Dysregulated Expression of Phosphorylated Epidermal Growth Factor Receptor and Phosphatase and Tensin Homologue in Canine Cutaneous Papillomas and Squamous Cell Carcinomas

The molecular mechanisms contributing to the development of cutaneous papillomas (CPs) and cutaneous squamous cell carcinomas (CSCCs) are still poorly understood, limiting the ability to identify molecular suitable targets for the development of novel therapies. Persistent activation of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt/mammalian target of rapamycin (PI3K/Akt/mTOR) signalling pathway is a component of epidermal carcinogenesis in dogs. The present study describes the immunohistochemical expression pattern of two key regulatory molecules involved in the PI3K/Akt/mTOR signalling pathway, phosphorylated epidermal growth factor receptor (pEGFR)Tyr1068 and phosphatase and tensin homologue (PTEN), in samples of normal canine epidermis, CP, preneoplastic epidermis and CSCC using tissue microarrays to determine whether the deregulated activity of these molecules is involved in the pathogenesis of these relevant epidermal tumours of dogs. Expression of pEGFR and PTEN was dysregulated in most samples of CP, preneoplastic epidermis and CSCC. Overexpression of pEGFR, together with decreased expression of PTEN, may facilitate the progression of some canine CPs and CSCCs by deregulation of the key cellular functions in which the PI3K/Akt/mTOR signalling pathway is involved. These findings suggest that the PI3K/Akt/mTOR signalling molecules may be potential therapeutic targets for canine patients with CP and CSCC.Fil: Sanz Ressel, Berenice Liyare. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Massone, Adriana Raquel. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Barbeito, Claudio Gustavo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentin

Autoimmune skin disease in dogs. Retrospective study

Se investigaron muestras de piel de caninos con diagnóstico de enfermedad autoinmune ingresadas entre los años 2004 y 2016 al Laboratorio de Patología Especial Veterinaria (FCV, La Plata, Argentina). Los objetivos fueron identificar casos de caninos con lesiones cutáneas y seleccionar aquéllos con diagnóstico de enfermedad autoinmune. También se propuso relacionar las dermatosis autoinmunes con la raza, edad, sexo, el tipo y la ubicación anatómica de las lesiones clínicas y, por ultimo, describir las diferentes lesiones histopatológicas que caracterizaron cada afección. Las enfermedades autoinmunes representaron el 2,07% del total de casos ingresados en el período de estudio, siendo las más frecuentes el pénfigo foliáceo y el lupus eritematoso discoide. Los caninos de raza pura fueron más afectados que los mestizos, siendo la región dorsal de la nariz la ubicación anatómica de mayor presentación (35,3%). Entre los hallazgos histopatológicos más reiterados se observaron pústulas (54,1%), áreas de separación dermoepidérmica (45,9%) y espongiosis (44,7%). Si bien el porcentaje de caninos con dermatosis autoinmunes es bajo, es importante incluirlas dentro de los diagnósticos diferenciales de las enfermedades que cursan con pústulas, pápulas, vesículas e infiltrado inflamatorio en la unión dermoepidérmica.A retrospective study of canine skin samples diagnosed with autoimmune disease, admitted by the Veterinary Special Pathology Laboratory, was conducted between 2004 and 2016. Purposes of the study were to identify canine cases of skin lesions and to select those with a diagnosis of autoimmune disease. Autoimmune skin diseases were related to race, age, sex, type and anatomical location of the clinical lesions and, finally, different histopathological lesions characterizing each disease. Autoimmune diseases accounted for 2.07% of the total number of cases admitted in the study period, the most frequent being pemphigus foliaceus and discoid lupus erythematosus. The purebred dogs were more affected than the mixed animals, being the anatomical location of greater presentation the dorsal region of the nose (35.3%). Among the most frequent histopathological findings were pustules (54.1%), areas of dermo-epidermal separation (45.9%) and spongiosis (44.7%). Although the percentage of canines with autoimmune dermatosis is low, it is important to include differential diagnoses of the diseases that occur with pustules, papules, vesicles and inflammatory infiltrate in the dermoepidermal junction. Histopathology is a useful and accessible tool in that allows to diagnose these diseases.Facultad de Ciencias Veterinaria

Expresión del principal efector de la vía de señalización Hippo en los papilomas cutáneos caninos

Introducción: Los papilomas cutáneos (PC) son neoplasias epidérmicas comunes en los caninos generalmente asociadas a la infección por el virus del papiloma canino. Si bien la mayoría de los PC tienen un comportamiento benigno y sufren regresión espontánea, las lesiones múltiples o la falta de regresión pueden causar problemas graves en algunos pacientes. Entre las moléculas cuya actividad está desregulada durante el proceso de tumorigénesis, a partir de diferentes modelos murinos se demostró que la activación persistente de YAP, el principal efector de la vía de señalización del Hippo, tiene un papel central en el desarrollo y progresión de los PC. En el presente estudio se evaluó el patrón de expresión por inmunohistoquímica (IHQ) de YAP en 36 muestras caninas de PC mediante el uso de una micromatriz de tejidos (MMT). Materiales y Métodos: Se recuperaron los bloques de tejidos fijados en formalina e incluidos en parafina correspondientes a PC caninos (n=41) de los archivos del Laboratorio de Patología Especial Veterinaria, FCV, UNLP (periodo 2006-2014). Sobre cada una de las secciones coloreadas con hematoxilina y eosina (H-E), correspondiente a cada muestra, se realizó la marcación de las áreas de tejido de interés para la posterior construcción de la MMT utilizando un marcador indeleble bajo observación microscópica. El método utilizado en la construcción de la MMT fue el descripto por Hewitt (2004), utilizando un arrayer de tejido semiautomático (TM Arrayer TM, Pathology Devices, Inc.) y un diámetro de núcleo de 1 mm. Una vez finalizada la MMT, se obtuvieron secciones de 5 μm que fueron coloreadas con H-E para evaluar la calidad de la MMT; solo 5/41 de los núcleos de PC debieron ser excluidos análisis posteriores debido a su daño o pérdida durante el procesamiento. Posteriormente, se obtuvieron nuevas secciones de 5 μm para IHC, la cual se realizó utilizando un anticuerpo primario contra YAP (YAP, rabbit polyclonal antibody, diluido 1:200; Cell Signaling Technologies). Para el revelado se utilizó un anticuerpo secundario biotinilado, el complejo de avidina-biotina y como cromógeno 3,3´-diaminobenzidina. Todas las secciones se escanearon a 40x usando el Aperio CS ScanScope (Leica Biosystems Imaging Inc.) y se cuantificaron usando los algoritmos de análisis de imágenes disponibles en el software ImageScope (Leica Biosystems Imaging Inc.). Las diferencias en la reactividad inmunohistoquímica entre los PC y los controles de piel canina normal se analizó mediante la prueba de Kruskall-Wallis para poblaciones no gaussianas (ANOVA no paramétrico) seguida de la prueba posterior de Dunn (software Statgraphics, con un valor de P < 0,05 y una confianza del 95%). Resultados: La evaluación IHQ reveló un elevado número de células epidérmicas positivas para YAP en 31/36 (86%) muestras de PC. La inmunotinción de YAP mostró una expresión citoplasmática y, ocasionalmente, nuclear localizada en los estratos de células basales y espinosas. Un hallazgo interesante fue que la mayoría de las células con una expresión intensa de YAP eran queratinocitos con la presencia de efectos citopáticos compatibles con la infección por papilomavirus canino. Cuando el porcentaje de células positivas cuantificados en los casos de PC se evaluó frente a los controles de epidermis normal, la prueba de Kruskall-Wallis mostró diferencias significativas para la expresión de YAP (<0.0001). Discusión y conclusiones: Los resultados demuestran que la expresión de YAP se encuentra aumentada en los PC caninos. Estos hallazgos sugieren que la actividad desregulada de la vía de señalización Hippo representa uno de los eventos clave en la patogenia de los PC en los pacientes caninos, similar a lo previamente informado en ratones. Estos hallazgos señalan a la proteína YAP como un posible objetivo molecular para el desarrollo de nuevas terapias para los pacientes caninos con PC.Fil: Sanz Ressel, Berenice Liyare. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Massone, Adriana Raquel. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Patología. Laboratorio de Patología Especial Veterinaria "Dr. Bernardo Epstein"; ArgentinaFil: Barbeito, Claudio Gustavo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaJornadas VeterinariasBuenos AiresArgentinaInter-médic

La expresión reducida de PTEN contribuye con la progresión de los carcinomas de células escamosas cutáneos caninos mediante la activación de la vía mTOR

Introducción y objetivos: El carcinoma de células escamosas cutáneo (CCEC) es uno de los tumores malignos más frecuentes de la piel de los caninos. El estudio de los mecanismos moleculares desregulados en estas neoplasias puede proporcionar dianas terapéuticas adecuadas para el desarrollo de nuevas terapias para los pacientes caninos con CCEC. Recientemente hemos demostrado que la activación persistente de la vía de señalización fosfatidilinositol3-quinasa/Akt/objetivo de la rapamicina en mamíferos (PI3K/Akt/mTOR) es un evento frecuente en la progresión de los CCEC caninos. La actividad aumentada de la vía de señalización de PI3K/Akt/mTOR puede resultar de la regulación negativa de la expresión de la proteína supresora de tumores PTEN, el principal regulador de esta vía de señalización, como se sugirió previamente en humanos. En este sentido, el estudio de las moléculas relevantes en un gran número de muestras tumorales de diferentes pacientes en condiciones técnicas idénticas y estandarizadas puede ayudar a identificar los eventos moleculares clave involucrados en el desarrollo y progresión de los CCEC caninos, para lo cual puede utilizarse la técnica de micromatrices de tejidos incluidos en parafina (MMT). Por lo tanto, en el presente trabajo se determinó el patrón de expresión por inmunohistoquímica (IHQ) de PTEN y su relación con la activación de la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR mediante la detección IHQ de pS6Ser235/236 en 140 muestras de CCEC caninos mediante el uso de micromatrices de tejidos. Materiales y Métodos: Los bloques de tejidos fijados en formalina e incluidos en parafina correspondientes a CCEC de caninos (n=150) fueron recuperados de los archivos del Laboratorio de Patología Especial Veterinaria Dr. Bernardo Epstein, FCV, UNLP. Sobre las secciones teñidas con hematoxilina y eosina (H-E) correspondiente a cada muestra, se realizó la marcación de las áreas de tejido de interés para la posterior construcción de las MMT. El método utilizado para la construcción de las MMT fue el descripto por Hewitt (2004), utilizando un arrayer de tejido semiautomático (TM Arrayer TM, Pathology Devices, Inc.) y un diámetro de núcleo de 1 mm. Una vez finalizadas las MMT, se obtuvieron secciones de 5 μm que fueron coloreadas con H-E para evaluar la calidad de las MMT; solo 10/150 de los CCEC incluidos en las MMT fueron excluidos de análisis posteriores debido a su daño o pérdida durante el procesamiento. Posteriormente, se obtuvieron nuevas secciones de 5 μm para IHC, la cual se realizó utilizando anticuerpos primarios contra PTEN (PTEN; Biocare Medical) y pS6Ser235/236 (S6 fosforilado en Ser235/236; Cell Signaling Technologies). Para el revelado se utilizaron anticuerpos secundarios biotinilados y el complejo de avidina-biotina o fosfatasa alcalina, utilizando como cromógenos 3,3´-diaminobenzidina o Warp Red, respectivamente. Las secciones se escanearon a 40x usando el Aperio CS ScanScope (Leica Biosystems Imaging Inc.) y se cuantificaron usando los algoritmos de análisis de imágenes disponibles en el software ImageScope (Leica Biosystems Imaging Inc.). Las diferencias en la reactividad inmunohistoquímica entre los CCEC y los controles de piel canina normal se analizó mediante la prueba de Kruskall-Wallis para poblaciones no gaussianas (ANOVA no paramétrico) seguida de la prueba posterior de Dunn (software Statgraphics, con un valor de P < 0,05 y una confianza del 95%). Resultados: La inmunomarcación de PTEN mostró una tinción citoplasmática y, ocasionalmente, nuclear limitada a las células de los estratos basal y espinoso en 110/140 (79,29%) de los CCEC. Asimismo, se observó que todos los CCEC que evidenciaron una expresión reducida o ausente de PTEN (27/30; 90%) mostraron la activación persistente de la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR, determinada por la inmunodetección de pS6Ser235/236. Cuando el porcentaje de células positivas cuantificados en los casos de CCEC se evaluó frente a los controles de piel normal, la prueba de Kruskall-Wallis mostró diferencias significativas para PTEN (P < 0.01). Discusión y conclusiones: Los resultados demuestran que la actividad de PTEN, la principal molécula implicada en la regulación de la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR, se encuentra desregulada durante el proceso de carcinogénesis epidérmica en algunos pacientes caninos, similar a lo informado previamente en carcinomas de células escamosas de cabeza y cuello humanos. En este contexto, la disminución de la expresión de PTEN puede facilitar la progresión de los CCEC caninos mediante la activación persistente de la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR y, en consecuencia, la desregulación de las funciones celulares clave en las que está implicada esta vía. Estos hallazgos proporcionan información valiosa que señala a esta vía de señalización como un potencial objetivo terapéutico para el desarrollo de nuevas terapias para pacientes caninos con CCEC.Fil: Sanz Ressel, Berenice Liyare. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Massone, Adriana Raquel. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Patología. Laboratorio de Patología Especial Veterinaria "Dr. Bernardo Epstein"; ArgentinaFil: Barbeito, Claudio Gustavo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaJornadas Veterinarias 2019Buenos AiresArgentinaInter-médic

Potencial implicancia terapéutica de la expresión desregulada de YAP en los carcinomas de células escamosas cutáneos caninos

Introducción y objetivos: El carcinoma de células escamosas cutáneo (CCEC) es uno de los tumores malignos más frecuentes de la piel de los caninos. El estudio de las moléculas de señalización desreguladas durante el proceso de carcinogénesis epidérmica puede ayudar a identificar objetivos moleculares adecuados para el desarrollo de nuevas terapias para pacientes caninos. La evidencia reciente sugiere que la expresión desregulada de YAP, el principal efector de la vía de señalización Hippo, está involucrada en el desarrollo y la progresión de los CCEC en humanos. Por otra parte, para realizar un aporte de relevancia clínica en oncología es necesario que las moléculas sean evaluadas en un gran número de muestras tumorales de diferentes pacientes en condiciones idénticas y estandarizadas, para lo cual puede utilizarse la técnica de micromatrices de tejidos incluidos en parafina (MMT). En el presente estudio se describe el patrón de expresión inmunohistoquímico de YAP en muestras caninas de epidermis normal (EN), epidermis preneoplásica (EP) y CCEC, utilizando MMT. Materiales y Métodos: Se recuperaron los bloques de tejidos fijados en formalina e incluidos en parafina correspondientes a EN (n=17), EP (n=12) y CCEC (n=150) caninos de los archivos del Laboratorio de Patología Especial Veterinaria, FCV, UNLP (periodo 2006-2014). Sobre cada una de las secciones coloreadas con hematoxilina y eosina (H-E), correspondiente a cada muestra, se realizó la marcación de las áreas de tejido de interés para la posterior construcción de las MMT utilizando un marcador indeleble bajo observación microscópica. El método utilizado en la construcción de las MMT fue el descripto por Hewitt (2004), utilizando un arrayer de tejido semiautomático (TM Arrayer TM, Pathology Devices, Inc.) y un diámetro de núcleo de 1 mm. Una vez finalizadas las MMT, se obtuvieron secciones de 5 μm que fueron coloreadas con H-E para evaluar la calidad de las MMT; solo 2/17 de los núcleos de EN, 2/12 de los núcleos de EP y 10/150 de los núcleos de CCEC debieron ser excluidos análisis posteriores debido a su daño o pérdida durante el procesamiento. Posteriormente, se obtuvieron nuevas secciones de 5 μm para IHC, la cual se realizó utilizando un anticuerpo primario contra YAP (YAP, rabbit polyclonal antibody, diluido 1:200; Cell Signaling Technologies). Para el revelado se utilizó un anticuerpo secundario biotinilado, el complejo de avidina-biotina y como cromógeno 3,3´-diaminobenzidina. Todas las secciones se escanearon a 40x usando el Aperio CS ScanScope (Leica Biosystems Imaging Inc.) y se cuantificaron usando los algoritmos de análisis de imágenes disponibles en el software ImageScope (Leica Biosystems Imaging Inc.). Las diferencias en la reactividad inmunohistoquímica entre los diferentes grupos se analizó mediante la prueba de Kruskall-Wallis para poblaciones no gaussianas (ANOVA no paramétrico) seguida de la prueba posterior de Dunn (software Statgraphics, con un valor de P < 0,05 y una confianza del 95%). Resultados: En la EN se observó un número bajo de células epidérmicas positivas para YAP con una expresión limitada al citoplasma de unas pocas células del estrato granuloso. En 10/10 (100%) de las muestras de EP y 114/140 (81.42%) de las muestras de CCEC se observó un elevado número de células epidérmicas positivas para YAP. La inmunotinción de YAP mostró una expresión citoplasmática y ocasionalmente nuclear localizada en los estratos de células basales y espinosas tanto en la EP como en los CCEC. Además, en los CCEC se observó que la expresión de YAP fue más notable a lo largo de los bordes invasivos de la neoplasia. En concordancia con el hecho de que YAP mostró una mayor reactividad a favor de EP y CCEC, la prueba de Kruskall-Wallis mostró diferencias significativas en el porcentaje de células positivas para YAP entre las muestras de EN y EP (P <0.0001), así como también entre EN y CCEC (<0.0001). Discusión y conclusiones: Los resultados demuestran que la activación en forma persistente de YAP es un evento frecuente durante la progresión de los CCEC en caninos. En este contexto, la expresión desregulada de YAP puede representar uno de los eventos clave durante la carcinogénesis epidérmica al desregular las funciones celulares en las que está implicada la vía de señalización Hippo, similar a lo previamente informado en humanos. Estos hallazgos proporcionan información valiosa que señala a la proteína YAP como un potencial objetivo terapéutico, por lo que la investigación dirigida a modular esta vía de señalización para el beneficio terapéutico de los pacientes con CSCC caninos puede progresar de manera razonada.Fil: Sanz Ressel, Berenice Liyare. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Massone, Adriana Raquel. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Patología. Laboratorio de Patología Especial Veterinaria "Dr. Bernardo Epstein"; ArgentinaFil: Barbeito, Claudio Gustavo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaJornadas VeterinariasBuenos AiresArgentinaInter-médic

Localized nodular tenosynovitis: a case description

Se describe una afección dolorosa localizada en la zona del carpo del miembro torácico izquierdo. Con características físicas peculiares, habiéndose llegado al diagnóstico definitivo mediante estudios complementarios, siendo el histopatológico el que determino que se trataba de una tenosinovitis nodular localizada (TNL) de los tendones de los músculos extensor carpo radial y flexor digital común.It describes a painful affection localized on the area of the carpus of the left forelimb with peculiar physical characteristics, having arrived to a definite diagnosis through out to the complementary studies being the histopathologic which determined that it was a localized nodular tenosynovitis on the tendons of the extensor radial carpus and common digital flexor muscles.Facultad de Ciencias Veterinaria

Update on autoimmune dermatoses in canines characterized by pustules, vesicles and blisters: anatomopathology and diagnosis

El objetivo de la presente revisión fue realizar una actualización sobre los aspectos clínicos, histopatológicos y patogenia de las dermatosis autoinmunes que afectan a los caninos y que se caracterizan por pústulas, vesículas y ampollas como lesión primaria. Se consideran los aspectos clínicos y las características histopatológicas de las enfermedades que componen el complejo pénfigo y las enfermedades ampollares subepidérmicas autoinmunes. Además, se describen las técnicas inmunológicas utilizadas en el diagnóstico y la caracterización de este grupo de enfermedades.The aim of this revision was to update the clinical, histopathological and pathogenic aspects of autoimmune dermatoses that affect canines and that are characterized by pustules, vesicles and blisters as the primary lesion. The clinical aspects and the histopathological features of the diseases that are part of the pemphigus complex and the autoimmune subepidermal bullous diseases are considered. In addition, immunological techniques used in the diagnosis and characterization of this group of diseases are described.Facultad de Ciencias Veterinaria

Equine arteritis virus gP5 protein induces apoptosis in cultured insect cells

Equine Arteritis Virus (EAV) has been shown to induce apoptosis in vitro but the induction of this mechanism has not been previously associated with any viral gene product. In this work, we found a cytotoxicity effect of the EAV gP5 protein on baculovirus-insect cells and a low yield of protein recovery. Besides, different morphological features by electron transmission microscopy, DNA fragmentation in agarose gel, TUNEL analysis and caspase 3 activity were found. All these findings indicate that the EAV gP5 protein induces apoptosis in insect cells.Instituto de Genética VeterinariaFacultad de Ciencias Veterinaria

High metastatic potential melanoma in a three-year-old bitch

El objetivo de este trabajo es presentar un caso de un melanoma con altísimo potencial metastásico en una perra Rottweiler de tres años. La exploración clínica reveló un nódulo de 1,5 cm en un labio vulvar con linfadenomegalia inguinal superficial ipsilateral y otro nódulo similar en la encía. Se realizó el diagnóstico citológico de melanoma. Las radiografías de tórax revelaron imágenes pulmonares compatibles con metástasis. Se practicó la eutanasia. En la necropsia se observaron nódulos negros, firmes, desde 2 milímetros hasta varios centímetros de diámetro, de localización múltiple, comprometiendo la mayor parte de los órganos. Se formuló un diagnóstico histopatológico de melanoma maligno de tipo celular mixto. Resulta llamativa la edad de presentación en este caso al igual que la agresividad de su comportamiento.The aim of this report is to present a case of a highly metastatic melanoma in a three-year-old Rottweiler bitch. Physical examination revealed a 1.5 cm round gingival and similar vulvar nodules and superficial inguinal lymphadenomegaly. Melanoma was first diagnosed on cytological examination. Thoracic radiographies revealed pulmonary metastasis. The dog was euthanatized and black, firm nodules from 2 mm to several centimetres were observed in most organs at necropsy. Mixed cell type malignant melanoma was diagnosed by histopathology. The early age of presentation and the aggressive behaviour of the tumor were the unusual features in this report.Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV

High metastatic potential melanoma in a three-year-old bitch

El objetivo de este trabajo es presentar un caso de un melanoma con altísimo potencial metastásico en una perra Rottweiler de tres años. La exploración clínica reveló un nódulo de 1,5 cm en un labio vulvar con linfadenomegalia inguinal superficial ipsilateral y otro nódulo similar en la encía. Se realizó el diagnóstico citológico de melanoma. Las radiografías de tórax revelaron imágenes pulmonares compatibles con metástasis. Se practicó la eutanasia. En la necropsia se observaron nódulos negros, firmes, desde 2 milímetros hasta varios centímetros de diámetro, de localización múltiple, comprometiendo la mayor parte de los órganos. Se formuló un diagnóstico histopatológico de melanoma maligno de tipo celular mixto. Resulta llamativa la edad de presentación en este caso al igual que la agresividad de su comportamiento.The aim of this report is to present a case of a highly metastatic melanoma in a three-year-old Rottweiler bitch. Physical examination revealed a 1.5 cm round gingival and similar vulvar nodules and superficial inguinal lymphadenomegaly. Melanoma was first diagnosed on cytological examination. Thoracic radiographies revealed pulmonary metastasis. The dog was euthanatized and black, firm nodules from 2 mm to several centimetres were observed in most organs at necropsy. Mixed cell type malignant melanoma was diagnosed by histopathology. The early age of presentation and the aggressive behaviour of the tumor were the unusual features in this report.Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV