The tyrosine phosphatase SHP-1 promotes T cell adhesion by activating the adaptor protein CrkII in the immunological synapse

The adaptor protein CrkII is a key regulator of T cell adhesion through the recruitment of the Rap1-guanine exchange factor, C3G. Subsequently, Rap1 activates the integrin LFA-1 leading to T cell adhesion and interaction with antigen presenting cells (APC). The interphase between T cell and APC is known as the immunological synapse (IS). It is characterized by specific organization of proteins that can be divided into central supramolecular activation clusters (c- SMAC) and peripheral supramolecular activation clusters (p-SMAC). Using TIRF microscopy and support lipid bilayers we determined that activated Rap1 was recruited to the IS. Within the IS, Rap1 was localized to the p-SMAC. C3G and the active (dephosphorylated) form of CrkII were also localized to the same compartment. In contrast, inactive (phosphorylated) CrkII was limited to the c-SMAC. We then showed that activation of CrkII and subsequent trafficking from the c-SMAC to the p-SMAC were regulated by the phosphatase SHP-1 downstream of the antigen receptor. In the p-SMAC, CrkII recruited C3G, leading to Rap1 activation and LFA-1 mediated adhesion. Functionally, SHP-1 was necessary for both adhesion and migration of T cells. Thus, we uncovered a new signaling pathway where SHP-1 acts through CrkII to reshape the pattern of Rap1 activation in the IS

Expressão gênica em resposta a deficiência nutricional em folhas resistentes e suscetíveis ao bicho-mineiro.

A resposta de defesa de cafeeiros infestados pelo bicho-mineiro (Leucoptera coffeela) é influenciado por aspectos fisiológicos entre os quais está a disponibilidade de nutrientes. Plantas resistentes podem exibir lesões foliares correspondentes ao desenvolvimento do inseto quando a lavoura tem deficiência de adubação. O conhecimento sobre a interação entre mecanismos de transporte de nutrientes e resposta de defesa ao bicho-mineiro podem contribuir na elucidação da resistência ao inseto em cafeeiros. Este estudo avaliou a expressão relativa de genes associados ao metabolismo de potássio e nitrogênio, ao estresse oxidativo e a mecanismos de defesa em mudas de cafés submetidas a condições nutricionais limitantes. Mudas de progênies resistentes e suscetíveis ao bicho-mineiro foram mantidas em soluções contendo concentrações variáveis de macronutrientes (N+K+, N+K-, N-K+, N-K-). Após o tratamento, as folhas foram coletadas para extração do RNA e posterior caracterização da expressão de genes por qRT -PCR. Genes do metabolismo de potássio apresentaram expressão diferencial entre plantas resistentes e suscetíveis. O perfil de expressão dos genes do metabolismo de Nitrogênio não apresentou diferenças entre as progênies. Além disso, genes diretamente relacionados com a defesa ao bicho-mineiro e ao estresse oxidativo apresentaram expressões diferenciais significativas entre plantas resistentes e suscetíveis. Estas análises preliminares sugerem que a regulação da absorção e/ou transporte de nutrientes não são atividades iniciais na resposta de cafeeiros, e que a ativação de mecanismos de defesa em geral é a resposta inicial à deficiência nutricional

Desenvolvimento de marcadores associados à resistência do bicho-mineiro: seleção e validação de SNPs.

O objetivo deste estudo é o desenvolvimento de marcadores do tipo SNPs associados com a resistência ao bicho-mineiro em café. A estratégia principal utilizou as análises genômicas de microarranjo, para caracterização de expressão diferencial de genes-candidatos em plantas resistentes infestadas com o bicho-mineiro. Inicialmente, análises in silico de 2137 destes genes identificaram aqueles potencialmente relacionados com a especificidade da resposta de defesa da planta. Uma vez selecionados, o perfil de expressão de 22 genes foi confirmado por qRT-PCR em experimentos utilizando plantas resistentes e suscetíveis, infectadas pelo bicho-mineiro. Para busca de polimorfismos do tipo SNPs, que poderão ser utilizados como marcadores para seleção-assistida, selecionamos 4 genes, cujas regiões genômicas foram clonadas e sequenciadas em genótipos parentais da população em estudo. Após análises in silico de sequências genômicas, os polimorfismos do tipo SNPs identificados serviram de base para construção de sondas alelo-específicas, utilizadas na genotipagem de plantas parentais e progênies em seleção. A análise de segregação de SNPs identificados indicou que nenhum dos polimorfismos avaliados apresenta correlação com a característica de resistência ao bicho-mineiro. Estes polimorfismos estão associados com alguma outra característica agronômica não avaliada neste estudo. A genotipagem de outros SNPs identificados está em andamento.Título em inglês: Development of molecular markers associated with leaf-miner resistance: selection and validation of SNPs