Sobrevivência em solo e detecção de co-transformantes de Trichoderma harzianum por PCR "nested"

The objective of this work was to evaluate the survival of two Trichoderma harzianum cotransformants, TE 10 and TE 41, carrying genes for green fluorescent protein (egfp) and for resistance to benomyl, during four weeks in a contained soil microcosm. Selective culture media were used to detect viable fungal material, whose identity was confirmed by the observation of the fluorescent phenotype by direct epifluorence microscopy. PCR using two nested primer pairs specific to the egfp gene was also used to detect the transformed fungi. Although it was not possible to reliably detect the egfp gene directly from soil extracts, an enrichment step involving selective culture of soil samples in liquid medium prior to DNA extraction enabled the consistent detection of the T. harzianum co-transformants by nested PCR for the duration of the incubation period.O objetivo deste trabalho foi avaliar a sobrevivência de dois co-transformantes de Trichoderma harzianum, TE 10 e TE 41, expressando o gene da proteína de fluorescência verde (egfp) e resistência a benomil, por um período de quatro semanas em microcosmo de solo, sob condições controladas. Foi utilizado um meio seletivo para detecção de material fúngico viável, o qual foi confirmado por observação quanto ao fenótipo de fluorescência em microscópio de epifluorescência direta. O fungo transformado foi detectado por PCR "nested", utilizando-se dois pares de primers específicos para o gene egfp. Foram utilizados meios líquidos enriquecidos no cultivo de amostras de solo, permitindo uma detecção consistente de co-transformantes de T. harzianum, uma vez que não foi possível a detecção do gene egfp por PCR de amostras de DNA extraídas diretamente de solo

Variation in the electrophoretic karyotype of Brazilian strains of Metarhizium anisopliae

Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was used to separate chromosome-sized DNA molecules of four strains of Metarhizium anisopliae from Brazil. Metarhizium anisopliae isolates from Japan have been reported as possessing seven chromosomes. Variation was observed among the Brazilian strains and the chromosomal DNA was resolved into eight bands for strain CG46. Densitometric analysis of PFGE gels suggested that the other three Brazilian strains also possess eight chromosomes, with two chromosomes migrating as doublets under the electrophoretic conditions used. The genome size was estimated as varying between 23.39 to 31.88 Mb, not including possible doublet chromosomes

Survival in soil and detection of co-transformed Trichoderma harzianum by nested PCR Sobrevivência em solo e detecção de co-transformantes de Trichoderma harzianum por PCR "nested"

The objective of this work was to evaluate the survival of two Trichoderma harzianum co-transformants, TE 10 and TE 41, carrying genes for green fluorescent protein (egfp) and for resistance to benomyl, during four weeks in a contained soil microcosm. Selective culture media were used to detect viable fungal material, whose identity was confirmed by the observation of the fluorescent phenotype by direct epifluorence microscopy. PCR using two nested primer pairs specific to the egfp gene was also used to detect the transformed fungi. Although it was not possible to reliably detect the egfp gene directly from soil extracts, an enrichment step involving selective culture of soil samples in liquid medium prior to DNA extraction enabled the consistent detection of the T. harzianum co-transformants by nested PCR for the duration of the incubation period.<br>O objetivo deste trabalho foi avaliar a sobrevivência de dois co-transformantes de Trichoderma harzianum, TE 10 e TE 41, expressando o gene da proteína de fluorescência verde (egfp) e resistência a benomil, por um período de quatro semanas em microcosmo de solo, sob condições controladas. Foi utilizado um meio seletivo para detecção de material fúngico viável, o qual foi confirmado por observação quanto ao fenótipo de fluorescência em microscópio de epifluorescência direta. O fungo transformado foi detectado por PCR "nested", utilizando-se dois pares de primers específicos para o gene egfp. Foram utilizados meios líquidos enriquecidos no cultivo de amostras de solo, permitindo uma detecção consistente de co-transformantes de T. harzianum, uma vez que não foi possível a detecção do gene egfp por PCR de amostras de DNA extraídas diretamente de solo