INTRATUMORAL AMPLIFICATION HETEROGENEITY IN HER2/neu-POSITIVE BREAST CANCER MOLECULAR-GENETIC SUBTYPES

The defining feature of HER2/neu-positive Luminal B and HER2/neu-positive (non-luminal) subtype breast cancer is HER2/neu gene amplification and protein overexpression on cancer cell membrane. The HER2-targeted therapy is nowadays available for patients with HER2-positive breast cancer However, a significant fraction of HER2+ tumors acquire or possess intrinsic mechanisms of resistance, based on multiple factors, and genetic heterogeneity among them. The aim of our study was to quantify the heterogeneity of HER2/neu amplification in HER2/neu-positive Luminal B and HER2/neu-positive (non-luminal) subtypes of breast cancer. Material and methods. A retrospective analysis of 210 cases referred for dual probe fluorescence in situ hybridization (FISH) confirmation of an immunohistochemical equivocal 2+ result was performed. Results. Our results demonstrated a heterogeneous amplification pattern of HER2/neu gene, whose expression is a substantial cause of HER2/neu-positive Luminal B and HER2/neu-positive (non-luminal) subtypes of breast cancer, in 31 % of invasive breast cancer cases. As heterogeneous, we interpreted tumors containing cells with HER2/CEP17 ratio < 2 and gene copies 4 ≤ HER2/neu < 6, that is, those without HER2/neu amplification. The amount of heterogeneous tumors between HER2/neu-positive Luminal B and HER2/neu-positive (non-luminal) subtypes was not statistically significant. ROC analyses identified optimal cutoff point for HER2/CEP17 ratio as 2.6 for distinguishing heterogeneous tumors. Conclusion. The heterogeneity of HER2/neu amplification is determined by FISH in 31 % of cases and is independent of molecular breast cancer subtype. If a HER2/neu-positive breast cancer has HER2/CEP17 ratio ≤ 2,6, it contains minor subclones without HER2/neu amplification with a probability of 95 %. Our results demonstrated that HER2/neu amplification heterogeneity may be important for prognosis of survival and treatment decisions

Achievements and prospects of cellular technologies based on the activated lymphocytes in the treatment of malignant tumors

This article reviews the immune system and its role in the relationship between the tumor and the body of a patient with tumor diseases. It is about controlling homeostasis by recognizing and eliminating genetically alien substances (antigens). Antitumor treatment is now not only considered as an “instrument” for eliminating and destroying tumor cells, but also its ability to change/restore impaired functions of the immune system attracts attention. The used antitumor treatment is widely known to be immunosuppressive, stress and radiation effects also cause and/or enhance immunosuppression. In this work, the authors provide literature data demonstrating current status and problems of cellular immunotherapy of malignant tumors with the use of activated lymphocytes, and the role of antigen-specific T-lymphocytes as one of its most important agents is reviewed. Currently, among the immunotherapeutic methods, a special place is occupied by approaches involving the use of autologous or allogenic ex vivo stimulated immunocompetent cells (adoptive immunotherapy). The importance of complex influence on various links (T-, B-, NK-cell) and stages (presentation, recognition, proliferation, differentiation, migration, activation, effector functions) of the immune response is considered. The emergence of targeted drugs based on antibodies, as well as vaccines, especially dendritic cells, has provoked the emergence of a new wave of interest in the formation of specific antitumoral immune response mediated by T lymphocytes, so the introduction of the latter can be classified as a kind of targeted therapy. The value of antigen-specific T-lymphocytes in the formation of antitumor immunity is shown, which emphasizes the importance not only of CD8+, but also of CD4+ T-lymphocytes. In addition, there are suggestions of the possible significance of both T- and B-cells for developing a strategy of cellular immunotherapy. The literature data suggest that not only cytotoxic lymphocytes, but also T-helpers and even B-lymphocytes can be effective as antigen-specific lymphocytes as a component of antitumor treatment. The authors consider the possibility of obtaining antigen-specific T cells, as well as their further storage. The possibility of elimination or selective inhibition of regulatory T-cells during adoptive immunotherapy aimed at removing the suppressor effect on cytotoxic lymphocytes is studied. Various strategies for the use of cell therapy are also discussed

Одержання фармакопейного стандартного зразка ізопропілового естеру мигдальної кислоти

In accordance with the requirements of the International Council on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH) each monograph for a drug must include the test for related impurities. Impurities in a medicinal product may appear as initial, intermediate or side products of the synthesis and during storage.Aim. To obtain the impurity of the pregabalin substance – a high-purity isopropyl ester of mandelic acid in order to provide the domestic pharmaceutical market with the pharmacopoeial reference sample of the State Pharmacopoeia of Ukraine (RS SPhU) in the framework of the program for import substitution of reference samples.Materials and methods. To obtain RS SPhU of the mandelic acid isopropyl ester the traditional methods of organic synthesis, X-ray diffraction analysis, 1H and 13C NMR-spectroscopy, absorption spectrophotometry in the infrared region, thermogravimetry, the capillary method for determining the melting point, thin-layer and liquid chromatography were used, determination of water was performed by K. Fischer titration.Results and discussion. The simple method for the synthesis of 1-methylethyl-(2RS)-2-hydroxy-2-phenylacetate with mandelic acid and 2-propanol in the presence of catalytic amounts of inorganic acids, as well as its subsequent purification with a final yield of over 90 % have been proposed.Conclusions. As a result of the study isopropyl ester of mandelic acid has been synthesized, and the effective method of its purification providing a high degree of purity of the target compound has been selected. By its characteristics the substance obtained fully complies with the requirements of the LGC international certificate as a RS and can be used for the qualitative and quantitative determination of a related impurity in the pregabalin substance. В соответствии с условиями Международного совета по согласованию технических требований к лекарственным средствам (ICH) в каждую монографию на лекарственное средство необходимо включать тест на испытание сопутствующих примесей. Примеси в лекарственном средстве могут появляться как исходные, промежуточные или побочные продукты синтеза, так и при хранении. Цель работы – получить примесь субстанции прегабалина – изопропиловый эфир миндальной кислоты высокой чистоты для обеспечения отечественного фармацевтического рынка фармакопейным стандартным образцом Государственной фармакопеи Украины (ФСО ГФУ) в рамках программы импортозамещения стандартных образцов (СО).Материалы и методы. Для получения ФСО ГФУ изопропилового эфира миндальной кислоты использовали традиционные методы органического синтеза, рентгеноструктурный анализ, 1Н и 13С ЯМР-спектроскопию, абсорбционную спектрофотометрию в инфракрасной области, термогравиметрию, капиллярный метод определения температуры плавления, тонкослойную хроматографию и жидкостную хроматографию, а определение воды проводили титрованием полумикрометодом по К. Фишеру.Результаты и их обсуждение. Предложен простой в исполнении метод синтеза 1-метилетил-(2RS)-2-гидрокси-2-фенилацетата из миндальной кислоты и 2-пропанола в присутствии каталитического количества неорганических кислот, а также его последующей очистки с конечным выходом более 90 %.Выводы. В результате исследования синтезирован изопропиловый эфир миндальной кислоты и подобран эффективный метод его очистки, который обеспечивает высокую степень чистоты целевого продукта. По своим характеристикам полученное вещество полностью соответствует требованиям, предъявляемым к нему международным сертификатом LGC как к ФСО и может быть использовано для качественного и количественного определения сопутствующей примеси в субстанции прегабалина.Відповідно до умов Міжнародної ради з узгодження технічних вимог до лікарських засобів (ICH) до кожної монографії на лікарський засіб необхідно включати тест на випробування супутніх домішок. Домішки у лікарському засобі можуть з’являтися як вихідні, проміжні чи побічні продукти синтезу, так і при зберіганні. Мета роботи – одержати домішку субстанції прегабаліну – ізопропіловий естер мигдальної кислоти високої чистоти для забезпечення вітчизняного фармацевтичного ринку фармакопейним стандартним зразком Державної фармакопеї України (ФСЗ ДФУ) в рамках програми імпортозаміщення стандартних зразків (СЗ). Матеріали та методи. Для одержання ФСЗ ДФУ ізопропілового естеру мигдальної кислоти використовували традиційні методи органічного синтезу, рентгеноструктурний аналіз, 1Н та 13С ЯМР-спектроскопію, абсорбційну спектрофотометрію в інфрачервоній області, термогравіметрію, капілярний метод визначення температури плавлення, тонкошарову та рідинну хроматографію, а визначення води проводили титруванням за методом К. Фішера.Результати та їх обговорення. Запропонований простий у виконанні метод синтезу 1-метилетил-(2RS)-2-гідрокси-2-фенілацетату з мигдальної кислоти і 2-пропанолу в присутності каталітичної кількості неорганічних кислот, а також його наступного очищення з кінцевим виходом понад 90 %. Висновки. У результаті дослідження синтезовано ізопропіловий естер мигдальної кислоти та підібрано ефективний метод його очищення, який забезпечує високий ступінь чистоти цільової сполуки. За своїми характеристиками одержана речовина повністю відповідає вимогам, що висуваються до неї міжнародним сертифікатом LGC як до ФСЗ, та може бути використана для якісного та кількісного визначення супровідної домішки в субстанції прегабаліну.

Intermolecular interactions of decamethoxinum and acetylsalicylic acid in systems of various complexity levels

Intermolecular interactions between decamethoxinum (DEC) and acetylsalicylic acid (ASА) have been studied in the phospholipid-containing systems of escalating complexity levels. The host media for these substances were solvents, L-α-dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) membranes, and samples of human erythrocytes. Peculiar effects caused by DEC-ASА interaction have been observed in each system using appropriate techniques: (a) DEC-ASА non-covalent complexes formation in DPPC-containing systems were revealed by mass spectrometry with electrospray ionization; (b) joint DEC-ASА action on DPPC model membranes led to increasing of membrane melting temperature Tm, whereas individual drugs caused pronounced Tm decreasing, which was demonstrated by differential scanning calorimetry; (c) deceleration of DEC-induced haemolysis of erythrocytes under joint DEC-ASА application was observed by optical microscopy

AN OPTION OF HIGH CHARGE OPERATION FOR THE EUROPEAN XFEL

Abstract The 1.3 GHz superconducting accelerator developed in the framework of TESLA and the European XFEL project holds the potential to accelerate high charge electron beams. This feature has been successfully demonstrated during the first run of the free electron laser at the TESLA Test Facility with lasing driven by electron bunches with a charge of up to 4 nC. Currently DESY and the European XFEL GmbH perform revision of the baseline parameters for the electron beam. In this report we discuss a potential option of operation of the European XFEL driven by high charge (1 nC to 3 nC) electron beams. We present the results of the production and characterization of high charge electron bunches. Experiments have been performed at PITZ and demonstrated good properties of the electron beam in terms of emittance. Simulations of the radiation properties of SASE FELs show that application of high charge electron beams will open up the possibility to generate radiation pulse energies up to the few hundred milli-Joule level

Comparative DNA Cytometry of Primary and Recurrent Soft Tissue Sarcomas

The goal of comparative investigation was to reveal the distinctive features of the DNA content and cell distribution in the phases of the cell cycle of recurrent STS. DNA cytometry in the tumor tissue of 30 primary soft tissue sarcomas (t2a-2bn0M0) and 30 STS recurrences (t2-3n0M1) was carried out using the method of flow cytofluorometry. the tumor ploidy and cell distribution in the cell cycle phases were analyzed. Results. A number of differences in the DNA cytometric parameters of primary and recurrent STS have been revealed, they include: an increase in the proportion of aneuploid tumors in case of recurrence, the number of tumors with DNA index within the mitotic cycle, an increase in the proportion of cells in G2+M- phase of diploid and aneuploidy tumors and a decrease in S- phase of aneuploid ones. It has been shown that with a G2 differentiation degree, the proportion of cells in G2+M, S- and IP of recurrent STS is significantly lower than the primary parameters. An increase in the proportion of cells in G2+M- phase and a decrease in the rate of proliferation of recurrent STS, depending on the stage, are shown only in case of stage III. Conclusion. The revealed features of DNA content and cell cycle of tumor cells of soft tissue sarcomas will allow to approach to understanding of biological bases of recurrence of this malignant disease.Целью исследования было выявить в сравнительном аспекте отличительные особенности содержания ДНК и распределения клеток по фазам клеточного цикла рецидивных СМТ. Методом проточной цитофлуориметрии проводили ДНК-цитометрию в опухолевой ткани 30 первичных сарком мягких тканей (T2a-2bN0M0) и 30 – рецидивов СМТ (t2-3n0M1). анализировали плоидность опухоли и распределение клеток по фазам клеточного цикла. результаты. Выявлен ряд различий ДНК-цитометрических показателей первичных и рецидивных СМТ, которые заключаются: в увеличении доли анеуплоидных опухолей при рецидивах, числа опухолей с ИДНК в пределах митотического цикла, увеличение доли клеток в G2+M- фазе диплоидных и анеуплоидных опухолей и снижение в S-фазе анеуплоидных. Показано, что при степени дифференцировки G2 доля клеток в фазах G2+M, S- и ИП рецидивных СМТ значимо ниже параметров первичных. Увеличение доли клеток в G2+M-фазе и снижение темпов пролиферации рецидивных СМТ в зависимости от стадии показаны только при III стадии. Выводы. Выявленные особенности содержания ДНК и параметров клеточного цикла опухолевых клеток сарком мягких тканей позволят приблизиться к пониманию биологических основ рецидивирования этого злокачественного заболевания