Imunomarcação de COX-2 e TGF-beta nas lesòes proliferativas da próstata do cão

As lesões prostáticas em cães vêm sendo cada vez mais estudadas, uma vez que esta espécie é considerada modelo experimental para afecções prostáticas no homem. As principais são a hiperplasia prostática benigna (HPB), prostatites, cistos e o adenocarcinoma. Recentemente tem se dado atenção às lesões pré-neoplásicas, dentre elas a neoplasia intra-epitelial prostática (PIN) e a atrofia inflamatória proliferativa (PIA). Alguns marcadores imunoistoquímicos são utilizados com o objetivo de avaliar o desenvolvimento de câncer prostático a partir de lesões pré-neoplásicas. A cicloxigenase-2 (COX-2) apresenta papel fundamental na resposta inflamatória e, esta pode ter relação com o desenvolvimento do câncer, além de induzir estímulos mitogênicos, enquanto que o fator de crescimento transformador-ß (TGF-ß) induz a angiogênese e inibe a proliferação celular, sendo considerado um mediador do crescimento prostático. No presente trabalho estes marcadores foram utilizados com o objetivo de correlacionar lesões não neoplásicas, pré-neoplásicas e neoplásicas. Os resultados obtidos mostram que as neoplasias e as lesões pré-neoplásicas expressam grande quantidade de COX-2 e TGF-ß, o que permite afirmar o papel destas proteínas no desenvolvimento do câncer prostático em cães.Prostatic lesions in dogs are being studied more and more, since the dogs are considered na experimental model for prostatic diseases in humans. The main prostatic diseases are benign prostatic hyperplasia (BPH), prostatic inflammation, cysts and adenocarcinoma. Pre neoplastic lesions are being studied, among them prostatic intra epithelial neoplasia (PIN) and prostatic inflammatory atrophy (PIA). Immunohistochemistry markers are used to evaluate prostatic cancer from pre neoplastic lesions. COX-2 has the main role in inflammatory response and can be involved in cancer development, because induces mitosis, and TGF-ß) induces angiogenesis and inhibits cellular proliferation, and is considered a prostatic growth mediator. In this study, these markers were used to correlate non neoplastic lesions, pre neoplastic lesions and prostatic cancer. Our results show that neoplastic and pre neoplastic lesions express high amounts of COX-2 and TGF-ß, witch allows us to confirm the involvement of these proteins in prostatic cancer development in dogs.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Atipia do epitélio prostático canino: aspectos moleculares e imunofenotípicos

No homem e no cão, as lesões displásicas são a neoplasia intra-epitelial prostática (PIN) e a atrofia inflamatória proliferativa (PIA), as quais vêm sendo estudadas devido seu potencial pré-maligno. Diversos fatores, bem como o processo inflamatório, estão relacionados à carcinogênese prostática. A cicloxigenase-2 (COX-2) apresenta papel fundamental na resposta inflamatória e apresenta relação com o desenvolvimento do câncer de próstata. Este trabalho teve por objetivos caracterizar a proliferação e morte celular (apoptose) das células basais e secretoras do tecido prostático normal e atípico (PIA, PIN e carcinoma) dos cães, avaliar a integridade da camada de células basais por meio do anticorpo p63 e, analisar a expressão gênica de COX-2 nos diferentes componentes teciduais da PIA canina por qRT-PCR. Avaliaram-se, pela técnica de dupla marcação imunoistoquímica, os índices de proliferação e apoptose com os marcadores Ki-67 e caspase-3, respectivamente, das células secretoras (PSA positivas) e das células basais (34âE12 positivas). Para isso, foram estudadas 130 próstatas de cães adultos, inteiros e sem histórico de lesão prostática. Observou-se aumento da proliferação e diminuição da apoptose das células secretoras da PIA e do carcinoma, entretanto, as células basais apresentaram maior índice proliferativo e menor taxa de apoptose apenas nos focos de PIA. Na PIN, a proliferação celular mostrou-se mais evidente em relação à morte celular. Maior quantidade de células basais que expressaram p63 foi constatada na PIA e no carcinoma. Os focos de PIA apresentaram maior expressão gênica de COX-2 no estroma em relação às células epiteliais. Conclui-se que os compartimentos secretor e basal exibem maior proliferação celular e menor taxa apoptótica na PIA. O aumento da marcação de p63 na PIA e no carcinoma sugere participação das...Dysplastic lesions in human and dogs are prostatic intraepithelial neoplasia (PIN) and proliferative inflammatory atrophy (PIA), which have been investigated because of their premalignant potential. Inflammatory process is related to prostate carcinogenesis. Cyclooxygenase-2 (COX-2) plays a role in the inflammatory response and is correlated with the development of prostate cancer. This study aimed to characterize the proliferation and apoptosis of basal and secretory cells of normal and atypical prostate tissue (PIA, PIN and carcinoma) of dogs, to assess the integrity of the basal cell layer through the p63 immunohistochemistry. In addition, we analyzed the gene expression of COX-2 in different tissue components of canine PIA by qRT-PCR. Immunohistochemical double staining technique was performed using Ki-67 and caspase-3 antibodies to asses cellular proliferation and apoptosis, respectively. PSA was used to characterize the secretory cells and 34âE12 to characterize the basal cells. Were analyzed 130 prostates of adult dogs with or without history of prostatic lesion. Increased proliferation and decreased apoptosis of the secretory cells of the PIA and the carcinoma was observed, however, the basal cells showed higher proliferative index and lower rate of apoptosis only in foci of PIA. PIA and carcinomas showed high expression of p63. It was observed higher gene expression of COX-2 in PIN stroma compared to epithelial cells. We conclude that basal and secretory compartments exhibit higher proliferative and lower apoptotic rate in PIA. The higher expression of p63 in PIA and carcinomas suggests involvement of the basal cells in atypical lesions of the prostate. Furthermore, the expression of COX-2 in PIA is higher in the stromal compartment, revealing important role of this enzyme in the canine prostate carcinogenesisFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

O papel da ciclooxigenase-2 da pressão arterial na lesão renal de ratos submetidos à infusão contínua de angiotensina II

Angiotensin II (ANGII) is a vasoconstrictor which action on inflammation has been studied. The objective of this study was to verify the stimulation of cyclooxigenase-2 and blood pressure on renal damage by ANGII. Wistar rats were distributed into four groups, as follows: group 1 – control; group 2 – ANGII; group 3 – ANGII + celecoxib; and group 4 – celecoxib. The ANGII was infused in the animals by subcutaneous osmotic mini-pumps during 72 hours. After that, euthanasia was performed. The blood pressure was measured before the drugs administration and before the euthanasia. Histopathological and immunohistochemical evaluations were performed in kidneys to assess the expression of COX-2. It was concluded that ANGII caused renal damage, regardless of blood pressure values. ANGII associated with celeboxib increased blood pressure. Celecoxib did not protect the kidneys against ANGII activities.A angiotensina II (ANGII) é um vasoconstritor, entretanto, sua atuação na inflamação tem sido estudada. Objetivou-se verificar o estímulo da ciclooxigenase-2 e da pressão arterial na lesão renal por ANGII. Para tanto, utilizaram-se ratos Wistar, distribuídos no grupo 1: controle, grupo 2: ANGII, grupo 3: ANGII + celecoxibe, grupo 4: celecoxibe. A ANGII foi administrada via minibomba no subcutâneo dos animais durante 72 horas, sendo então realizada a eutanásia. A pressão arterial foi aferida antes da administração dos fármacos e antes da eutanásia. Colheram-se os rins dos animais para histopatologia e para imunoistoquímica, avaliando-se a expressão de COX-2. Concluiu-se que a ANGII promoveu lesões renais, independentemente dos valores da pressão arterial; ANGII associada ao celecoxibe levou ao aumento da pressão arterial. O celecoxibe não protegeu os rins contra as ações da angiotensina II.Fundação de Apoio à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Immunohistochemical expression of p53 and p63 in adenomas and carcinomas of canine mammary glands

Mammary tumors are very common in female dogs and its prognosis varies significantly according to the tumor invasion degree. Myoepithelial layer destruction is considered a differential diagnosis parameter of in situ from invasive lesions in human breast cancer. Aiming to evaluate the immunohistochemical expression of p63, a protein specifically expressed by myoepithelial cells of mammary gland, and its correlation with p53 expression, 10 adenomas and 20 carcinomas with and without metastasis of canine mammary gland were studied. There was no significant difference between adenomas and carcinomas for both proteins staining, however, the percentage and continuity of staining was lower in metastatic carcinomas. There was no correlation between p53 and p63 expression, but the higher values of p53 staining were found in carcinomas, according to previous studies. Results showed that p63 is specifically expressed also in myoepithelial cells of canine mammary gland. However, in order to ensure its use as a prognostic marker in canine mammary tumors, further studies involving a higher number of samples should be conducted.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

uPAR EXPRESSION IN CANINE NORMAL PROSTATE AND WITH PROLIFERATIVE DISORDERS

Prostatic lesions such as prostatic intraepithelial neoplasia (PIN) and proliferative inflammatory atrophy (PIA) are studied in human and canine species due to their malignance potential. The plasminogen activator (PA) system has been suggested to play a central role in cell adhesion, angiogenesis, inflammation, and tumor invasion. The urokinase-type plasminogen activator receptor (uPAR) is a component of the PA, with a range of expression in tumor and stromal cells. In this study, uPAR expression in both canine normal prostates and with proliferative disorders (benign prostatic hyperplasia-BPH, proliferative inflammatory atrophy-PIA, prostatic intraepithelial neoplasia-PIN, and carcinoma-PC) was evaluated by immunohistochemistry in a tissue microarray (TMA) slide to establish the role of this enzyme in extracellular matrix (ECM) remodeling and in the processes of tissue invasion. A total of 298 cores and 355 diagnoses were obtained, with 36 (10.1%) normal prostates, 46 (13.0%) with BPH, 128 (36.1%) with PIA, 74 (20.8%) with PIN and 71 (20.0%) with PC. There is variation in the expression of uPAR in canine prostate according to the lesion, with lower expression in normal tissue and with BPH, and higher expression in tissue with PIA, PIN and PC. The high expression of uPAR in inflammatory and neoplastic microenvironment indicates increased proteolytic activity in canine prostates with PIA, PIN, and PC

Neoplasia intra-epitelial prostática: aspectos morfológicos e moleculares

Prostatic intraepithelial neoplasia (PIN) is a non-invasive prostatic lesion that shows genetic abnormalities, cellular functions changes and phenotypic invasive cancer pattern. Histopathological exam shows histo and cytological changes in pre existing ducts and acines, mostly in a multifocal way. The lesion can be classified as low grade PIN (LGPIN) or high grade PIN (HGPIN). Morphological aspects, including basal membrane rupture, higher proliferative index and micro vascular density are suggestive that HGPIN is an intermediate stage between normal epithelium and carcinoma.La neoplasia intraepitelial prostática (PIN) es una lesión no invasiva de la próstata que presenta anormalidades genéticas, perdida de control de las funciones celulares y características fenotípicas del cáncer invasivo. Microscópicamente esta neoplasia consiste de alteraciones histológicas y citológicas en el interior de los ductos o acinos preexistentes, generalmente de distribución multifocal. La lesión puede clasificarse en PIN de bajo (LGPIN) o alto grado (HGPIN). Los aspectos morfológicos que incluyen ruptura de la capa celular de células basales así como aumento de la capacidad proliferativa y de la densidad microvascular, sugieren que la HGPIN es una fase intermedia entre la forma epitelial normal y el carcinoma.A neoplasia intra-epitelial prostática (PIN) é uma lesão não-invasiva da próstata que apresenta anormalidades genéticas, perda de controle das funções celulares e características fenotípicas do câncer invasivo. Microscopicamente essa neoplasia consiste de alterações histo e citológicas no epitélio de revestimento ductal ou ácinos pré-existentes, exibindo geralmente distribuição multifocal. A lesão pode ser classificada em PIN de baixo (LGPIN) ou alto grau (HGPIN). Os aspectos morfológicos que incluem ruptura da camada de células basais, aumento da capacidade proliferativa epitelial e da densidade microvascular, sugerem que o HGPIN é um estágio intermediário de progressão do epitélio benigno a carcinoma.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Renal histology and immunohistochemistry after acute hemorrhage in rats under sevoflurane and ketoprofen effect

OBJETIVO: Investigar a influência do inibidor não-seletivo da ciclooxigenase, cetoprofeno (ceto) intravenoso, em alterações histológicas e dos níveis das citocinas renais - fator α de necrose tumoral (TNF- α) e interleucina 1 (IL-1) - após hemorragia de 30% da volemia (10%, três vezes, em intervalos de 10 min). MÉTODOS: Sob anestesia com sevoflurano (sevo), os grupos sevo e sevo+ceto (10 ratos cada) foram preparados cirurgicamente para leitura de pressão arterial média (PAM) e administração de solução de Ringer (5 mL/kg/h) e de cetoprofeno (1,5 mg/kg), no início da anestesia, no grupo sevo+ceto. Mediu-se temperatura retal continuamente. Os valores de temperatura e PAM foram observados antes da primeira hemorragia (T1), após a terceira hemorragia (T2) e 30 min após T2 (T3). Realizada nefrectomia bilateral nos dois grupos para análise histológica e imuno-histoquímica. RESULTADOS: Nos dois grupos, temperatura e PAM diminuíram com relação aos valores basais. Hipotermia foi mais acentuada no grupo sevo (p=0,0002). Necrose tubular foi mais frequente no grupo sevo (p=0,02). As citocinas estiveram igualmente presentes nos rins dos dois grupos. CONCLUSÃO: Cetoprofeno foi mais protetor no rim de rato durante anestesia com sevoflurano e hipovolemia, porém parece que TNF- α e IL-1 não estão envolvidas nessa proteção.PURPOSE: To investigate the influence of intravenous nonselective cyclooxygenase inhibitor, ketoprofen (keto), on kidney histological changes and kidney cytokines, tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1 (IL-1), levels after hemorrhage of 30% of volemia (three times 10%, intervals of 10 min) in rats. METHODS: Under sevoflurane (sevo) anesthesia, sevo and sevo+keto groups (10 rats each) were instrumented for Ringer solution (5mL/kg/h) administration and mean arterial pressure (MAP) evaluation, plus keto (1.5mg/kg) administration in sevo+keto group in the beginning of anesthesia. Rectal temperature was continuously measured. The baseline data of temperature and MAP were collected at the first hemorrhage (T1), the third hemorrhage (T2) and 30min after T2 (T3). Bilateral nephrectomy was achieved for histology and immunohistochemistry. RESULTS: In both groups, temperature and MAP diminished from initial values. Hypothermia was greater in sevo group (p=0.0002). Tubular necrosis was more frequent in sevo group (p=0.02). The studied cytokines were equally present in the kidneys of both groups. CONCLUSION: Ketoprofen was more protective to the rat kidney in condition of anesthesia with sevoflurane and hypovolemia, but it seems that TNF-α and IL-1 were not involved in that protection

Imunomarcação de células CD3+ e CD79a+ nas lesões descamativas e ulcerativas de cães com leishmaniose

Canine visceral leishmaniasis is an endemic infectious disease in some regions from São Paulo state and even though it is a systemic disease, in the dog, the main clinical sign is dermatological. Thirty dogs with positive results in serology (IFI) and parasitological exams (fine needle aspiration) for leishmaniasis from Aracatuba city were evaluated. They only showed dermatological signs and were divided in two groups, one with exfoliative (n=15) and other with ulcerative (n=15) lesions. There was significant statistical difference between CD3 and CD79a population in the same dermatological pattern, and with CD79a population between exfoliative and ulcerative patterns (p<0,05)