Dinâmica populacional de minicírculos de cinetoplastos em Leishmania infantum chagasi

Leishmaniose Visceral Americana (LVA) é uma doença tropical negligenciada em expansão no Brasil, ocorrendo em áreas onde antes não havia registro. Seu agente etiológico e a Leishmania chagasi um protozoário pertencente à classe Kinetoplastida caracterizada por uma organela denominada cinetoplasto a qual possui um DNA organizado em uma rede contendo maxicírculos, responsáveis pelas funções respiratórias e minicírculos, envolvidos na pordução de RNAs-guia, os quais possuem um papel importante na edição dos RNAs dos maxicírculos. Os minicírculos são divididos em uma região convervada de aproximadamente 120 p.b. e uma região variável de aproximadamente 600 p.b. O foco desse estudo está na análise das seqüências da região variável a fim de entender sua distribuição nos diferentes estágios de vida da L. chagasi. As amostras foram coletadas de cães e pacientes sintomáticos por aspiração dos linfonodos e, em alguns casos, foram obtidas culturas primárias. A extração do DNA foi realizada com o kit comercial Nucleo Spin Blood Kit (Macherey - Nagel) seguindo as instruções do protocolo. O kDNA foi amplificado por PCR, utilizando o par de oligonucleotídeos LIN R4 - forward (5’-GGT TGG TGT AAA ATA GGG-3) e LIN 19 - reverse (5’-GAA CGC CCC TAC CCG-3’), produzindo um fragmento de aproximadamente 720 p.b. Os produtos da PCR foram clonados no vetor pTZ57R/T de acordo com o protocolo do InsTAclone PCR cloning kit. As seqüências (aproximadamente 182) foram individualmente comparadas com as depositadas no GenBank, alinhadas com o software Clustal X2 e tiveram uma árvore filogenética construída utilizando o software MEGA 4.0 adotando o algoritmo UPGMA e escolhendo um bootstrap com 1000 replicatas. A distribuição entre os diferentes hospedeiros foi homogênea. A princípio, um lato polimorfismo é observado, mas...American Visceral Leishmaniasis (AVL) is a neglected tropical disease in expansion in Brazil currently occurring in areas where there has never been reports. Its etiologic agent is Leishmania chagasi, a protozoan belonging to the order Kinetoplastida characterized by an organelle named kinetoplast wich has a DNA organized in a network containing maxicircles, responsible for respiratory functions and minicircles, involved in the production of guide RNAs, which play a role in the RNA editing of maxicircles. The minicircles are divided into an approximately 120 b.p. conserved region and an approximately 600 b.p. variable region. The focus of this study is on the sequence analysis of the minicircles variable region in order to understand its distribution on different life stages of L. chagasi. Samples were collected from dogs and symptomatic patients by lymphonod aspiration and, in some cases, primary cultures were obtained. DNA extraction was carried out with the commercial kit Nucleo Spin Blood Kit (Macherey - Nagel) following its protocol. kDNA was amplified by PCR, using a pair of oligonucleotides LIN R4 - forward (5’-GGT TGG TGT AAA ATA GGG-3) and LIN 19 - reverse (5’-GAA CGC CCC TAC CCG-3’), producing a fragment of 720 b.p. PCR products were cloned in pTZ57R/T vector according to the InsTAclone PCR cloning kit protocol. Sequences (182) were individually compared with the ones deposited at the GENBANK, aligned with Clustal X2 software and had a phylogenetic tree constructed utilizing MEGA 4.0 software adopting UPGMA algorithm and choosing bootstrap with 1000 replicates. Sequences distribution among different hosts was homogeneous. At first, high polymorphism is observed but, when analyzed in more detail, i.e. by branch, sequences proved to be conserved and minimal SNP (Single Nucleotide Polymorphism) was found... (Complete abstract click electronic access below)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Estrutura populacional de Lutzomya longipalpis através da amplificação e sequenciamento do segmento ribossomal 12S de DNA mitocondrial

A leishmaniose visceral americana (LVA) é, primariamente, uma zoonose crônica, tendo como agente etiológico, nas Américas, protozoários da espécie Leishmania chagasi. Sua transmissão, inicialmente silvestre ou concentrada em pequenas localidades rurais, já ocorre em centros urbanos. É um crescente problema de saúde pública no Brasil sendo uma endemia em franca expansão geográfica. Está distribuída em 19 dos 27 Estados da Federação, atingindo quatro das cinco regiões brasileiras. Entre 1985 e 2000, a leishmaniose atingiu no Brasil 422,5 mil pessoas. O contínuo crescimento antrópico desordenado vivenciado nas grandes áreas urbanas do Estado de São Paulo, ocasiona em um gradativo aumento de áreas onde as condições precárias de moradia contribuem para o aumento da população de flebotomíneos. A região oeste do Estado de São Paulo registrou em 1998, pela primeira vez, um caso de cão infectado. A doença em cães, desde o primeiro registro, já foi notificada em 45 municípios, ocorrendo em seis regiões administrativas: Araçatuba, Bauru, Marília, Presidente Prudente, São João da Boa Vista e Grande São Paulo. Em humanos, até junho de 2006, a doença já havia sido registrada em 34 municípios das regiões de Araçatuba. Bauru, Marília e Presidente Prudente. A espécie Lutzomyia longipalpis até junho de 2006 foi detectada em zona urbana de 68 municípios das regiões administrativas de Araçatuba, Bauru, Marília e Presidente Prudente, e mais recentemente na região de São João da Boa Vista, no município de Espírito Santo do Pinhal. Desde então, a sua expansão vem sendo verificada a partir da adaptação do vetor em municípios vulneráveis. A importância do estudo da população destes insetos é para potencializar o combate e a erradicação de tal moléstia, além de incentivar esforços no sentido preventivo quanto a atividades sanitárias...American visceral leishmaniasis (AVL) is a chronic zooanotic disease that can affect the humans and is caused by Leishmania chagasi. Its transmission first was in wild areas or small agricultural localities, but recently it occurs in urban centers. It is an increasing problem in the Public Health in Brazil. It is distributed in 19 of 27 states of this country. Between 1985 and 2000 the AVL reached 422, 5 thousand people. The continuous and disordered population growth in big urban centers at São Paulo state leads increase gradual areas where precarious conditions of habitation contribute to an increasing of vector population. The first register of AVL in this state was in 1998, an infected dog case. Since this first register, the disease was informed in 45 cities, divided in 6 administrative regions: Araçatuba, Bauru, Marília, Presidente Prudente, São João da Boa Vista e Grande São Paulo. In humans even 2006 June was registered in 34 cities around Araçatuba region. The specie Lutzomyia longipalpis was detected in urban areas of 68 cities of the: Araçatuba, Bauru, Marília e Presidente Prudente and more recently São João da Boa Vista region. Since then its expansion comes being noticed with a vector adaptation in vulnerable cities. The studies about population this insect is important to control and eradicate the AVL, beyond stimulating efforts to prevention in detriment of sanity providences actuality utilized that involve animals sacrifices. However evidences have been accumulated that Lutzomyia longipalpis isn’t single specie but is species complex in the nature. The objective this study was to compare different Brazilian populations of Lutzomyia longipalpis by amplification and sequencing the12S rDNA mitochondrial to study intra-specifics variations to understand the history of introduction this disease in São Paulo state and control your vector in Brazil.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Leishmania infantum Genetic Diversity and Lutzomyia longipalpis Mitochondrial Haplotypes in Brazil

Leishmania infantum is the etiological agent of visceral leishmaniasis (VL) in the Americas with domestic dogs being its major reservoir hosts. The main VL vector is the sandfly Lutzomyia longipalpis, while other Lutzomyia species may play a role in disease transmission. Although the genetic structure of L. infantum populations has been widely evaluated, only a few studies have addressed this subject coupled to the genetic structure of the respective sandfly vectors. In this study, we analyzed the population structure of L. infantum in three major VL endemic areas in Brazil and associated it with Lutzomyia longipalpis geographic structure