe117Arg. Los efectos de estas nuevas mutaciones fueron analizadas de forma teórica y experimental. Para profundizar el análisis, se estudiaron las propiedades del Three-fol Channel en otras dos ferritinas, PfFtn (Ferritina de Pyrococcus furiosus ) y LhFtn, cadena L de ferritina humana. Los resultados muestran diferencias en el Three-fol Channel de las distintas ferritinas. Los resultados teóricos obtenidos en CtFtn con los nuevos residuos incorporados, muestran que el ingreso de hierro por el Three-fol Channel no es favorable, lo que se contrapone con los resultados obtenidos de manera experimental, lo que permite sugerir que existe otra vía para el ingreso de hierro en CtFtn. Palabras Claves: Hierro, Ferritinas, CtFtn, Three-fol Channel, PfFtn, LhFtn/ABSTRACT: Iron is a metal of importance in many biochemical processes of the cell. Ferritins (Ftns) belong to a family of proteins that store iron, consisting of 24 subunits forming a spherical shell with an internal cavity which stores iron. Subunit structure consists of a closed arrangement of four alpha helices, with fifth short alpha helix at the carboxy terminus. The internal cavity is connected with the outside via channels of symmetry "Three-fold" and "Four-fold". Chlorobium tepidum is an organism of interest that could be useful in the synthesis of nanomaterials. However, previous studies indicate that the storage capacity of iron is lower. Chlorobium tepidum ferritin (CtFtn) has some differences compared to Ftns from other organisms, it is speculated that could affect its storage capacity. Possesses a long C-terminal region, which is thought projecting into the cavity, affecting the space available for storing iron. Previous studies indicate that ferritin mutant of C. tepidum, which lacks the C-terminal end and also has incorporated the mutation Ala19Tyr presents a behavior similar to the wild type. It is speculated that in addition to the C-terminal tail is possible that the Three-fold Channel does not allow the entry of iron into the protein. From the foregoing, there were new mutations in the Three-fold Channel of the CtFtn mutated Leu109Glu and Phe117Arg. The effects of these new mutations were analyzed theoretically and experimentally. For further analysis, we studied the properties of the fol-Channel Three two ferritins, PfFtn (Pyrococcus furiosus ferritin) and LhFtn, human ferritin L chain. The results show differences in the fol-Channel Three different ferritins. The theoretical results obtained with the new residue CtFtn incorporated, show that the entry of iron by the Three-fold Channel is not favorable, which contrasts with results obtained experimentally, which allows us to suggest that there is another avenue for iron entry CtFtn