PRESENCIA DE CARACOLES LYMNAEIDAE CON FORMAS LARVARIAS DE Fasciola hepatica EN ALTITUDES SOBRE LOS 4000 MSNM EN LA SIERRA SUR DEL PERÚ

The objective of the study was to determine the presence of F. hepatica larvae and the species of snails that are intermediary hosts of F. hepatica in altitudes over 4000 m above the sea level (masl). The study covered three altitudes (4000-4200, 4200-4300, 4300-4500 masl) and was collected 150 snails per each altitude during the rainy season (January-March, 2004). The area is part of La Raya Experimental Research Station of San Antonio de Abad University, Cusco. Fifty snails were used for measuring the shell, 50 for observing the reproductive organs and the radula to identify the species, and 50 to observe the larva forms of Fasciola hepatica. Snails found at 4000-4200 masl were of the Lymnaea viatrix species and at 4200-4500 of the Pseudosuccinea columella species. The level of infestation with larva forms of Fasciola hepatica was 48, 46 and 36% at 4000-4200, 4200-4300, and 4300-4500 masl respectively, and this shows that the parasite can survive over 4000 masl. The relationship between level of infestation and altitude was inversely proportional.El objetivo del estudio fue determinar la presencia de formas larvarias de F. hepatica y las especies de caracoles hospederos intermediarios de F. hepatica en altitudes superiores a 4000 msnm. Se trabajó en tres altitudes (4000 a 4200, 4200 a 4300, y 4300 a 4500 msnm) colectándose 150 caracoles por cada altitud en la época de lluvias (enero-marzo) del 2004. El área pertenece a la Estación Experimental de la Raya, Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco. Se utilizaron 50 caracoles para la medición de la concha, 50 para observar el aparato reproductor y la rádula a fin de identificar las especies, y 50 para verificar la presencia de formas larvarias de Fasciola hepatica. Se encontró caracoles de la especie Lymnaea viatrix entre 4000 a 4200 msnm y de la especie Pseudosuccinea columella entre 4200 a 4500 msnm. El porcentaje de infestación de los caracoles con las formas larvarias de Fasciola hepatica fue de 48, 46 y 36% a 4000-4200, 4200-4300, y 4300-4500 msnm, respectivamente, demostrando que el parásito puede sobrevivir sobre los 4000 msnm. La relación entre el nivel de infestación y altitud fue inversamente proporcional

AVANCES EN EL ESTUDIO DE LA PATOGÉNESIS Y PREVENCIÓN DE LA ENTEROTOXEMIA DE LAS ALPACAS.

The results of our recent research work on enterotoxemia in Peruvian alpacas are presented. Microbiological and molecular analyses found that the majority of the isolates corresponded to Clostridium perfringens and contained the cpa coding gene for α toxin (A genotype) while 0.4% contained both the cpa and cpb genes of the α and β toxins (C genotype). A parallel study revealed that 8.5% of the genotype A isolates also had cpb2, but the cpe (enterotoxin) gene was absent in all cases. These results highly suggest that the exotoxins secreted by C. perfringens are the virulent factors in enterotoxemia, rather than the endogenous enterotoxin. Additionally, an histopathological study of intestinal samples from fatal cases showed that 30.6% had abundant immature structures of Eimeria macusaniensis affecting deep mucosa and cryptic gland epithelia, primarily in the jejune and ileum, suggesting that eimeriosis is likely a triggering or predisposing factor for the development of enterotoxemia. The microbiological studies allowed the design and progressive improvement of an inactivated enterotoxemia vaccine containing primarily the bacterial component plus exotoxins of types A, Aβ2 and C isolated from natural fatal cases of the disease. During six years of field tests in southern Peru, the vaccine has steadily reduced specific neonatal mortality rates due to enterotoxemia from 19.5% (2000, without vaccine) to less than 5% in 2006.Se revisan las investigaciones recientes realizadas por nuestro grupo de investigadores sobre enterotoxemia de las alpacas en el Perú. Estudios microbiológicos y moleculares demostraron que la mayoría de las cepas aisladas fueron de Clostridium perfringens y estas contienen únicamente el gen cpa de la toxina α (C. perfringens genotipo A) y solamente el 0.4% tienen genes cpa y cpb de las toxinas α y β (genotipo C). En análisis paralelo, se encontró que el 8.5% de los genotipos A contenían, adicionalmente, el gen cpb2, pero ninguna cepa tenía el gen cpe de la enterotoxina. Estos resultados evidencian que las exotoxinas secretadas, y no las endotoxinas (cpe), serían los probables factores de virulencia clostridiales en la enterotoxemia de la alpaca. Adicionalmente, en el análisis histopatológico de intestinos infectados, el 30.6% de las muestras presentó abundantes estructuras parasitarias inmaduras correspondientes a Eimeria macusaniensis, afectando la mucosa y epitelio de las glándulas crípticas intestinales, sugiriendo a las infecciones coccidiales como uno de los posibles factores desencadenantes o predisponentes de la enterotoxemia. Estos resultados microbiológicos permitieron diseñar, preparar y mejorar una vacuna convencional inactivada que contiene, mayoritariamente, componentes bacterianos y exotoxinas A, Aβ2 y C aislados de casos fatales de la enfermedad. Desde su introducción en una empresa alpaquera del sur peruano en 2001, la vacuna ha logrado reducir progresivamente los índices de mortalidad por enterotoxemia de 19.5% (2000, sin vacuna) hasta alcanzar tasas menores al 5% en 2006

Desarrollo de un PCR para la Identificación del Parásito Dawestrema (Trematoda: Monogenea) en el Pez Arapaima gigas

Studies in the Amazonian species Arapaima gigas («paiche») have demonstrated the presence of Dawestrema cycloancistrium monogenean parasite in high parasite loads, mainly in stages between 180 and 365 days of age. D. cycloancistrium adheres to the gills causing a decrease in the degree of oxygenation and stress on the fish predisponing to disease presentation. This study aimed to develop a molecular diagnostic technique for D. cycloancistrium in order to aply it in the management of the fish biodiversity. For this purpose, 200 specimens of D. cycloancistrium were collected, DNA was extracted and quantified, primers were designed and a PCR was developed. The amplification of a sequence of 236 bp of the Dawestrema monogenean was obtained.Estudios realizados en la especie amazónica Arapaima gigas (“paiche”) han demostrado la presencia del parásito monogeneo Dawestrema cycloancistrium en altas cargas parasitarias, principalmente en los estadios comprendidos entre los 180 y 365 días de edad. D. cycloancistrium se adhiere principalmente a las branquias, ocasionando una disminución del grado de oxigenación y estrés en el pez, predisponiéndolo a la presentación de enfermedades. El presente estudio tuvo por objetivo desarrollar una técnica de diagnóstico molecular frente a D. cycloancistrium para su aplicación como medida de control en el manejo de la biodiversidad del paiche. Se recolectaron 200 especímenes de D. cycloancistrium, realizándose la extracción de ADN, cuantificación, diseño de cebadores y elaboración del PCR. Se logró la amplificación de la secuencia 236 pb del monogeneo Dawestrema

ANÁLISIS In vitro e in vivo DE SOBREDONANTES CRUDOS DE Clostridium perfringens AISLADOS DE CASOS DE ENTEROTOXEMIA EN ALPACAS.

In the present study, 24 native supernatants isolated from enterotoxemia fatalities were evaluated to characterize lecitinase, hemolytic, in vitro cytotoxicity, and in vivo enterotoxicity activities of the phospholipase C (Cp-PLC) exotoxin. The lecitinase activity was monitored in microplates using egg white emulsifications, the hemolityc and perfringolisine in microplates using sheep and equine eritrocytes respectively, the cytotoxic activity was tested on HEp-2 cells and the enterotoxicity by inoculating within intestinal loops of rabbits. At the molecular level, all the isolates (12 vegetative and 12 sporulated) were found to contain the cpa gene (genotype A), while six also contained cpb2 gene but none had the cpe gene. These isolates were classified, according the lecitinase activity, as high, medium and low producer strains. Most of the vegetative (66.6%) isolates had high and medium Cp-PLC production profiles, whereas all of the sprorulated ones were low producers. All high lecitinase production strains were citotoxic to HeP2 cells and the highest hemolytic activities (24.0 ± 8.4 u.a.h). Although the 66.6% (n=16) of the isolates induced intestinal fluid accumulations (0.12-0.47 mL/cm) none of the 24 isolates was able to produce intestinal lesions similar to enterotoxemia. The native supernantants showed presence of other toxins with hemolytic, citotoxic and enterotoxin activities similar to the Cp-PLC, CPE and â2 toxin that warrant further investigation to elucidate their possible role in the etiopathogenecity of enterotoxemia in alpacas.Se reportan evaluaciones de sobrenadantes bacterianos (nativos) crudos obtenidos de 24 aislados de C. perfringens de casos fatales de enterotoxemia buscando caracterizar propiedades lecitinasas, hemolíticas, citotóxicas in vitro y enterotóxicas in vivo de la exotoxina fosfolipasa C (Cp-PLC). Los aislados (12 en estados vegetativos y 12 esporulados) contenían el gen cpa (genotipo A), y seis de ellos tenían además el gen cpb2, pero todos carecían del gen de la enterotoxina (cpe). Las actividades lecitinasas fueron evaluadas, en microplacas, usando emulsiones de yemas de huevo; las hemolíticas y perfringolisina en microplacas, usando eritrocitos de carnero y de equino respectivamente; las citotóxicas, en células HEp-2; y las enterotóxicas en conejos inoculados intraintestinalmente. Los aislados fueron clasificados, de acuerdo a los niveles de la actividad lecitinasa, en cepas de alta, mediana y baja producción de Cp-PLC. La mayoría de aislados (66.6%) en estados vegetativos mostraron perfiles de alta y mediana producción de Cp-PLC, mientras que la totalidad de los esporulados fueron de baja producción. Todos los aislados altamente productores de Cp-PLC fueron citotóxicos y mostraron las mayores actividades hemolíticas (24.0 ± 8.4 u.a.h). A pesar de que el 66.6% (n=16) de los aislados indujeron acumulación de fluido intestinal (0.12-0.47 mL/cm), ninguno fue capaz de generar lesiones intestinales en conejos, similares a las descritas en la enterotoxemia. Los sobrenadantes crudos de los aislados evidenciaron la presencia de otras toxinas tipo hemolisinas, citotoxinas y enterotoxinas, distintas a Cp-PLC, CPE y toxina â2, que necesitan ser investigadas a fin de elucidar su posible rol en la etiopatogénesis de la enterotoxemia en alpacas