The Netherlands

National report in reply to the questionnaire about Mutual Trust, Mutual Recognition and the Rule of Law

The Netherlands

National report in reply to the questionnaire about Mutual Trust, Mutual Recognition and the Rule of Law

Time-Lapse Imaging of the Dynamics of CNS Glial-Axonal Interactions In Vitro and Ex Vivo

Myelination is an exquisite and dynamic example of heterologous cell-cell interaction, which consists of the concentric wrapping of multiple layers of oligodendrocyte membrane around neuronal axons. Understanding the mechanism by which oligodendrocytes ensheath axons may bring us closer to designing strategies to promote remyelination in demyelinating diseases. The main aim of this study was to follow glial-axonal interactions over time both in vitro and ex vivo to visualize the various stages of myelination.We took two approaches to follow myelination over time: i) time-lapse imaging of mixed CNS myelinating cultures generated from mouse spinal cord to which exogenous GFP-labelled murine cells were added, and ii) ex vivo imaging of the spinal cord of shiverer (Mbp mutant) mice, transplanted with GFP-labelled murine neurospheres. We demonstrate that oligodendrocyte-axonal interactions are dynamic events with continuous retraction and extension of oligodendroglial processes. Using cytoplasmic and membrane-GFP labelled cells to examine different components of the myelin-like sheath, we provide evidence from time-lapse fluorescence microscopy and confocal microscopy that the oligodendrocytes' cytoplasm-filled processes initially spiral around the axon in a corkscrew-like manner. This is followed subsequently by focal expansion of the corkscrew process to form short cuffs, which then extend longitudinally along the axons. We predict from this model that these spiral cuffs must extend over each other first before extending to form internodes of myelin.These experiments show the feasibility of visualizing the dynamics of glial-axonal interaction during myelination over time. Moreover, these approaches complement each other with the in vitro approach allowing visualization of an entire internodal length of myelin and the ex vivo approach validating the in vitro data

Degeneração hepatolenticular

Após reverem os marcos fundamentais da história da moléstia de Wilson, os autores relatam 3 casos desta afecção. Dois pacientes faleceram, tendo o exame necroscópico confirmado o diagnóstico clínico-laboratorial. Entre as particularidades do quadro neurológico, sobressaía, em um caso, a existência de espasticidade em flexão e de sinais cerebelares. O anel corneano de Kayser-Fleischer apresentou-se sempre completo e bilateral. Entre os caracteres inconstantes do proteinograma do líquido cefalor-raqueano são salientadas a ausência de pré-albumina e os baixos níveis de globulinas 1 e 2. Provàvelmente pela primeira vez, foi observada redução dos valôres de fósforo e magnésio no sôro sangüíneo. O estudo das funções hepática e renal foi realizado por meio dos testes convencionais, tendo-se verificado que o comprometimento do fígado era discreto, em nítida desproporção com o grau de lesão histológica do órgão (cirrose pós-necrótica). Em relação aos rins, foi comprovada hiperaminacidúria em dois casos, associada a discreta diminuição da excreção tubular, em um deles. A análise genética pôde ser mais aprofundada em um dos casos, incluindo a pesquisa, nos seus familiares, do anel de Kayser-Fleischer, a determinação dos valôres de cobre no sangue e urina, e da ceruloplasminemia, além do estudo citogenético do paciente. O anel corneano foi comprovado em uma irmã assintomática, ocorrendo nela e em outros parentes nítidas alterações do metabolismo do cobre. O estudo do conteúdo de cobre nos tecidos confirmou os dados da literatura quanto ao acúmulo desse metal no pancreas, rins, supra-renais, fígado, substâncias branca e cinzenta do cérebro, tálamo, córtex cerebelar e núcleo lentículo-caudado, assim como níveis normais nas unhas e baixos nos cabelos. Verificação provàvelmente inédita foi o achado de acúmulo de cobre na substância negra e núcleo rubro, assim como nas glândulas submandibulares e no cerume. No líquido cefalorraqueano os valôres do cobre total se encontravam dentro dos limites normais e muito próximos dos do cobre de reação direta. Na bile, de acordo com as referências da literatura, observamos concentração de cobre normal na bile total e na fração B, e valôres diminuídos nas biles A e C. Em todos os casos verificou-se diminuição da concentração de cobre e ceruloplasmina no sangue e elevação dos valores na urina e saliva. O cobre de reação direta do soro, determinado em um caso, mostrou-se em nível relativamente alto. O estudo dos balanços metabólicos demonstrou positividade para o cobre nos períodos de contrôle, e discreta negatividade do balanço do fósforo. Após o emprego do BAL, e particularmente da D-penicilamina, o balanço do cobre se negativou e o do fósforo tornou-se mais acentuadamente negativo. Dieta hipocúprica, resinas permutadoras de cations ou sulfeto de potássio foram associados aos agentes complexantes. A melhora clínica, embora nítida no caso 3 após o uso de D-penicilamina e estrógenos, não correspondeu ao excelente resultado bioquímico

Subtle genetic changes enhance virulence of methicillin resistant and sensitive Staphylococcus aureus

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Community acquired (CA) methicillin-resistant <it>Staphylococcus aureus </it>(MRSA) increasingly causes disease worldwide. USA300 has emerged as the predominant clone causing superficial and invasive infections in children and adults in the USA. Epidemiological studies suggest that USA300 is more virulent than other CA-MRSA. The genetic determinants that render virulence and dominance to USA300 remain unclear.</p> <p>Results</p> <p>We sequenced the genomes of two pediatric USA300 isolates: one CA-MRSA and one CA-methicillin susceptible (MSSA), isolated at Texas Children's Hospital in Houston. DNA sequencing was performed by Sanger dideoxy whole genome shotgun (WGS) and 454 Life Sciences pyrosequencing strategies. The sequence of the USA300 MRSA strain was rigorously annotated. In USA300-MRSA 2658 chromosomal open reading frames were predicted and 3.1 and 27 kilobase (kb) plasmids were identified. USA300-MSSA contained a 20 kb plasmid with some homology to the 27 kb plasmid found in USA300-MRSA. Two regions found in US300-MRSA were absent in USA300-MSSA. One of these carried the arginine deiminase operon that appears to have been acquired from <it>S. epidermidis</it>. The USA300 sequence was aligned with other sequenced <it>S. aureus </it>genomes and regions unique to USA300 MRSA were identified.</p> <p>Conclusion</p> <p>USA300-MRSA is highly similar to other MRSA strains based on whole genome alignments and gene content, indicating that the differences in pathogenesis are due to subtle changes rather than to large-scale acquisition of virulence factor genes. The USA300 Houston isolate differs from another sequenced USA300 strain isolate, derived from a patient in San Francisco, in plasmid content and a number of sequence polymorphisms. Such differences will provide new insights into the evolution of pathogens.</p