Biochemical studies on chick embryo during incubation (Agricultural Chemistry)

孵卵中の卵白のシアル酸およびトリプシン阻害活性の変化を追求した。シアル酸濃度は日と共に徐々に増加し, インヒビター活性は, 最初減少したのち増加し, それ以後は変化しなかった。孵卵数日にして形成される漿尿膜(CAM)は, 強いシアリダーゼ活性を有し, 卵白のシアロタンパク質であるオボムチンやオボムコイドからシアル酸を遊離させた。またCAM自身もシアル酸を有し, 自らもシアル酸を遊離させる。微生物由来のシアリダーゼで処理したCAMは非常に強いシアリダーゼ活性を示したが, これは加えたシアリダーゼが膜と強く結合するものと考えられる。シアロタンパク質とCAMの結合が, オボムコイドの示すトリプシン阻害活性をもって間接的に, ^Iによる標識で直接的に検討された。用いたオボムコイド, オボムチン共に脱シアル酸処理をしたCAMとよく結合し, 逆に脱シアル酸処理したタンパク質は, そのままのCAMとよく結合した。The change of sialic acid content and trypsin inhibitory activity of chicken egg white during incubation were studied. The sialic acid concentration of egg white slightly increased during incubation, indicating the absorption of sialo-proteins of egg white into embryo occurred later than that of others. In early period of incubation, trypsin inhibitory activity rapidly and extensively decreased and after this period, trypsin inhibitory activity was kept at approximately constant level. Neuraminidase (sialidase) of chorioallantoic membrane (CAM) was able to release the endogenous sialic acid and showed the strong activity toward exogenously added ovomucoid and ovomucin. When neuraminidase was mixed with CAM in a buffer, sialic acid at the membrane surface was removed. Added neuraminidase remained bound at the surface of CAM despite of sufficient washing and shows strong activity on sialo-proteins. The experiments for CAM-sialo-protein binding showed that desialylated proteins (desialylated ovomucoid and ovomucin) bound to native CAM in greater amount than to desialylated CAM. Further, it was found that native sialo-proteins (native ovomucoid and ovomucin) bound to desialylated CAM rather than native CAM. ^I-labelled sialo-proteins were prepared and used in these binding experiments

Optical studies on the purified eggplant trypsin inhibitor (Agricultural Chemistry)

ナス果皮より均一に精製したトリプシン・インヒビターについてその光学的性質を検討した。各種pHにおいて, 紫外吸収スペクトルを測定したがpH 3.1から9.4の範囲では, チロシンおよびフェニールアラニン残基による同じスペルトルを示したが, pH 10以上ではチロシン残基のイオン化による著しい変化が認められた。またアミノ酸分析で確認されているようにトリプトフアンを含まないことは, 紫外吸収スペルトルからも明らかであった。275nmで励起した蛍光スペクトルが測定されたが, pH 3.1から9.4の範囲では蛍光強度は, ほゞ一定であり10以上で減少した。またCDスペクトルの測定結果はこのインヒビターが, ほとんどヘリックス構造やβ-構造を含まないことを示している

Changes of Bovine κ-Casein Stored in Various Solutions (Agricultural Chemistry)

UHT滅菌乳の変質改良のための基礎データの蓄積, あるいは, 乳たん白質の保存特性の解明を目的として, 14種類の水溶液中に牛乳κ-カゼインを保存し, 保存によるκ-カゼインの諸性質の変化を検討した。即ち, 10% glucose水溶液, 10% lactose水溶液, 10% maltose水溶液, 10% sucrose水溶液, 2% NaCl水溶液, 2% glycine水溶液, 蒸留水, 10% glucose-4.5M urea, 10% lactose-4.5M urea, 10% maltose-4.5M urea, 10% sucrose-4.5M urea, 2% NaCl-4.5M urea, 2% glycine-4.5M urea, 4.5M ureaの各溶液に, κ-カゼインを0.25%(w/v)となるように溶解し, それらを5℃で保存した。κ-カゼインの保存状態を, α_-カゼイン安定化能, 4.5M尿素を含むディスクゲル電気泳動, セファアクリルS-300ゲルロ過クロマトグラフィー, フリーアミノ基およびスルフヒドリル基の定量によって検討した。α_-カゼイン安定化能は, 経時的に低下した。10% maltose水溶液中, 6ケ月保存では70.2%の安定化能を示したが, sucrose溶液中では沈殿が生じた。ゲル電気泳動では, κ-カゼインの分解と高分子化が同時進行していることが示唆された。一方, ゲルロ過クロマトグラフィーでは, 尿素を含まない保存液の場合は, ほとんど変化は観察されず, 尿素存在下保存の場合は, self-association能の低下が観察された。κ-カゼインの分解や高分子化は, フリーアミノ基およびスルフヒドリル基の定量から, 交互に進行し, アミノカルボニル反応やジスルフィド結合によるものと考えられた。Changes of bovine κ-casein stored in various solutions were followed by the stabilizing ability test for α_-casein in the presence of calcium ion, disc gel electrophoresis containing 4.5M urea, Sephacryl S-300 gel filtration chromatography, the determinations of free amino group and sulfhydryl group for the sake of accumulating the fundamental data for the improvement of denaturation of ultra high temperature sterilized milk and making clear the preservative characteristics of milk proteins. κ-Casein was stored at 5℃ as the solution dissolved in the following solutions; 10% glucose, 10% lactose, 10% maltose, 10% sucrose, 2% NaCl, 2% glycine, distilled water, 10% glucose-4.5M urea, 10% lactose-4.5M urea, 10% maltose-4.5M urea, 10% sucrose-4.5M urea, 2% NaCl-4.5M urea, 2% glycine-4.5M urea and 4.5M urea. The stabilizing ability was lost with the passage of time. κ-Casein stored in 10% maltose solution for 6 monthes had 70.2% of stabilizing ability, while 10% sucrose for 5 monthes began to precipitate. The results of electrophoreses indicated that the hydrolysis and polymerization of κ-casein progress at the same time. The lowering of self-asscoiation ability was observed by the gel chromatography of κ-casein stored in solutions containing urea. It was considered that the polymerization of κ-casein was due to the disulfide bond and the amino-carbonyl reaction

Studies on the neuraminidase from chick chorioallantoic membranes (Agricultural Chemistry)

孵卵17日目の鶏胚の漿尿膜(CAM)よりシアロ糖タンパク質をリチウム3,5-ジョードサルチル酸(LIS)やドデシル硫酸(SDS)を用いて可溶化した。LISによって可溶化されたタンパク質は, 微生物由来のシアリターゼによって加水分解されてシアル酸を遊離した。このことはCAM自体が膜シアリダーゼの基質になっている可能性を示唆している。SDSによって可溶化されたタンパク質は, 酵素の一般的阻害剤であるSDSを完全に除去することが難かしく, 加水分解されなかった。デオキシコール酸を用いて, CAMよりシアリダーゼを可溶化し, ゲル滬過とCM-Sephadex C-50によるイオン交換クロマトグラフィーによって部分精製した。可溶化した酵素はCAMより単離したタンパク質, オボムコイド, ムチン, フエツイン, コロミン酸, シアリルラクトーズなどを基質として, その性質を検討した。最適pHは4.3で60℃以上の加熱で急に失活した。コロミン酸とフエツインに対してKmやVmax値を求め, また各種カチオンの効果も検討した。The sialoglycoproteins were extracted from the chorioallantoic membranes (CAM) of 17 days-old chick embryo using lithium 3,5-diiodosalicylate (LIS) and sodium dodecyl sulfate (SDS). The sialoglycoprotein prepared from CAM with LIS was hydrolyzed by bacterial neuraminidase accompanied with the release of sialic acid. However, the sialoglycoprotein extracted by SDS from membranes was not hydrolyzed becuase of the existence of SDS which was a strong inhibitor of the enzyme. The solubilization of the neuraminidase (N-acetylneuraminylhydrolase, E. C. 3. 2. 1. 18) from the chorioallantoic membranes was carried out with the following solution : 0.1 M sodium phosphate buffer, pH 7.0,0.1 M KCl, 25% glycerol, 1 mM 2-mercaptoethanol, 0.5% deoxycholic acid sodium salt. Solubilized enzyme was partially purified by the gel filtration (Sephadex G-75) and the ion exchange chromatography (CM-Sephadex C-50). Neuraminidase activities of the intact CAM and solubilized enzyme from CAM were measured using sialoglycoproteins from CAM, chicken ovomucoid, mucin, fetuin, colominic acid, sialyllactose and ganglioside as substrate. The pH optimum was at 4.3 and a marked loss of enzyme activity was observed by heating at 60℃ and above for 60 min. Km and Vmax values were determined for colominic acid and fetuin. Though Ca^ did not affect the enzyme activity, Cu^ and Hg^ inhibited the activity extensively