Использование гипоксического прекондиционирования для подготовки аутодермотрансплантата у больных со скомпрометированной микроциркуляцией

Objective: to study the impact of the concentration of cytokine HIF-1α in the donor area on the processes of reparative regeneration in free autodermografting by split-thickness skin graft for patients with disorders of the microvasculature and to improve results of autodermografting by local stimulation of HIF-1α to prepare skin graft to hypoxia conditions.Materials and methods. The hypothesis of the influence of the local circulatory hypoxia on the concentration of HIF-1α was checked in the experiment with 18 white outbred male rats weighing 250–300 g. The microcirculation level was controlled by laser doppler flowmetry method. The indications to appraise the correctness of the hypothesis were analytical data of Enzyme Multiplied Immunoassay. This method of treatment was used in the clinic, where 18 patients with diabetic foot infections syndrome needed dermatoplastic surgery, and compared with the results of treatment of 22 patients with free autodermografting performed by traditional way.Results. It is identified the significant difference in concentration of cytokine HIF-1α in the donor skin area in preparation it for hypoxia conditions by proposed method. The experimental data are confirmed in the clinic. After the free autodermografting based on developed technique in the main group the viability of grafter was preserved on Me (Q1; Q3) 84 (78; 93) % of its area. In the control group graft acceptance is registered on Me (Q1; Q3) 72 (65; 79) % of grafter area (p = 0.012).Цель исследования – изучение влияния концентрации в донорской области цитокина HIF-1α на процессы репаративной регенерации при свободной аутодермопластике расщепленным кожным трансплантатом у больных с патологией микроциркуляторного русла и улучшение результатов аутодермопластики путем локальной стимуляции выработки HIF-1α в целях подготовки трансплантата к условиям гипоксии.Материалы и методы. В эксперименте гипотезу влияния локальной циркуляторной гипоксии на концентрацию HIF-1α проверили на 18 белых беспородных крысах-самцах массой тела 250–300 г. Уровень микроциркуляции контролировали методом лазерной допплеровской флоуметрии. Критериями, позволяющими оценить правильность гипотезы, явились данные иммуноферментного анализа. В клинике использовали предложенный способ при лечении 18 больных с синдромом диабетической стопы, требовавшим выполнения кожно-пластических операций, сравнивая с результатами лечения 22 больных, у которых свободную аутодермопластику выполняли традиционным способом.Результаты. Выявлена статистически значимая разница в концентрации цитокина HIF-1α в коже донорской области при подготовке ее к условиям гипоксии предложенным способом. Данные эксперимента подтверждены в клинике. В основной группе после выполнения свободной аутодермопластики по разработанной методике жизнеспособность трансплантата сохранялась на Me (Q1; Q3) 84 (78; 93) % его площади. В контрольной группе приживление отмечено на Me (Q1; Q3) 72 (65; 79) % площади трансплантата (р = 0,012)

Метаболизм и микроструктура стенки тонкой кишки у пациентов с колоректальным раком

RELEVANCE In patients with colorectal cancer (CRC), the normal small intestine, located outside the pathological focus, undergoes changes that may be the cause of digestive dysfunction after radical surgery to remove the tumor.The assessment of metabolic and microstructural changes in the ileum mucosa in patients with colorectal cancer is necessary to correct the algorithms of postoperative therapy and enteral nutrition. Modern means of optical bioimaging are potentially capable of solving this complex diagnostic problem.AIM OF STUDY To study the features of metabolism and morphological structure of the wall of a conditionally normal small intestine in the mucosa in patients with stage 1–3 CRC using macro- FLIM and optical coherence tomography (OCT).MATERIAL AND METHODS The object of the study was the wall of the ileum (66 samples) from the mucosal side of patients with histologically confirmed CRC stages 1–3 with tumor location in the right sections of the colon. Eight samples were obtained from patients with stage 1 CRC, 38 samples were obtained from patients with stage 2 and 20 samples were obtained from patients with stage 3 tumor. The volume of surgical intervention is right-sided hemicolectomy with total mesocolonectomy, CME (D2 lymph node dissection). Fresh tissue samples were examined using fluorescent lifetime macroimaging (macro-FLIM ) and OCT, followed by histological analysis of the material.RESULTS According to a histological study in the small intestine of patients with stage 1 CRC, the mucosa is covered with a normal single-layer prismatic border epithelium. In the intestine samples of patients with stage 2 CRC, mucus hypersecretion with areas of fibrosis and vascular congestion was observed. At the 3rd stage of CRC, the mucous membrane of the small intestine was loose, with local thickenings, areas of fibrosis with severe leukostasis, and foci of atrophy. None of the samples showed histological signs of a malignant tumor.According to OCT data, in the mucous membrane of the small intestine in patients with the 1st and 2nd stages of CRC, the contours of the villi and, partially, the crypts were well visualized. The structure of the villi was smooth, not coarse, and the shape was regular. In patients with stage 3 CRC, the contours of the crypts and villi were indistinct. There were no differences in the OCT picture between histologic preparations in the 1st and 2nd stages of CRC: the structure of the villi of the small intestine was clear, the shape was unchanged. According to FLIM data, statistically significant differences were revealed in the mean fluorescence lifetime values of reduced nicotinamide dinucleotide (phosphate) NAD(P)H (τm) between 2nd and 3rd (p=0.031), 1st and 3rd (p=0.018) by CRC stages. At the 1st stage of CRC τm was 1.61 [1.30; 2.02] ns, at the 2nd stage 1.50 [1.36; 1.73] ns, at the 3rd stage 1.37 [1.22; 1.51] ns. The FLIM results suggest an increase in the role of glycolysis in enterocyte energy metabolism along with progression of the CRC stage.CONCLUSION In patients with cancer of the right colon, lesions of the microstructure of the mucous membrane were revealed in the ileum not affected by the malignancy. At the same time, the severity of microstructural disorders in the wall of the small intestine is associated with the stage of tumor development in the colon. Bioimaging technologies, namely, methods of optical coherence tomography and fluorescence lifetime macroimaging, made it possible to objectively display microstructural and metabolic disorders in the ileum wall. The data of optical colorectal tomography demonstrated differences in the structural picture of the intestinal villi in patients with stages 1–2 and 3 of colorectal cancer. Results of fluorescence lifetime macroimaging of the metabolic cofactor nicotinamide dinucleotide (phosphate) confirmed an increase in the role of glycolysis in the energy metabolism of enterocytes along with an increase in the stage of colorectal cancer. The identified disorders in the state of the small intestine develop in patients with colorectal cancer before surgery and are highly likely to be an important pathogenetic link of malabsorption in the postoperative period. If the hypothesis is confirmed, the developed algorithm for the complex diagnosis of microstructural and metabolic disorders in tissues will expand the possibilities for the rehabilitation of patients with cancer of the right colon.АКТУАЛЬНОСТЬ У пациентов с колоректальным раком (КРР) нормальная тонкая кишка, расположенная вне патологического очага, претерпевает изменения, которые могут быть причиной пищеварительной дисфункции после радикальной операции по удалению опухоли.Оценка метаболических и микроструктурных изменений в слизистой оболочке подвздошной кишки у пациентов с КРР необходима для коррекции алгоритмов послеоперационной терапии, энтерального питания. Современные средства оптического биоимиджинга потенциально способны решить эту сложную диагностическую задачу.ЦЕЛЬ Исследовать особенности метаболизма и морфологической структуры стенки условно нормальной тонкой кишки со стороны слизистой оболочки у пациентов с КРР 1–3-й стадий методами макро-FLIM и оптической когерентной томографии (ОКТ).МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Объектом исследования являлась стенка подвздошной кишки (66 образцов) со стороны слизистой оболочки у пациентов с гистологически подтвержденным КРР 1–3-й стадий с локализацией опухоли в правых отделах ободочной кишки. 8 образцов получены у пациентов с 1-й стадией КРР, 38 образцов — у пациентов со 2-й стадией и 20 образцов — с 3-й стадией развития опухоли. Объем оперативного вмешательства — правосторонняя гемиколэктомия с тотальной мезо­колонэктомией — CME (лимфодиссекцией Д2). Свежие образцы ткани исследовали методами флуоресцентного время-разрешенного макроимиджинга (макро-FLIM) и ОКТ с последующим гистологическим анализом материала.РЕЗУЛЬТАТЫ По данным гистологического исследования в тонкой кишке пациентов с 1-й стадией КРР слизистая оболочка покрыта нормальным однослойным призматическим каемчатым эпителием. В образцах кишки пациентов со 2-й стадией КРР наблюдалась гиперсекреция слизи с участками фиброза и полнокровием сосудов. При 3-й стадии КРР слизистая оболочка тонкой кишки была рыхлой, с локальными утолщениями, участками фиброза с выраженным лейкостазом и очагами атрофии. Ни в одном из образцов не обнаружены гистологические признаки злокачественной опухоли.По данным ОКТ в слизистой оболочке тонкой кишки у пациентов с 1-й и 2-й стадиями КРР хорошо визуализировались контуры ворсинок и, частично, крипты. Структура ворсинок была гладкой, негрубой, а форма регулярной. У пациентов с 3-й стадией КРР контуры крипт и ворсинок были нечеткими. Различий в картине ОКТ между гистологическими препаратами при 1-й и 2-й стадиях КРР получено не было: структура ворсинок тонкой кишки была четкой, форма неизмененной. По данным FLIM выявлены статистически значимые отличия в показателях среднего времени жизни флуоресценции восстановленного никотинамиддинуклеотида (фосфата) НАД(Ф)Н (τm) между 2-й и 3-й (p=0,031), 1-й и 3-й (p=0,018) стадиями КРР. При 1-й стадии КРР τm составило 1,61 [1,30; 2,02] нс, при 2-й стадии — 1,50 [1,36; 1,73] нс, при 3-й стадии — 1,37 [1,22; 1,51] нс. Результаты FLIM предположительно свидетельствуют об увеличении роли гликолиза в энергетическом метаболизме энтероцитов вместе с увеличением стадии КРР.ЗАКЛЮЧЕНИЕ У пациентов с раком правых отделов ободочной кишки в не затронутой злокачественным поражением подвздошной кишке зафиксированы нарушения микроструктуры слизистой оболочки. При этом выраженность нарушений микроструктуры в стенке тонкой кишки связана со стадией развития опухоли в толстой кишке. Технологии биовизуализации, а именно — методы оптической когерентной томографии и флуоресцентного время-разрешенного макроимиджинга, позволили объективно отобразить нарушения микроструктуры и метаболизма в стенке подвздошной кишки. Данные оптической колоректальной томографии продемонстрировали различия в структурной картине ворсинок кишки у пациентов 1–2-й и 3-й стадий колоректального рака. Результаты флуоресцентного время-разрешенного макроимиджинга метаболического кофактора никотинамиддинуклеотида (фосфата) свидетельствовали об увеличении роли гликолиза в энергетическом метаболизме энтероцитов вместе с ростом стадии колоректального рака. Выявленные нарушения в состоянии тонкой кишки развиваются у пациентов с колоректальным раком до операции и с высокой вероятностью являются важным патогенетическим звеном мальабсорбции в послеоперационном периоде. В случае подтверждения гипотезы, разработанный алгоритм комплексной диагностики нарушений микроструктуры и метаболизма в тканях расширит возможности реабилитации пациентов с раком правых отделов толстой кишки

The role of hypoxia-induced factor in the regulation of oxygen homeostasis during reparative regeneration in compromised microcirculation

The aim of the present review is to find an answer to the clinically important question on the mechanisms regulating the activity of reparative regeneration in hypoxic conditions and potential ways to modify this process. In the recent studies, compensated hypoxia is characterized as a trigger for the regeneration, with the central regulating factor being the member of the cytokine family, hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1). Changes in the concentration of this protein modulates cell migration, angiogenesis and epithelialmesenchymal integration; it also stimulates the proliferation of endothelial cells and fibroblasts, playing a  major role in the stimulation of wound healing, especially with compromised microcirculation, for example, diabetes mellitus