A Soluble Form of the Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells-1 Modulates the Inflammatory Response in Murine Sepsis

The triggering receptor expressed on myeloid cells (TREM)-1 is a recently discovered receptor expressed on the surface of neutrophils and a subset of monocytes. Engagement of TREM-1 has been reported to trigger the synthesis of proinflammatory cytokines in the presence of microbial products. Previously, we have identified a soluble form of TREM-1 (sTREM-1) and observed significant levels in serum samples from septic shock patients but not controls. Here, we investigated its putative role in the modulation of inflammation during sepsis. We observed that sTREM-1 was secreted by monocytes activated in vitro by LPS and in the serum of animals involved in an experimental model of septic shock. Both in vitro and in vivo, a synthetic peptide mimicking a short highly conserved domain of sTREM-1 appeared to attenuate cytokine production by human monocytes and protect septic animals from hyper-responsiveness and death. This peptide seemed to be efficient not only in preventing but also in down-modulating the deleterious effects of proinflammatory cytokines. These data suggest that in vivo modulation of TREM-1 by sTREM peptide might be a suitable therapeutic tool for the treatment of sepsis

Etude de l'activité des antibiotiques sur propionibacterium acnes impliqué dans les infections neuro-méningées

NANCY1-SCD Medecine (545472101) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

Des ERG et des Hommes... (Et le bactériologiste dans tout ça ?)

La résistance aux antibactériens a officiellement commencé le jour de la première administration d une molécule antibiotique, et restera probablement un compagnon de route pour une durée indéterminée (tant que les Hommes et les bactéries cohabiteront ?). L année 2008 marque les 20 ans de la publication du 1er rapport d isolats cliniques d ERV (Entérocoques Résistants à la Vancomycine). Depuis ces 1ers cas, les ERV ou ERG (Entérocoques Résistants aux Glycopeptides) ont émergé comme d importants pathogènes nosocomiaux, stimulant une intense recherche pour élucider à la fois l épidémiologie, les mécanismes de la résistance et les facteurs de risque responsables de l apparition et de la dissémination de ces pathogènes, généralement considérés comme peu virulents. L objet de ce mémoire est d appréhender une épidémie à ERG du point de vue du bactériologiste. Le développement de méthodes sensibles et spécifiques pour le dépistage des colonisations ou infections à ERG, chez un nombre important de patients, simple et facile à mettre en oeuvre, est indispensable au contrôle de la dissémination de ces pathogènes hautement résistants aux antibiotiques. Les méthodes de PCR temps réel ont fait l objet d un développement important ces dernières années, en particulier pour le dépistage de BMR telles que les ERG, mais ces techniques sont souvent beaucoup trop coûteuses et complexes pour être mises en œuvre lors d une épidémie. Ces techniques n étaient pas implantées dans notre laboratoire au moment de la résurgence de l épidémie, et demandaient trop de matériel et de mises au point, pour être installées en urgence. Devant les progrès récents en terme de substrats chromogéniques spécifiques, possédant une sensibilité suffisante pour détecter les ERG au sein d une flore intestinale polymorphe et abondante, nous avons opté pour cette option, tout en gardant la PCR multiplex comme technique de confirmation. Le milieu chromID VRE (bioMérieux) nous a particulièrement séduit, puisque l incorporation de deux substrats chromogènes, cibles de deux enzymes spécifiques de E. faecalis (a-glucosidase) et de E. faecium (b-galactosidase), permet une identification présomptive de ces deux espèces. Au travers des différentes études menées au sein de notre laboratoire, nous avons montré que ce milieu nous permet d allier sensibilité (avec une lecture après 48 h d incubation), spécificité (à l aide de la coloration de Gram, permettant d éliminer la grande majorité des faux positifs), facilité d utilisation et de lecture. En association cette méthode classique de culture à la Biologie Moléculaire (PCR multiplex permettant identification et recherche des gènes de résistance, en confirmation), nous avons mis en place un schéma permettant un dépistage efficient des patients porteurs d ERG, dans les meilleurs délais.NANCY1-Bib. numérique (543959902) / SudocSudocFranceF

Intérêt d'un milieu chromogène pour la détection des variants à petites colonies de Staphylococcus aureus (Epidémiologie bactérienne des patients atteints de mucoviscidose suivis au Centre de Ressources et de Compétences de la Mucoviscidose de Nancy en 1997 et en 2007)

La mucoviscidose (ou fibrose kystique du pancréas) est la plus fréquente des maladies génétiques touchant les populations caucasiennes. Elle résulte du dysfonctionnement du gène codant la protéine CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) qui joue un rôle dans le transport des ions chlorure. Au cours de cette affection, l'atteinte pulmonaire est quasiment constante et se caractérise par une détérioration progressive des fonctions respiratoires. Cette évolution est expliquée par la survenue d'épisodes infectieux répétés et liés à l'existence de micro-organismes colonisant de manière chronique le tractus respiratoire de ces patients.Le but de ce travail était d'étudier et de comparer les flores bactériennes respiratoires chez les patients mucoviscidosiques suivis au Centre de Ressources et de Compétences de la Mucoviscidose (CRCM) de Nancy en 1997 et 2007. Nous avons également évalué l'intérêt du milieu chromogène SAID (bioMérieux) pour la détection des "Staphylococccus aureus small colony variants" (SCV SA) en routine. Nous avons réalisé une étude rétrospective des données bactériologiques obtenues après analyse des prélèvements respiratoires des patients suivis au CRCM de Nancy en 1997 (n = 148) et en 2007 (n = 227). Une étude comparant les performances de deux milieux (gélose Columbia ANC additionnée de 5% de sang mouton et gélose SAID) pour la détection des SCV SA a été effectuée sur 122 prélèvements consécutifs obtenus chez 108 patients. La fréquence des bactéries isolées respectivement en 1997 et 2007 était de 70.9% et 65% pour Haemophilus spp., 58,1% et 58,1% pour S. aureus, 45,2% et 36,5% pour Pseudomonas aeruginosa, 9,5% et 2,2% pour Burkholderia cepacia, 3,3% et 3% pour Stenotrophomonas maltophilia, 1,4% et 3% pour Achromobacter xylosoxidans et 8,8% et 4,8% pour les autres bacilles à Gram négatif non fermentants. La résistance aux antibiotiques de P. aeruginosa observée respectivement en 1997 et en 2007 était de 30,8% et 58% pour la pipéracilline - tazobactam, 37,7% et 57% pour la ceftazidime, 36,5% et 58,5% pour l'imipénème, 40% et 42,7% pour la ciprofloxacine. Pour S. aureus, nous avons observé en 1997 et 2007, des taux de résistance respectifs de 12,2% et 27,4% pour la méticilline, 28,7% et 80,1% pour l'érythromycine, 14,7% et 37,7% pour la lincomycine, 3,4% et 19,2% pour la rifampicine et pour l'acide fusidique. La sensibilité est restée relativement stable pour la gentamicine, la pristinamycine, le cotrimoxazole et la minocycline. Entre 1997 et 2007, nous avons observé une relative stabilité de la fréquence d'isolement des principales espèces bactériennes habituellement isolés chez les patients mucoviscidosiques (P. aeruginosa, Hæmophilus spp. et S. aureus) et une diminution significative de celle appartenant au complexe B. cepacia. L'utilisation du milieu SAID a permis d'augmenter la sensibilité de détection des SCV SA.NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocNANCY1-Bib. numérique (543959902) / SudocSudocFranceF

Typage moléculaire du complexe d'espèces Fusarium solani et détermination de son mécanisme de résistance au voriconazole

Le complexe d'espèces Fusarium solani regroupe des champignons phytopathogènes également impliqués en pathologie humaine dans des infections parfois profondes et souvent de mauvais pronostic. Dans un premier temps, une méthode de MLST, s'appuyant sur 5 gènes de ménage a donc été développée. Validée sur 51 isolats épidémiologiquement distincts, cette méthode stable et reproductible présente un pouvoir discriminant de 99,1 %. Après comparaison à la technique de référence utilisée en phylogénie, un schéma consensus à 8 loci a été proposé. Dans un second temps, une étude de la sensibilité de ce pathogène à l'amphotéricine B et au voriconazole a été menée par deux techniques d'évaluation des CMI : microdilution CLSI M38-A2 et bandelettes E-test. Devant le paradoxe entre une sensibilité diminuée in vitro au voriconazole et la recommandation de cette molécule pour le traitement curatif de la fusariose humaine, des mécanismes de résistance ont été exploré. L'hypothèse d'un phénomène d'efflux n'a pas été retenue alors que celle d'une modification de la cible, la 14 alpha stérol déméthylase, peut être envisagée après la description de différentes mutations pour les isoformes CYP51A, B et CFusarium solani species complex includes phytopathogenic fungi also involved in human infections with poor prognosis. Firstly, MLST method, based on five housekeeping genes has been developed. This method has been validated on 51 isolates epidemiologically distinct, and has been shown to be stable and reproducible and provides a discriminating power of 99.1%. After comparison with the reference technique used in phylogeny, a consensus method with 8 loci has been proposed. Secondly, a study of the susceptibility to amphotericin B and voriconazole has been conducted with two MIC determination methods : CLSI M38-A2 microdilution and E-test. The paradox between decreased susceptibility to voriconazole in vitro and recommendation of this molecule for the curative treatment of Fusarium infections has lead to the exploration of resistance mechanisms. The hypothesis of an efflux phenomenon has not been retained whereas a change in the target, the sterol 14 alpha demethylase may be considered following the description of different mutations on proteins CYP51A, B and CMETZ-SCD (574632105) / SudocNANCY1-Bib. numérique (543959902) / SudocNANCY2-Bibliotheque electronique (543959901) / SudocNANCY-INPL-Bib. électronique (545479901) / SudocSudocFranceF

Metronidazole resistance and nim genes in anaerobes: A review

International audienceAcquired resistance to metronidazole, a 5-nitroimidazole drug largely used worldwide in the empirical treatment of infections caused by anaerobes, is worrisome, especially since such resistance has been described in multidrug-resistant anaerobic bacteria. In anaerobes, acquired resistance to metronidazole may be due to a combination of various and complex mechanisms. Among them, nim genes, possibly located on mobile genetic elements, encode nitro-imidazole-reductases responsible for drug inactivation. Since the first description of Nim proteins about 25 years ago, more nim genes have been identified; currently 11 nim genes are known (nimA to nimK). Mostly reported in Bacteroides fragilis group isolates, nim genes are now described in a variety of anaerobic genera encompassing the 4 main groups of Gram-negative and Gram-positive bacilli and cocci, with variable expression ranging from phenotypically silent to low-level or high-level resistance to metronidazole. This review describes the trends of metronidazole resistance rates among anaerobes over the past 20 years and summarizes current knowledge on mechanisms involved in this resistance. It also provides an update on the phylogenetic and geographical distribution of nim genes, the mechanisms involved in their expression and regulation, and their role in metronidazole resistance

Desulfovibrio spp. dans la maladie parodontale (Interactions avec les cellules épithéliales KB et activité de l'amoxicilline libre ou complexée sur ces formes extracellulaires et intracellulaires)

Il a été suggéré que les Desulfovibrio, qui sont des bactéries anaérobies sulfato-réductrices, pourraient être impliqués dans les parodontites. Nous avons évalué le pouvoir invasif de Desulfovibrio vis-à-vis de cellules épithéliales et leur capacité à induire la production de cytokines par ces cellules. Nous avons montré que Desulfovibrio desulfuricans et Desulfovibrio fairfieldensis sont capables d'envahir et de se multiplier dans les cellules épithéliales buccales (cellules KB). La localisation intracytoplasmique de ces deux bactéries a été confirmée par microscopie confocale et électronique à transmission. L'internalisation de ces souches était dépendante de la polymérisation des microtubules mais pas de celle de l'actine. L'infection avec Desulfovibrio était responsable d'une augmentation de la production d'IL-6 et d'IL-8 par les cellules KB. La capacité de D. desulfuricans et de D. fairfieldensis à survivre dans les cellules épithéliales et à moduler leur réponse immunitaire pourrait contribuer au développement des maladies parodontales. Desulfovibrio ainsi que d'autres parodontopathogènes peuvent produire des ß-lactamases et sont capables d'envahir les cellules épithéliales. Il a été suggéré que l'hydrolyse de l'amoxicilline pourrait être évitée grâce à l'utilisation d'un complexe amoxicilline-ß-cyclodextrine (ßCD) et que la diffusion intracellulaire d'agents antimicrobiens pourrait être améliorée après complexation avec des ßCD. Un complexe stable amoxicilline-ßCD, caractérisé après analyse spectrale et thermique, n'a ni amélioré l'activité de l'amoxicilline vis-à-vis de souches produisant des ß-lactamases ni augmenté la diffusion intracellulaire de ce composé.It has been suggested that Desulfovibrio, which are sulfate-reducing anaerobic bacteria, may be involved in periodontitis. We investigated the capacity of Desulfovibrio to invade epithelial cells and induce cytokine secretion from these cells. We showed that Desulfovibrio desulfuricans and Desulfovibrio fairfieldensis were able to invade and to multiply within oral epithelial cells (KB cells). Intracytoplasmic location of both bacteria was confirmed by confocal laser scanning and transmission microscopy. Invasion of these strains involved microtubule but not microfilament polymerization. Infection by Desulfovibrio resulted in an increase of the production of IL-6 and IL-8 by KB cells. The ability of D. desulfuricans and D. fairfieldensis to survive within oral epithelial cells and to modulate the epithelial immune response may contribute to the initiation and progression of periodontal diseases. Desulfovibrio as well as other periodontopathogens may produce ß-lactamases and have the capacity to invade epithelial cells. It has been suggested that the hydrolysis of amoxicillin might be prevented by using an amoxicillin-ß-cyclodextrin (ßCD) complex and that intracellular diffusion of antimicrobial agents might be enhanced after complexation with ßCDs. A stable [1:1] amoxicillin-ßCD complex, characterized by spectroscopic and thermal analysis, did neither improve the activity of amoxicillin against ß-lactamase producing strains nor enhance the intracellular diffusion of this compound.NANCY1-Bib. numérique (543959902) / SudocSudocFranceF

A sequence database analysis of 5-nitroimidazole reductase and related proteins to expand knowledge on enzymes responsible for metronidazole inactivation

International audiencenim genes are associated, in combination with other factors, with acquired resistance to metronidazole (MTZ) in anaerobes. These genes encode 5-nitroimidazole reductase enzymes (Nim proteins) that reduce MTZ into an inactive compound. Eleven variants (nimA to nimK) are currently described in anaerobes with either a chromosomal or a plasmidic location. Mostly found in members of the Bacteroides fragilis group, nim genes were demonstrated in anaerobic taxa outside the phylum Bacteroidetes. Nitroreductase enzymes, weakly related to those found in Bacteroidetes but associated with MTZ inactivation, were also characterized both in anaerobic and non-anaerobic taxa. Published data only poorly reflect the growing number of data from cultivation-independent studies and sequences deposited in databases. Considering this limitation, we performed herein an analysis of the sequence databases with the aim to increase the current knowledge on Nim protein distribution and diversity. The 250 sequences the most closely related to the 11 known Nim proteins were selected and analyzed for identity level and phylogenetic relationships with Nim A to K proteins. The analysis revealed a larger diversity of anaerobic species harboring known Nim proteins than that currently described in the literature. Putative new variants of known Nim proteins and novel Nim proteins were found. In addition, nitroreductase proteins and homologs related to the pyridoxamine 5'-phosphate oxidase family were found in highly diverse anaerobic and aerobic taxa of human but also animal and environmental origin. On the other hand, we found a very low number of sequences recovered from metagenomic studies. Considering the different databases currently available to identify antimicrobial resistance genes (ARG) among metagenomic sequences, we hypothesized that this may, at least in part, be related to the incompleteness of ARG databases because none of them includes the 11 described nim genes at the time of our study. Both the wide distribution of proteins with potential MTZ inactivation ability within the bacterial world and a wider diversity of Nim determinants than expected from published literature is underlined in this sequence database analysis

Efficacy of Sulforaphane in Eradicating Helicobacter pylori in Human Gastric Xenografts Implanted in Nude Mice

Sulforaphane, an isothiocyanate abundant in the form of its glucosinolate precursor in broccoli sprouts, has shown in vitro activity against Helicobacter pylori. We evaluated the effect of sulforaphane in vivo against this bacterium by using human gastric xenografts in nude mice. H. pylori was completely eradicated in 8 of the 11 sulforaphane-treated grafts. This result suggests that sulforaphane might be beneficial in the treatment of H. pylori-infected individuals