Influence des voies de réparation de l'ADN sur la sensibilité à un nouvel agent alkylant monofonctionnel antitumoral, le S23906

Le S23906 est un nouvel agent alkylant monofonctionnel antitumoral qui se lie de façon covalente à la guanine N2 au niveau du petit sillon de la double hélice d ADN et qui possède une large activité antitumorale dans les modèles animaux. L objectif de ma thèse est de caractériser l interaction des adduits S23906 avec les protéines de réparation de l ADN et la synthèse macromoléculaire. Dans un premier temps, nous avons montré que les adduits S23906 sont des substrats privilégiés pour le mécanisme de réparation par excision de nucléotides (NER) et que les lignées déficientes pour les différentes protéines du NER sont très sensibles au S23906. En accord avec ceci, les cellules avec une résistance acquise au composé ont une l activité NER plus prononcée et une augmentation de l expression des protéines XPC, CSB et XPA. Dans un second temps, nous avons caractérisé le devenir des adduits S23906 non réparés. Nous avons montré que ces adduits sont convertis en cassures double brin par la synthèse macromoléculaire et que celles-ci sont très toxiques pour la cellule. Les cassures double brin sont réparées par recombinaison homologue (HR), et les cellules déficientes pour les protéines de la HR, en particulier BRCA2, sont très sensibles au S23906. Enfin, nous avons montré que contrôler la progression de la phase S du cycle cellulaire peut moduler la sensibilité au composé. Ces résultats nous ont permis de caractériser la prise en charge des adduits S23906 et suggèrent que le profil des protéines de réparation de l ADN pourrait servir de marqueur de prédiction de l activité du S23906PARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Résistance naturelle et acquise à l'irofulvene, un nouvel agent anticancéreux en développement clinique

LE KREMLIN-B.- PARIS 11-BU Méd (940432101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Influence de l'exposition prolongée à l Irinotecan sur la biologie des cellules cancéreuses colorectales (implications thérapeutiques)

L irinotecan est un agent anticancéreux majeur utilisé dans le traitement du cancer du côlon où il agit à la fois comme un agent causant des dommages à l ADN et un inhibiteur de l angiogenèse. L activité de l irinotécan dans les cancers colorectaux est limitée par le développement d une résistance acquise au médicament. Le but de ce travail est de caractériser l influence d une exposition prolongée à l irinotécan sur la biologie des cellules cancéreuses colorectales in vivo et in vitro. Résultats majeurs : Nous avons exposé les cellules de cancer colorectal, HT-29 (LOH) et HCT-116 (MSI), au SN-38 (le métabolite actif de l'irinotécan) pendant un an. Ceci a permis de sélectionner des cellules résistances à l irinotécan et ceci de manière stable. Une caractérisation plus approfondie a révélé que la résistance acquise à l irinotécan était accompagnée d altérations multiples, y compris la diminution de la formation de complexes clivables et de cassures double brins. Nos études ont montré des changements inattendus dans la distribution du cycle cellulaire et la vitesse de croissance des deux lignées résistantes. La pertinence in vivo de nos modèles cellulaires a ensuite été confirmée dans des modèles de xénogreffe.D autres résultats basé sur l inhibition de l angiogenèse montrent que l'exposition prolongée à l irinotécan est accompagnée d une modification majeure de la voie HIF, VEGF / VEGFR dans les cellules tumorales. Ces travaux ont permis d identifier des modifications biologiques dans les cellules résistantes susceptibles de les rendre plus résistantes ou sensibles à d autres classes d agents anticancéreux afin de proposer de nouvelles combinaisons thérapeutiques.Ce travail est financé par l Institut National du CancerColorectal cancer (CRC) is one of the most common tumors and a leading cause of cancer death worldwide. Until recently, fluorouracil in combination with leucovorin was the only effective systemic treatment for CRC. During the last few years, four new treatments have been approved for advanced CRC including the topoisomerase I (topo I) inhibitor irinotecan, the epidermal growth factor receptor (EGFR)-directed monoclonal antibody cetuximab and the vascular endothelial growth factor (VEGF)-directed monoclonal antibody bevacizumab. Unfortunetly their clinical activity is often limited by the development of resistance. Several lines of experimental evidence suggest a functional interaction between topo I and EGFR. Furthermore, topo I can regulate hypoxia-inducible factor 1 alpha (HIF-1alpha), a key regulator of cellular response to hypoxia, leading to VEGF production.We propose to study the EGFR-signaling pathway on the cellular response to cytotoxic agents with the topo I inhibitor irinotecan/SN-38 as model.Resistant cells were obtained by culturing HT-29 and HCT-116 cells in increasing concentrations of irinotecan. After obtaining, their drug resistance was 5 to 25 times increased compared to the parental cells. We first showed that the proliferation of the two resistant cell lines was slower than the sensitive ones. We were able to confirm it with different in vitro and in vivo experiment. It is interesting to notice that topo I expression was unchanged in our resistant cell lines. We then demonstrated that the resistant cells are less affected by the formation of DNA strand breaks (led by SN38) than the sensitive ones. Moreover, the EGFR expression is increased in the resistant cell lines. We also shown by western blot and ELISA that resistance development comes along with an increase of VEGF.Our data should provide important clues on the irinotecan acquired resistant cells and should help to set up new combinations for colorecal cancer treatment.PARIS5-Bibliotheque electronique (751069902) / SudocPARIS-BIUM-Bib. électronique (751069903) / SudocSudocFranceF

L'enzastaurine, un nouvel inhibiteur sélectif de la protéine kinase Cb pour le traitement des cancers colorectaux

L'enzastaurine est un nouvel inhibiteur de protéine kinase C (PKC) qui est sélectif pour l'isoforme bêta II (PKC-bII). La PKC-bII joue un rôle dans l initiation et la progression du cancer colorectal (CCR) et est également impliquée dans l'angiogenèse tumorale. Dans cette étude, nous montrons que l'enzastaurine est cytotoxique sur un large panel de cellules humaines d adénocarcinome colique à des concentrations pharmacologiques. Il n y a aucune corrélation entre la sensibilité à l enzastaurine et le niveau d expression de la protéine PKC-bII. En revanche, le statut LOH/CIN est associé à une plus grande sensibilité à l enzastaurine par comparaison au phénotype MSI/MIN. L enzastaurine induit un arrêt du cycle cellulaire en G1 ou en G2/M, inhibe les phosphorylations des protéines GSK3-b, p90RSK, p70S6k, de la protéine ribosomale S6 et du facteur de survie Akt/PKB. De façon inattendue, l enzastaurine entraîne, de façon transitoire, une nette augmentation de la phosphorylation de ERK1/2. In vivo, l enzastaurine montre une activité modeste sur l inhibition de la croissance de xénogreffe tumorale malgré l importante inhibition de l angiogenèse ainsi que d Akt/PKB. L absence d activité anti-tumorale est probablement due à l activation de ERK1/2, un autre acteur majeur des voies de survie dans le CCR. Ce travail a permis de mettre en évidence de nouvelles activités de la PKC-b et de l enzastaurine dont une boucle de rétrocontrôle inattendue entre PKC-b et ERK1/2. De plus, notre étude suggère que des combinaisons thérapeutiques associant l enzastaurine à des inhibiteurs de ERK1/2 pourraient avoir un rationnel clinique.PARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Etude de l'altération de la réponse aux radiations ionisantes par deux inhibiteurs de tyrosine kinase (Le STI571 (GLivec®) et le BIBW 2992)

LE KREMLIN-B.- PARIS 11-BU Méd (940432101) / SudocSudocFranceF

L'exposition prolongée de cellules de cancer colorectal aux agents chimiothérapeutiques induit une Transition Epithélio-Mésenchymateuse (EMT) et une augmentation de l'invasivité tumorale

Le cancer colorectal (CCR) est un problème majeur de santé publique puisque chaque année on dénombre plus d un million de nouveaux cas dans le monde. Malgré les efforts mis en place pour l amélioration des traitements, de nombreux patients meurent de ce cancer, suite au développement de résistances vis-à-vis des chimiothérapies. Les 3 principales classes de composés cytotoxiques utilisés en chimiothérapie pour le traitement du CCR sont le 5-fluorouracile (5-FU), l oxaliplatine et l irinotecan. L exposition clinique à ces agents anticancéreux est souvent associée à l apparition d une progression tumorale, rendant la tumeur plus agressive. Les déterminants moléculaires responsables de l acquisition de résistance, et du phénotype agressif qui lui est associé, restent peu connus à ce jour. L objectif de ce travail de thèse a donc été de caractériser l influence d une exposition prolongée au 5-fluorouracile, à l oxaliplatine et à l irinotecan, sur la biologie des cellules de CCR in vitro et in vivo. Ainsi, deux lignées d adénocarcinomes coliques ont été rendues résistantes au 5-fluorouracile, à l oxaliplatine et à l irinotecan. Les six lignées résistantes ont montré des changements morphologiques drastiques caractéristiques d une perte du phénotype épithélial, ainsi qu une augmentation du pouvoir de migration et d invasion in vitro. Toutes les lignées ont subies une Transition Epithélio-Mésenchymateuse (EMT) à différents degrés, et faisant intervenir des voies de signalisation différentes. Cette EMT a été conservée in vivo, et s est traduite par une augmentation du pouvoir métastatique des tumeurs établies à partir des cellules de CCR résistantes aux cytotoxiques. Pour la première fois, nous montrons que la résistance acquise à différents médicaments cytotoxiques induit une EMT, qui augmente l invasivité des cellules de CCR à la fois in vitro et in vivo. Cette étude nous a permis d élucider les mécanismes mis en place par les cellules de CCR afin d échapper à l action des médicaments utilisés en clinique et de proposer de nouvelles stratégies thérapeutiques afin de contourner cette résistance et l invasivité qui en résulte.PARIS-BIUSJ-Biologie recherche (751052107) / SudocSudocFranceF

Breast-Associated Adipocytes Secretome Induce Fatty Acid Uptake and Invasiveness in Breast Cancer Cells via CD36 Independently of Body Mass Index, Menopausal Status and Mammary Density

International audienceBreast adiposity is correlated with body mass index, menopausal status and mammary density. We here wish to establish how these factors influence the cross-talk between breast adipocytes and normal or malignant breast cells. Adipocyte-derived stem cells (ASCs) were obtained from healthy women and classified into six distinct groups based on body mass index, menopausal status and mammary density. The ASCs were induced to differentiate, and the influence of their conditioned media (ACM) was determined. Unexpectedly, there were no detectable differences in adipogenic differentiation and secretion between the six ASC groups, while their corresponding ACMs had no detectable influence on normal breast cells. In clear contrast, all ACMs profoundly influenced the proliferation, migration and invasiveness of malignant breast cells and increased the number of lipid droplets in their cytoplasm via increased expression of the fatty acid receptor CD36, thereby increasing fatty acid uptake. Importantly, inhibition of CD36 reduced lipid droplet accumulation and attenuated the migration and invasion of the breast cancer cells. These findings suggest that breast-associated adipocytes potentiate the invasiveness of breast cancer cells which, at least in part, is mediated by metabolic reprogramming via CD36-mediated fatty acid uptake

Treatment of substance-related problems in Switzerland: implementing a new harmonised monitoring system

OBJECTIVES: In the past, five different monitoring systems were used in the various areas of the care supply for substance-related problems in Switzerland, without any real coordination between them. In 1999, a project aiming at the harmonisation of these five monitoring systems was launched by federal agencies. A further aim was to ensure compatibility with the Treatment Demand Indicator (TDI) adopted as European standard. METHODS: The different steps of the conceptualisation process and their rationales are described. They involve a first phase of consultation among all key players, a second phase of preliminary realisation according to the target criteria, a third phase of probation by the application of a pilot survey, and a last phase of consolidation and adjustments before the official implementation. RESULTS: A comprehensive and flexible monitoring system was settled for all fields of the addiction care in Switzerland. It consists of a fully standardised pool of core items to be shared by the five treatment sectors as well as optional items intended for specific needs. The practical aspects of the implementation, like data protection, organisation of data collection, and valorisation of the results are presented. The first experiences in the different treatment sectors are also reported. CONCLUSION: The implementation of "act-info" is still an ongoing process that began in 2003. Since 2005, the new monitoring system is well implemented in three out of five treatment sectors, whereas its introduction proves more challenging in the two remaining sectors. Perspectives of improvement regarding coverage and data quality are proposed