Вміст жирних кислот в ліпідах мезенхімних стовбурових клітин культури жирової тканини

The content of fatty acids in the lipids of mesenchymal stem cells of dog adipose tissue culture was studied. Mesenchymal stem cells of dog adipose tissue culture were obtained by culturing the primary material in a CO2 incubator with a content of 5 % CO2, at a temperature of 37 °C in DMEM medium with the addition of 10–15 % fetal bovine serum and 1 % antibiotic-antimycotic. When the confluency of the monolayer reached 70–80 %, the cells were transferred to a suspension and subcultivated in order to reduce the heterogeneity of the culture and obtain a sufficient amount of biological material. The lipids of the obtained stem cells were analyzed for the content of fatty acids by the method of thin-layer gas-liquid chromatography. Determination of the content of lipids of fatty acids in FSK of a cat was carried out by the Folch method. A mixture of fatty acid methyl esters was analyzed on a Trace GC Ultra gas chromatograph with a flame ionization detector on a capillary column SPTM –2560, 100 m x 0.25 mm ID, 0.20 μm film (Supelco). Identification of fatty acids was carried out using a standard sample of Supelco 37 Сomponent FAME Mix. Quantitative assessment of the LC spectrum was carried out by the method of normalization of the peak planes of methylated LC derivatives and their content was determined as a percentage of the total content of all LC. The conducted study of the content of fatty acids in lipids made it possible to reveal certain features of the lipid metabolism of mesenchymal stem cells cultured in dog adipose tissue. A high content of oleic acid, characteristic of cells resistant to apoptosis and with high proliferative potential, was determined; a high ratio of unsaturated linoleic to saturated stearic acid (С18:1/С18.0), which reflects the high activity of the stearoyl-coenzyme-desaturase enzyme and, indirectly, the active state of the Wnt/β-catenin signaling pathway; inability to lengthen the chain of saturated fatty acids; lack or low activity of de novo synthesis of omega-6 polyunsaturated fatty acids. 18 fatty acids were found in the composition of lipids of fetal stem cells of a cat, of the saturated ones - the most palmitic acid (33.70 ± 0.02 %), of the monounsaturated ones – oleic acid (21.63 ± 0.03 %), of the polyunsaturated ones – linoleic acid (6.45 ± 0.07 %). The least amount of cis-,11,14-eicosadienoic acid (0.04 ± 0.01 %) was found in the composition of cell lipids. The total amount of saturated fatty acids in dog mesenchymal stem cell lipids was 65.65 ± 0.02 %), unsaturated fatty acids – 34.35 ± 0.02 %. Monoene fatty acids were determined in the amount of 24.46 ± 0.02 %, and polyene – 9.89 ± 0.02 %. The ratio index of polyunsaturated fatty acids ω 3 to ω 6 is 0.40. Lipids of mesenchymal stem cells of adipose tissue culture were characterized by a lower content of monoene unsaturated fatty acids 24.46 ± 0.02; (P < 0.05), with a higher content of ω3 fatty acids 3.04 ± 0.02 %; (P < 0.05), with a lower content of ω6 fatty acids 6.86 ± 0.02 %; (P < 0.05) in contrast to lipids of red bone marrow stem cells.Досліджено вміст жирних кислот в ліпідах мезенхімних стовбурових клітин культури жирової тканини собаки. Мезенхімні стовбурові клітини культури жирової тканини собаки отримували шляхом культивування первинного матеріалу в СО2 інкубаторі з вмістом 5 % СО2, за температури 37 °С у середовищі DMEM з додаванням 10–15 % фетальної сироватки великої рогатої худоби та 1 % антибіотика-антимікотика. Коли конфлюетність моношару сягала 70–80 %, клітини переводили в суспензію та проводили субкультивування з метою зниження гетерогенності культури та отримання достатньої кількості біологічного матеріалу. Ліпіди отриманих стовбурових клітин  досліджували на вміст жирних кислот методом тонкошарової газорідинної хроматографії. Визначення вмісту ліпідів жирних кислот ФСК кота проводили методом Фолча. Суміш метилових ефірів жирних кислот аналізували на газовому хроматографі Trace GC Ultra з полум’яно-іонізаційним детектором на капілярній колонці SPTM–2560, 100 m × 0,25 mm ID, 0,20 μm film (Supelco). Ідентифікацію жирних кислот проводили за допомогою стандартного зразка Supelco 37 Сomponent FAME Mix. Кількісну оцінку спектру ЖК проводили методом нормування площин піків метильованих похідних ЖК і визначали їхній вміст у відсотках від сумарного вмісту усіх ЖК. Проведене дослідження вмісту жирних кислот в ліпідах дало можливість виявити певні особливості ліпідного обміну мезенхімних стовбурових клітин культури жирової тканини собаки. Визначено високий вміст олеїнової кислоти, характерний для клітин, резистентних до апоптозу та з високим проліферативним потенціалом; високе співвідношення ненасиченої лінолевої до насиченої стеаринової кислоти (С18:1/С18.0), яке відображає високу активність фермента стеарол-коензим-десатурази та опосередковано – активний стан Wnt/β-катенін сигнального шляху; нездатність до подовження ланцюга насичених жирних кислот; відсутність або низьку активність синтезу de novo омега-6 поліненасичених жирних кислот. У складі ліпідів фетальних стовбурових клітин кота виявлено 18  жирних кислот, з насичених – найбільше пальмітинової кислоти (33,70 ± 0,02 %), з мононенасичених – олеїнової кислоти (21,63 ± 0,03 %), з поліненасичених – лінолевої кислоти (6,45 ± 0,07 %). Найменше у складі ліпідів клітин виявлено ціс-,11,14-ейкозадієнової кислоти (0,04 ± 0,01 %). Сумарна кількість насичених жирних кислот у ліпідах мезенхімниї стовбурових клітин собаки становила 65,65± 0,02%), ненасичених жирних кислот – 34,35 ± 0,02 %. Моноєнові жирні кислоти визначено у кількості 24,46± 0,02%, а полієнові – 9,89± 0,02%. Індекс співвідношення поліненасичених жирних кислот ω 3 до ω 6 становить 0,40. Ліпіди мезенхімних стовбурових клітин  культури жирової тканини  характеризувалися нижчим умістом моноєнових ненасичених жирних кислот 24,46 ± 0,02; (P < 0,05), більшим вмістом ω3 жирних кислот 3,04 ± 0,02 %; (P < 0,05), меншим вмістом ω6 жирних кислот 6,86 ± 0,02 %; (P < 0,05) на противагу ліпідам стовбурових клітин культури червоного кісткового мозку

ANALYSIS OF THE STRUCTURAL AND MECHANICAL PROPERTIES AND MICROMORPHOLOGICAL FEATURES OF POLYMERIC FILMS BASED ON HYDROCOLLOIDS OF VEGETABLE ORIGIN USED FOR THE PRODUCTION OF BIODEGRADABLE POLYMERS

Modern research and technology approaches to the production of biodegradable polymeric materials based on renewable resources have been reviewed. It has been found that films prepared of cellulose, chitosan, gelatin, polypeptides, casein, soy, wheat, corn, rice, and maize are being commonly used at present. The structural and mechanical properties and micromorphological features of hydrocolloids of vegetable origin promising for the production of biodegradable polymers—starches, pectins, carrageenans, and agar—have been studied. It has been determined that, with respect to strength and suitability for use in films of individual components, all the studied hydrocolloids can be arranged in ascending order as follows: starches, carrageenans, pectins, agar. According to analysis of the structural and mechanical properties of the films, it has been shown that the best parameters are found for the samples based on pectin P1 and agar A2. The breaking stress for these materials is 52 and 77 MPa, respectively. The breaking strain is 11.5 and 8.0%, respectively. Analysis of the micromorphology has revealed the formation of surface microdiscontinuities in the films based on high methoxyl pectins P1 and P4 and unmodified corn starch S3 and the formation of wavy folds in the case of the films of kappa-carrageenan C1; these folds are formed during drying and decrease the tensile strength of the respective films. The found features will be used in the development of technologies for the production of biodegradable polymeric materials based on hydrocolloids of vegetable origin with enhanced performance and processing characteristics

EXPRESSION OF RECOMBINANT L-PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE IN ESCHERICHIA COLI

The pal gene coding for L-phenylalanine ammonia-lyase of Rhodosporidium toruloides (GenBank entry no. X12702.1) with optimized sequence was cloned into an expressing vector pET28a. Three parameters of expression (inductor type, duration, and temperature of induction) were optimized, which resulted in a strain producing recombinant L-phenylalanine ammonia-lyase with the maximal productivity, that is, 35 В± 1% to total cell protein, upon utilization of 0.2% lactose (according to Studier) induction during 18 h at 37В°C. The recombinant L-phenylalanine ammonia-lyase was found to be insoluble by 99%. Solubility of the protein did not improve upon utilization of 1 mM IPTG as an inductor instead of 0.2% lactose, or upon bacterium cultivation at various temperatures, that is 25В°C and 37В°C

INVESTIGATION OF METHODS OF DNA EXTRACTION FROM PLANT ORIGIN OBJECTS AND FOODS BASED ON THEM

For the last decades modern and highly efficient methods of determining the quality and safety of food products, based on the application of the latest scientific achievements were developed in the world. A special place is given to the methods based on achievements of molecular biology and genetics. At the present stage of development in the field of assessing the quality of raw materials and processed food products much attention is given to highly accurate, sensitive and specific research methods, the method of polymerase chain reaction (PCR) occupying a leading place among them. PCR is a sophisticated method that simulates the natural DNA replication and allows to detect a single specific DNA molecule in the presence of millions of other molecules. The key point in the preparation of material for PCR is the extraction of nucleic acids. The low content of DNA in plant material and the high concentration of secondary metabolites complicate the process of extraction. The key solution to this problem is highly effective method of extraction, which allows to obtain the DNA of adequate quality and purity. Comparative analysis of methods for the extraction of nucleic acids from fruit raw materials and products based on them was carried out in the study. General analysis of the experimental data allowed us to determine the most efficient method for DNA extracting. In the comparative analysis it was found out that to extract DNA from plant raw materials and food products prepared on their basis it is the most suitable to use "Sorb-GMO-A" reactants kit (set). The approach described gives us a brilliant opportunity to obtain deoxyribonucleic acid proper quality and purity

КАНЦЕРОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ГИДРОЛИЗАТОВ КОКОСОВОГО МАСЛА

At the previous stages of the study, products of coconut oil hydrolysis were obtained using various enzymes of lipolytic action. It has been shown that coconut oil hydrolysates are enriched with such fatty acids as capric, lauric and stearic. The carcinogenicity of the enzymatic coconut oil hydrolysates was studied using the Ames test, using Salmonella typhimurium bacteria as a test object. The results indicate the absence of an enzymatic hydrolyzate of coconut oil carcinogenic properties.На предыдущих этапах исследования были получены продукты гидролиза кокосового масла с применением различных ферментов липолитического действия. Показано, что гидролизаты кокосового масла обогащены такими жирными кислотами, как каприновая, лауриновая и стеариновая. Канцерогенность ферментативных гидролизатов кокосового масла изучали c применением теста Эймса, использующего бактерии Salmonella typhimurium в качестве тест объекта. Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии у ферментативного гидролизата кокосового масла канцерогенных свойств