Neospora caninum infection: abortion in cattle and diagnosis

Neospora caninum je nedávno popsaný protozoální parazit zvířat, který byl od roku 1988 nesprávně identifikován jako Toxoplasma gondii. Neosporóza je hlavní příčinou abortů u skotu v mnoha zemích. Práce shrnuje poznatky o struktuře parazita, jeho biologii, klinice, diagnostice a léčbě.Dokončená práce s úspěšnou obhajobo

Enzyme microreactors, tools of bioaffinity, chromatography for proteomics : qualitative analysis of highly heterogeneous molecule IgG

Byly připraveny imobilizované enzymové mikroreaktory, které byly použity pro fragmentaci IgG (papin, trypsin) a pro modifikaci oligosacharidového řetězce IgG. Vzniklé glykoformy byly izolovány pomocí afinitní chromatografie na lektinech Concanavalin A, Bandeiraea simplicifolia I a Bandeiraea simplicifolia II.Dokončená práce s úspěšnou obhajobo

Evaluation of cell biology textbooks from the perspective of didactics

V této práci doplňujícího pedagogického studia byla hodnocena učebnice Biologie buněk pro Gymnázia z pohledu obtížnosti textu, didaktické vybavenosti a obtížnosti úloh. Učebnice je srovnána s Essential cell biology, kolektivu autora B. Albertse.The aim of this final work is the evaluation of the textbook Biologie buněk pro Gymnázia in its difficulty of textbook´s text and didactical facilities of textbook. The results were compared to another book - Essential cell biology of the Albert team.Dokončená práce s úspěšnou obhajobo

Optimalization of the galactoseoxidase imobilization and the stability of this reactor

Galaktosaoxidasa byla po chemické oxidaci jodistanem sodným orientovaně imobilizována na magnetický a nemagnetický makroporézní hydrazidový derivát perlové celulosy. Byla opakovaně stanovena enzymatická aktivita připraveného oxidačního reaktoru.Dokončená práce s úspěšnou obhajobo

Současné metody na bázi enzymů pro in vitro fosforylaci rekombinantních proteinů

Phosphorylation is a reversible, enzyme-controlled posttranslational process affecting approximately one-third of all proteins in eukaryotic cells at any given time. Any deviation in the degree and/or site of phosphorylation leads to an abnormal conformation of proteins, resulting in a decline or loss of their function. Knowledge of phosphorylation-related pathways is essential for understanding the understanding of the disease pathogenesis and for the design of new therapeutic strategies. Recent availability of various kinases at an affordable price differs in activity, specificity, and stability and provides the opportunity of studying and modulating this reaction in vitro. We can exploit this knowledge for other applications. There is an enormous potential to produce fully decorated and active recombinant proteins, either for biomedical or cosmetic applications. Closely related is the possibility to exploit current achievements and develop new safe and efficacious vaccines, drugs, and immunomodulators. In this review, we outlined the current enzyme-based possibilities for in vitro phosphorylation of peptides and recombinant proteins and the added value that immobilized kinases provide.Fosforylace je reverzibilní, enzymem kontrolovaný posttranslační proces, který v daném okamžiku ovlivňuje přibližně jednu třetinu všech proteinů v eukaryotických buňkách. Jakákoli odchylka ve stupni a/nebo místě fosforylace vede k abnormální konformaci proteinů, což má za následek pokles nebo ztrátu jejich funkce. Znalost cest souvisejících s fosforylací je zásadní pro pochopení porozumění patogeneze onemocnění a pro návrh nových terapeutických strategií. Nedávná dostupnost různých kináz za dostupnou cenu se liší aktivitou, specificitou a stabilitou a poskytuje příležitost ke studiu a modulaci této reakce in vitro. Tyto znalosti můžeme využít pro jiné aplikace. Existuje obrovský potenciál pro produkci plně fosforylovaných a aktivních rekombinantních proteinů, ať už pro biomedicínské nebo kosmetické aplikace. Úzce souvisí možnost využít současných úspěchů a vyvinout nové bezpečné a účinné vakcíny, léky a imunomodulátory. V tomto přehledu jsme nastínili současné možnosti enzymů pro in vitro fosforylaci peptidů a rekombinantních proteinů a přidanou hodnotu, kterou poskytují imobilizované kinázy

Stability of enzymes immobilized in oriented way on magnetic and non-magnetic bead cellulose

The enzymes galactose oxidase and neuraminidase have been immobilized in an oriented way to hydrazide derivative of magnetic and non-magnetic macroporous bead cellulose. Binding was accomplished after the sugar components have been oxidatively activated by natrium periodate as the oxidating agent. The operational and storage stability of neuraminidase reactor was studied during four weeks and operational stability of galactose oxidase reactor during three weeks. The operationas stability of galactose oxidase immobilized to magnetic macroporous bead cellulose was excellent in the environment of Cu 2+ ions. Stability of immobilized neuraminidase to non-magnetic support had a similar course. The stability of neuraminidase immobilized to magnetic macroporous bead cellulose was decreasing rapidly

Testing of collagenase covalently linked to chitosan nanofibers for biomedical applications

Nanofibers biofunctionalized with enzymes are materials of interest in the biomedical field due to their potential application in wound healing. This work describes the production and characterisation of electrospun chitosan nanofibers biofunctionalized with a microbial collagenase. The morphology and microstructure of the chitosan nanofibers prepared with Nanospider technology were examined using a scanning electron microscope (SEM). Amino groups of a chitosan nanofiber were connected with the carboxylic acid groups of the collagenase using EDAC and sulfo-NHS methodology. Collagenase enzymatic activity was evaluated with a peptidic substrate (Pz-peptide, 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg) in order to estimate the ability of this biomaterial to be used as an enzymatic debriding wound dressing. The characterisation of collagenase chitosan nanofibers in terms of measuring apparent Michaelis-Menten constants (KM(app) and vmax) revealed a higher enzyme to substrate affinity than with the soluble form of the collagenase. The resulting novel collagenase chitosan nanofibers exhibited excellent operational stability and long shelf life for at least 6 weeks. Therefore, the novel collagenase chitosan nanofibers are expected to be a potential scaffold for wound healing applications, such as e.g. enzymatic debridement

Electrochemical Detection of Enzyme Activity of Kinases Immobilized on Magnetic Particles

Proteinkinázy jsou enzymy zajišťující jednu z nejdůležitějších posttranslačních modifikací proteinů, fosforylaci. Fosforylace reguluje nejen fyziologické buněčné procesy, ale je také zapojena do takových patologických reakcí spojených s mnoha nemocemi. Proto je důležité sledovat aktivitu kinázy a inhibitorů, na což je kladen důraz při vývoji terapeutických cílů. Proteinkináza A byla imobilizována kovalentně na magnetických částicích. Pro stanovení enzymové aktivity byl nízkomolekulární substrát Kemtide fosforylován v přítomnosti adenosin-thiotrifosfátu (ATP-S). Thiofosforylovaný peptid následně spontánně reagoval s nanočásticemi koloidního zlata (AuNP) a následovala čtvercová katodická stripovací voltametrická analýza na sítotiskových uhlíkových elektrodách. Generovaný signál [AuCl4]- odpovídá úrovni fosforylace a tím i aktivitě enzymu.Protein kinases are enzymes providing one of the most important protein post-translational modifications, phosphorylation. Phosphorylation regulates not only physiological cell processes but also is involved in such pathological reactions associated with many diseases. Therefore, it is important to monitor the activity of kinase and inhibitors which is highlighted in the development of therapeutic targets. Protein kinase A was immobilized covalently on magnetic particles. For determination of enzyme activity, low-molecular-mass substrate Kemtide has been phosphorylated in presence of adenosine-thio triphosphate (ATP-S). Thiophosphorylated peptide subsequently spontaneously reacted with colloidal gold nanoparticles (AuNPs) followed by square-wave cathodic stripping voltammetric analysis on screen-printed carbon electrodes. Generated signal of [AuCl4]- corresponds to the level of phosphorylation and thus the activity of the enzyme

Comparison of loading efficacy and capacity of ovalbumin modified chitosan-based nanoparticles and nanofibers

In this paper, the suitability of nanomaterials for drug delivery systems was studied, including nanoparticle and nanofiber diameters measurement, when using the hydrodynamic light scattering, scanning electron microscopy, the optimization of protein concentration for adsorption, and of protein release assessment. The advantage of nanomaterials is their large surface area. The aim of a series of sorption experiments was to monitor the rate of sorption of ovalbumin (OVA) on three types of chitosan (CS)- based nanomaterial carriers – the nanoparticles of chitosan, the nanoparticles of chitosan-grafted-functionalized copolymer of polyacrylamide with polylactic acid (CS/PLA/PAA), and the electrospun nanofibers. In the nanomaterials, the loading efficacy and loading capacity were calculated and compared

Klostridiová kolagenáza imobilizovaná na chitosanových nanovláknech pro hojení popálenin

This article describes the characterization and application of collagenase-based chitosan nanofiber membranes with rat burns. Electrospun chitosan nanofibers were functionalized with clostridial collagenase using carbodiimide chemistry. The immobilized collagenase was characterized by enzyme activity, kinetic constants, and dry storage stability measurements using a Pz-peptide substrate. The apparent kinetic constants KM and Vmax of immobilized collagenase showed a high affinity for the peptide substrate compared to the free enzyme. Drying of chitosan membranes with immobilized collagenase ensured 98% stability of enzyme activity after rehydration. The effect of collagenase immobilized on chitosan nanofibers on the burn of the rat model was compared with a control treatment with chitosan nanofibers. The healing of the wound with both materials was terminated after 30 days at the same time, although the collagenase wound healed more rapidly during healing. The scar area size after the application of collagenase-containing chitosan nanofiber membranes was 31.6% smaller than when only chitosan nanofibers were used.Tento článek popisuje charakterizaci a aplikaci chitosanových nanovlákenných membrán na bázi kolagenázy na popáleninách potkanů. Elektrospun chitosan nanovlákna byla funkcionalizována klostridiovou kolagenázou s použitím karbodiimidové chemie. Imobilizovaná kolagenáza byla charakterizována měřením enzymatické aktivity, kinetických konstant a měřením stability při skladování za sucha se substrátem Pz-peptid. Zdánlivé kinetické konstanty KM a Vmax imobilizované kolagenázy vykazovaly vysokou afinitu k peptidovému substrátu ve srovnání s volným enzymem. Vysušení chitosanových membrán imobilizovanou kolagenázou zajistilo 98% stabilitu enzymové aktivity po rehydrataci. Účinek kolagenázy imobilizované na chitosanových nanovláknech na popáleniny krysího modelu byl porovnán s kontrolním ošetřením chitosanovými nanovlákny. Hojení rány oběma materiály bylo ukončeno po 30 dnech, i když kolagenázová rána se během hojení hojila rychleji. Velikost plochy jizvy po aplikaci chitosanových nanovlákenných membrán obsahujících kolagenázu byla o 31,6 % menší, než když byla použita pouze chitosanová nanovlákna