Estudio de la función de SFRP1 en la ontogenia de los linfocitos T y en la patogenia de la leucemia T linfoblástica aguda

Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 21-07-2017Esta tesis tiene embargado el acceso al texto completo hasta el 21-01-2019La señalización a través de Notch1 juega un papel fundamental en la determinación de linaje T y la diferenciación intratímica, pero su desregulación provoca la transformación oncogénica de los timocitos en desarrollo dando lugar a la leucemia T linfoblástica aguda (T-ALL). Estudios recientes han demostrado que la señalización a través de Nocth1 es modulada negativamente durante el proceso de neurogénesis de retina de ratón por Sfrp1, un regulador de la vía de Wnt capaz de unirse a la metaloproteasa ADAM10 e inhibir su actividad. Teniendo en cuenta que la activación de Notch1 depende de ADAM10 en los timocitos en desarrollo, el objetivo general de este estudio fue establecer si Sfrp1 era capaz de regular tanto la diferenciación de las células T como la patogénesis de la T-ALL dependientes de Notch1. Aproximaciones experimentales de pérdida de función utilizando ratones mutantes Sfrp1-/- revelaron que Sfrp1 regula los números de timocitos y la dinámica de diferenciación durante dos estadios madurativos consecutivos, antes e inmediatamente después de la selección-β. En etapas tempranas de la ontogenia (E15,5), los timos Sfrp1-/- presentan un incremento en los números de timocitos, que sobre-expresan el IL-7R, una conocida diana de Notch1, pero además presentan un incremento en la apoptosis y una diferenciación acelerada. Un día después, la pérdida de Sfrp1 impide el resacate de la apoptosis y la expansion de los timocitos que han superado la selección-β, provocando un bloqueo en la transición de los progenitors DN al estadio DP. Sin embargo, el defecto en el desarrollo de los embriones Sfrp1-/- es superado en los ratones adultos, que aún así presentan una pérdida significativa de los progenitors intratímicos más inmaduros, reflejando su diferenciación acelerada. Aproximaciones de ganancia de función fueron empleadas para estudiar el papel de SFRP1 en la patogénesis de la T-ALL mediada por NOTCH1. Nuestros resultados mostraron que la sobre-expresión de SFRP1 en líneas celulares humanas T-ALL dependientes de NOTCH1 y en T-ALLs primarias resulta en una disminución en la activación de NOTCH1 y en la proliferación celular in vitro, además de impedir la progresión tumoral in vivo. Apoyando el papel de SFRP1 durante la patogénesis de la TALL, "next generation sequencing" de los exones codificantes de SFRP1, nos permitió identificar una mutación en SFRP1, y análisis epigenéticos revelaron quince regiones hipermetiladas en SFRP1, sugiriendo que existe una regulación epigenética de la expresión de SFRP1 en la T-ALL humana. En resumen, nuestro estudio aporta evidencias de que la estrecha regulación de la señalización de Notch por Sfrp1 juega un papel esencial durante el desarrollo de los linfocitos T y en la patogénesis de la T-ALL, posicionando a Sfrp1 como una prometedora diana terapéutica para el tratamiento de la T-ALL dependiente de Notch