Validation of CSF free light chain in diagnosis and prognosis of multiple sclerosis and clinically isolated syndrome: prospective cohort study in Buenos Aires

Background: The objective was to evaluate the precision of kappa and lambda free light chains (KFLC and LFLC) in CSF for the diagnosis of multiple sclerosis (MS) and prognosis of clinically isolated syndrome (CIS). Methods: CSF and serum samples from CIS, MS and other neurological non-MS disease were collected between 2015 and 2017. FLC concentrations were measured using immunoassay Freelite™. Results were correlated with the patients’ diagnoses and ROC curve analysis was used to determine accuracy. In CIS patients, analysis of FLC were compared in CIS converters vs. non-converter during follow-up. Results: In the MS group (n = 41), the optimal cut-off for KFLC determined was 7 mg/L, with a diagnostic sensitivity and specificity of 95% and 97%, respectively. The optimal cut-off for LFLC was 0.7 mg/L, with a diagnostic sensitivity and specificity of 71% and 81%, respectively. 36 CIS patients were included; mean follow-up time was 28 ± 9 months, and 22 (61.1%) patients converted to MS. The median concentration of CSF K and LFLCs at CIS diagnosis was slightly higher in CIS-converters compared to non-converters, but this did not reach statistical significance (KFLC: median 7 ± 5.3 mg/L vs. 5 ± 2.3 mg/L, p = 0.11; LFLC 0.7 ± 0.33 mg/L vs. 0.5 ± 0.23 mg/L p = 0.16). A strong correlation was observed between the concentration of K and L FLCs at diagnosis and the change in PBVC during follow-up (r = 0.72 and r = 0.65, respectively). Conclusion: KFLCs have a high sensitivity and specificity for the diagnosis of MS. FLC concentrations at CIS diagnosis were not significantly higher in CIS-converters.Fil: Sáez, María Soledad. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Rojas, Juan Ignacio. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Lorenzón, María Victoria. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Sánchez, Francisco. Hospital Italiano; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Patrucco, Liliana. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Míguez, Jimena. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Azcona, Carolina. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Sorroche, Patricia. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Cristiano, Edgardo. Hospital Italiano; Argentin

Western blot parcialmente desnaturalizante de Transtirretina en plasmas de portadores de la mutación V30M

La transtirretina humana (TTR) es una proteína homotetramérica esencial para el transporte de tiroxina y retinol en individuos sanos. Mutaciones puntuales, particularmente substituciones de valina por metionina en posición 30 (V30M), desestabilizan los complejos de TTR y dan lugar a la liberación de monómeros (14 Kd, TTRm), responsables de la creación de depósitos amiloideos en el intersticio de tejidos cardiacos y cerebrales. El análisis en Western inmunoblot de plasmas humanos desnaturalizados por alta temperatura (95 C°, 10 minutos) en presencia del detergente iónico dodecyl sulfato de sodio (SDS) y utilizando anticuerpos monoclonales (Mabs) contra la molécula total o suero policlonal p71/98 dirigido contra la secuencia de aminoácidos 71 a 98 de TTR, detectan la presencia de TTRm, tanto en individuos positivos (portadores) como negativos para la mutación V30M. El suero policlonal p71/98 también identifica un polipéptido de 55-60 KD (TTRt) que corresponde a tetrámeros de TTR resistentes al tratamiento combinado de SDS y alta temperatura. El procesamiento de las muestras en presencia de SDS, pero a temperatura ambiente,(desnaturalización parcial) produce un notable incremento de TTRt y desaparición paralela de la banda correspondiente a TTRm en plasmas de individuos normales, pero no en plasma de portadores V30M-positivos, en los que TTRm continúa siendo claramente detectable. Los resultados sugieren que una simple modificación en el procesamiento de las muestras plasmáticas puede convertir al Western inmunoblot en una herramienta de utilidad para el screening de plasmas de portadores de ésta y otras mutaciones desestabilizantes de la estructura multimérica de TTR en el laboratorio clínico.Human transthyretin (TTR) is a homotetrameric protein essential for the transport of thyroxine and retinol in plasma of healthy individuals. Point mutations, mainly a substitution of valine to methionine at position 30 (V30M), result in disruption of TTR complexes and release of TTR monomers responsible for building amyloid deposits in the interstice of heart and brain tissues. Denaturing immunoblot analysis of plasma samples, with either monoclonal antibodies (MAbs) raised against the whole TTR molecule or with monospecific serum directed to the C-terminal track containing amino acid residues 71 to 98 (p71/98), readily identified the 14 Kd monomeric form of TTR in both V30M mutant-carrier and in non-carrier individuals. P71/98 also identified a 55-60 Kd polypeptide (TTRt) corresponding to a fraction of TTR tetramers that either escape disruption by the combined use of SDS and heat treatment and/or refolded during the first stages of PAGE/SDS running. A milder treatment avoiding the heating of plasma samples prior to immunoblot resulted in a notable increase in TTRt and disappearance of monomeric TTR in samples from V30M-negative individuals but not in those from V30M-positive carriers where free TTR monomers are systematically detected by p71/98 serum. Our results suggest that minimizing the TTR complex disruption before PAGE-SDS/ immunoblot analysis could be simple strategy to sort plasmas from V30M-positive and V30M-negative individuals in the clinical laboratory.Fil: Cardini, Juan. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Saez, Maria Soledad. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Llanos, Macarena. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Sorroche, Patricia Beatriz. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Lorenzón, María Victoria. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Wilda, Maximiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; Argentina. Ministerio de Producción y Trabajo. Secretaría de Gobierno de Agroindustria. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Centro de Virología Animal. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Virología Animal; ArgentinaFil: Grigera, Pablo Rafael. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; Argentina. Ministerio de Produccion y Trabajo. Secretaria de Gobierno de Agroindustria. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Centro de Virologia Animal. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Virologia Animal.; Argentin