Perfil de expressão de integrinas em linfócitos T de pacientes em diferentes fases de infecção por HTLV-1

Submitted by Repositório Arca ([email protected]) on 2019-07-11T14:09:42Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Approved for entry into archive by Raquel Dinelis ([email protected]) on 2019-07-30T18:55:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 lila_janahu_ioc_dout_2017.pdf: 3535762 bytes, checksum: 4b10477430d818cc4d2dd443064ad92d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Made available in DSpace on 2019-07-30T18:55:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 lila_janahu_ioc_dout_2017.pdf: 3535762 bytes, checksum: 4b10477430d818cc4d2dd443064ad92d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2017Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.O HTLV-1 tem sido fortemente relacionado há décadas a uma doença neurológica, Mielopatia associada ao HTLV-1/Paraparesia Espástica Tropical (HAM/TSP), uma neuropatia crônica progressiva caracterizada por envolvimento bilateral do trato piramidal e inflamação crônica da medula espinhal, com comprometimento perivascular e infiltração parenquimatosa de células mononucleares. Células infectadas pelo HTLV-1 migram através da camada endotelial por indução da expressão do receptor de adesão e seus ligantes, afetando tanto a migração celular como a proliferação. A detecção viral no SNC dos pacientes HAM/TSP demonstra a capacidade do HTLV-1 em atravessar a barreira hemato-encefálica, e seu provável envolvimento na patogênese da doença. A importância desses mecanismos, no entanto, permanence pouco esclarecida. Objetivos: foram analisadas a expressão de integrinas da cadeia alfa (CD49d, CD49e e CD49f) na superfície de subpopulações de células T de pacientes infectados por HTLV-1. Métodos: 82 indivíduos, sendo 67 portadores de HTLV-1 (18 HAM/TSP e 49 oligoassintomáticos) mais 15 controles saudáveis de áreas endêmicas do Pará (Brasil) foram investigados clínica e imunologicamente. Para análise das integrinas foram utilizados anticorpos monoclonais humanos (CD3-V500, CD4-APC-Cy7, CD8-APC, CD49d-PeCy5, CD49e-PE, CD49f-FITC) (BD Biosciences) para Citometria de Fluxo (Cytoflex Flow Cytometer, Beckman Coulter inc, CA, EUA) Além disso foram realizadas dosagem de citocinas inflamatórias e análise de células T regulatórias. Resultados: Nos aspectos clínicos, o grupo oligoassintomático apresentou várias manifestações, com distúrbios urinários predominantes. Nos achados imunológicos, CD4+CD49dhi e CD8+CD49dhi encontravam-se hiper expressos em ambos os grupos de indivíduos infectados quando comparados ao grupo controle. Conclusão: integrinas estão hiper expressas na infecção por HTLV-1 tanto em indivíduos oligoassintomáticos quanto nos portadores HAM/TSP e com isso modificam a permeabilidade da membrana. Nossos resultados sugerem que este aumento de expressão pode estar diretamente associado com a habilidade dos linfócitos T em infiltrar o tecido nervoso, tanto em indivíduos oligo/assintomáticos quanto em HAM/TSP, função esta possivelmente relacionada ao desenvolvimento das manifestações neurológicas. Tais resultados apontam para o potencial uso da integrina CD49d como alvo para desenvolvimento de estratégias terapêuticas de indivíduos infectados por HTLV-1, com objetivo de bloquear a migração de linfócitos T ativados para o sistema nervoso central e impedir a progressão para HAM/TSP.HTLV-1 is a retrovirus transmitted via cell-to-cell contact through body fluids, such as blood products, semen and breast milk. It has been strongly related to a neurological disease, Myelopathy associated with HTLV-1 / Tropical Spastic Paraparesis (HAM / TSP), which is a chronic progressive myelopathy characterized by bilateral involvement of the pyramidal tract with sphincter disorders and chronic inflammation of the spinal cord, perivascular and parenchymatous infiltration of mononuclear cells. Cells infected by HTLV-1 migrate through the endothelial layer by inducing the expression of the adhesion receptor and its ligands, affecting both cell migration and proliferation. SNC viral detection of HAM/TSP patients demonstrates the ability of HTLV-1 to cross the blood-brain barrier, thus such damage is likely to be involved in the pathogenesis of the disease. The importance of these mechanisms, however, remains unclear. Objectives: We studied the expression of alpha chain integrins (CD49d, CD49e and CD49f) on the surface of T-cell subpopulations of HTLV-1 infected patients. Methods: 82 subjects, of whom 67 were seropositive to HTLV-1 (18 HAM / TSP and 49 oligo-symptomatic) and 15 healthy controls from the endemic areas of Pará (Brazil) were clinically and immunologically investigated. To analyze integrins we used human monoclonal antibodies (CD3-V500, CD4-APC-Cy7, CD8-APC, CD49d-PeCy5, CD49e-PE, CD49f-FITC) (BD Biosciences) for Flow Cytometry (Cytoflex Flow Cytometer, Beckman Coulter Inc., CA, USA). In addition, inflammatory cytokine dosing and regulatory T cell analysis were performed. Results: In the clinical aspects, the oligo-symptomatic group presented several manifestations, with predominant urinary disorders. In the immunological findings, CD4+CD49dhi and CD8+CD49dhi were over expressed in both groups of infected individuals when compared to the control group. Conclusion: Integrins are over expressed in HTLV-1 infection in both oligo-symptomatic individuals and HAM/TSP carriers and thereby modify the transmembrane potential. Our results suggest that this increase in expression may be directly associated with the ability of T lymphocytes to infiltrate nervous tissue, both in oligo/asymptomatic individuals and in HAM/TSP, a function that is likely related to the development of neurological manifestations. These results point to the potential use of the CD49d integrin as a target for the development of therapeutic strategies for individuals infected with HTLV-1, in order to block the migration of activated T lymphocytes to the central nervous system and to prevent the progression to HAM / TSP