Method validation for detecting ivermectin residues in milk

Níveis não aceitáveis de resíduos de ivermectina (IVM), uma droga anti-parasitária amplamente utilizada no Brasil para controle de endectoparasitas, pode estar presente no leite para consumo humano se administrada incorretamente. O nível máximo de resíduos no leite para este composto é de 10 ng mL-1 e sua presença tem sido comprovada em pesquisas realizadas por orgãos reguladores. Com o conhecimento deste problema, um método para a detecção de ivermectina em amostras de leite foi desenvolvido utilizando a extração líquido-líquido com base em acetonitrila e hexano, seguida por derivatização com 1-metilimidazol (MI), trietilamina (TEA), ácido anidro trifluoroacético (TFAA) e ácido trifluoroacético (TFA) e cromatografia líquida com detecção fluorescente (LC-FL) para a análise. Além disso, o método proposto foi testado de acordo com parâmetros de validação estabelecidos pela ANVISA. Parâmetros, tais como seletividade, linearidade (R² 0,98), precisão (coeficiente de variação entre 0,6-19%), recuperação (90-95%) e robustez foram avaliados durante o processo de validação. Subsequentemente, foi testado em amostras de leite de vacas tratadas com uma formulação comercial de ivermectina a 1%. O método aplicado em amostras de campo, provou possuir um perfil de quantificação e de confirmação para o método concebido no presente estudo.Non-acceptable residue levels of ivermectin (IVM), an anti-parasitic drug widely employed in Brazil for control of endectoparasites, could be present in milk for human consumption if improperly administered. The maximum residue level in milk for this compound is 10 ng mL-1 and its presence has been proved from previous government surveys. With this rising subject, a method for the detection of ivermectin in milk samples was developed using liquid-liquid extraction based in acetonitrile and hexane, followed by derivatization with 1-methylimidazole (MI), triethylamine (TEA), anhydrous trifluoacetic acid (TFAA) and trifluoracetic acid (TFA) and liquid chromatography coupled to fluorescent detection (LC-FL) for the analysis. Moreover, the proposed method was tested according to validation parameters estabilished by ANVISA. Parameters, such as selectivity, linearity (R² 0.98), precision (RSD values between 0.6 19%), recovery (90-95%) and robustness were evaluated during the validation process. Subsequently it was tested in milk samples from cows treated with a commercial ivermectin formulation at 1%. The method applied to field samples, proved a quantifiable and confirmatory profile for the method designed in this study

Epidemiological characterization of bovine tuberculosis in the state of Tocantins, Brazil

Foi realizado um estudo seccional sobre a situação epidemiológica da tuberculose bovina no Estado de Tocantins. O Estado foi dividido em cinco regiões e em cada uma delas foi aleatoriamente amostrado um número pré-estabelecido de propriedades. Dentro de cada propriedade, fêmeas com idade igual ou superior a 24 meses foram escolhidas aleatoriamente e submetidas ao teste Tuberculínico Cervical Comparativo. Os animais que resultaram inconclusivos foram retestados com o mesmo procedimento diagnóstico em intervalo mínimo de 60 dias. Ao todo foram tuberculinizados 11.926 animais provenientes de 757 propriedades. A prevalência de focos no estado foi de 0,16% [0,023; 1,15] e a de animais 0,009% [0,001; 0,063]. Foi detectado apenas um foco de tuberculose bovina na região de Araguaína, ao Norte do estado. Em função da prevalência muito baixa, a melhor estratégia a ser adotada por Tocantins é a implementação de estratégias de erradicação através de sistema de vigilância para detecção e saneamento dos focos residuais, avaliando a conveniência de incorporar elementos de vigilância baseada em risco.A cross-sectional study was conducted on the epidemiological situation of bovine tuberculosis in the state of Tocantins. The state was divided into five regions and in each of them a random number of predetermined properties was sampled. Within each property, females aged 24 months or older were randomly selected and submitted to the Comparative Cervical Tuberculin test. Animals that proved inconclusive were retested with the same diagnostic procedure at least 60 days apart. In all, 11,926 animals from 757 farms were tuberculinized. The prevalence for infected herds was 0.16% [0.023; 1.15] and for infected animals was 0.009% [0.001; 0.063]. Only one animal was positive for bovine tuberculosis, detected in the northern region of Araguaína. Due to the very low prevalence, the best strategy to be adopted by Tocantins is the implementation of eradication strategies through surveillance system for detection and sanitation of residual infected herds, assessing the feasibility of incorporating elements of risk-based surveillance

Estimation of the diagnostic accuracy of the glyco-C and US9 gene-based polymerase chain reaction technique for the detection of bovine Herpesvirus type 5 DNA in decomposed brain suspension from a slaughter house using Bayesian analysis, Brazil

Brazil represents the greatest beef producer among tropical countries, and the major obstacle for meat international trade is sanitary problems especially closely related to viral encephalitis. The goal of this study was to estimate the accuracy of the glycol and US9 gene-based polymerase chain reactions (PCRs) for the detection of bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) from decomposed brain samples (n = 95). For this purpose, a latent-class (bayesian) approach was used. Sensitivity (Se) was estimated to be 70% (95% probability interval, 40-80) and specificity (Sp) 100% in the statistical analysis for both PCRs used. Accordingly, a minimum of ≥40% of the calves was estimated to harbor BoHV-5 DNA even after 72 h of decomposition at room temperature. It was concluded that US9 gene-based PCR could also be considered a cost-effective alternative in sanitary programmers. However, given the importance of veterinary diagnoses, PCR-positive samples should be further confirmed through in vitro isolation and/or sequencing.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq