Mapeamento genómico de um gene de resistência ao míldio em Brassica oleracea L.

Tese dout., Biologia, Universidade do Algarve, 2006O gene Pp523 confere resistência dominante ao míldio em plantas adultas de brócolo (Brassica oleracea ssp. italica). Com o objectivo de proceder ao seu isolamento via “mapbased cloning”, uma procura sistemática de marcadores moleculares foi conduzida por “bulked segregant analysis”. No total foram identificados quatro marcadores RAPD e quatro AFLP que flanqueiam e se encontram estreitamente ligados ao gene de resistência. Paralelamente, foi construído um mapa genético de elevada densidade de Brassica oleracea, no qual o locus Pp523 foi localizado no topo do grupo de ligamento 3. Foram clonados e sequenciados cinco marcadores mapeados na região genómica de 8.5 cM que envolve o locus de resistência. Três destes marcadores foram convertidos em marcadores codominantes SCAR e CAPS. A procura de similaridade entre as sequências dos marcadores DNA clonados e sequências depositadas nas bases de dados genómicas, revelou a existência de uma perfeita colinearidade entre a região genómica de B. oleracea contendo o gene Pp523 e a extremidade do braço superior do cromossoma 1 de Arabidopsis thaliana. Dada a proximidade genética entre as duas espécies, a informação sobre esta região genómica específica de Arabidopsis será utilizada no mapeamento fino da correspondente região genómica em B. oleracea, condição essencial para o isolamento do gene Pp523 via “map-based cloning”.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT

Identification of DNA markers linked to an induced mutated gene conferring resistance to powdery mildew in pea (Pisum sativum L.)

We have recently induced two powdery mildew (Erysiphe pisi Syd) resistant mutants in Pisum sativum L. via ethylnitrosourea (ENU) mutagenesis. Both mutations (er1mut1 and er1mut2) affected the same locus er1 that determines most of the identified natural sources of powdery mildew resistance (PMR) in this crop. The mutated gene er1mut2 was mapped to a linkage group of 16 DNA markers combining three main strategies: near isogenic lines (NILs) analysis, bulked segregant analysis and genetic mapping of randomly identified polymorphic markers, together with three DNA-markers techniques: ISSR, RAPDs and AFLPs. Markers located closer to the PMR locus, OPO06(1100y) (0.5 cM), OPT06(480) (3.3 cM) and AGG/CAA(125) (5.5 cM), were cloned and converted into SCAR markers. Markers AH1R(850) and AHR(920y) were found to be allelic and converted into the co-dominant marker ScAH1 (16.3 cM). Two previously known DNA markers, ScOPE16(1600) and A5(420y,) were mapped at 9.6 and 23.0 cM from the PMR locus, respectively. The novel markers identified in this study are currently being transferred to a new F2 mapping population derived from a cross between the induced PMR mutant line F(er1mut2) and a more genetically distant susceptible line of Pisum sativum var. arvense